一种伪狂犬病毒重组融合蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种伪狂犬病毒gB+gD重组融合蛋白，所述的重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的密码子优化后的编码重组融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述的重组融合蛋白由B细胞抗原表位、5条伪狂犬病毒gB蛋白的抗原表位多肽、3条伪狂犬病毒gD蛋白的抗原表位多肽、结合MHCII类分子的抗原表位、6His标签以及连接子组成。本发明专利技术同时公开了一种伪狂犬病毒疫苗，所述的疫苗含有所述的重组融合蛋白。本发明专利技术公开的重组融合蛋白具有良好的免疫原性。因此，本发明专利技术公开的重组融合蛋白能作为伪狂犬病毒亚单位疫苗的备选抗原，为伪狂犬病毒亚单位疫苗的研发提供了重要参考。了重要参考。了重要参考。

【技术实现步骤摘要】
一种伪狂犬病毒重组融合蛋白及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种伪狂犬病毒重组融合蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的一种以家畜和多种野生动物为主的急性传染病。被感染的动物多表现为高热、下痢、呼吸困难、生殖性障碍或者神经症状。
[0003]伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)又称猪疱疹病毒Ⅰ型、传染性延髓麻痹病毒、奇痒症病毒、奥叶兹基氏病病毒。是引起牛、羊、猪、犬和猫等多种家畜和野生动物发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的疱疹病毒。猫狗和其它家畜以及野生动物均有可能被感染，感染后发病症状通常为：发热、奇痒、脑脊髓炎和神经炎。人也有可能被感染，但一般不会发生死亡。
[0004]伪狂犬病病毒粒子呈椭圆形或圆形，其基因组为约150kb的线性双链DNA分子，带包膜的成熟病毒粒子的直径约150～180nm，包膜表面有呈放射状排列的刺突，其长度约8～10nm。疫苗接种是预防、控制甚至消灭伪狂犬病的主要措施之一。对PRV基因组序列测定发现其由72个阅读框组成，可编码70种蛋白，目前已发现和命名的有gB、gC.gD、gE、gG、gH、gl.gK、gL、gM、gN11种糖蛋白。编码gC、gE、gG、gl、gM和gN的基因为病毒复制非必需的，gB、gC、gD、gE和gl与病毒的毒力有关。此外，胸苷激酶、核苷酸还原酶、蛋白激酶等几种酶也与病毒的毒力密切相关，其中胸苷激酶是PRV最主要的毒力基因。糖蛋白gB、gD在免疫诱导方面最为重要。
[0005]目前，国内外临床应用的伪狂犬疫苗主要为灭活疫苗和活疫苗，其中灭活疫苗是将分离的野毒或强毒经灭活后，加佐剂制成的灭活疫苗；活疫苗主要为利用基因工程技术构建的基因缺失疫苗。灭活疫苗和活疫苗均为伪狂犬全病毒体外培养制备，存在散毒的风险。因此，需要，开发一款新型的伪狂犬疫苗。

技术实现思路

[0006]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种伪狂犬病毒gB+gD重组融合蛋白及其制备方法和应用。
[0007]因此，本专利技术一方面提供了一种重组融合蛋白，所述重组融合蛋白为伪狂犬病毒gB+gD重组融合蛋白，所述的重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]优选地，本专利技术所述的重组融合蛋白由B细胞抗原表位、5条伪狂犬病毒gB蛋白的抗原表位多肽、3条伪狂犬病毒gD蛋白的抗原表位多肽、结合MHC II类分子的抗原表位、6His标签以及连接子组成。
[0009]优选地，本专利技术所述的B细胞抗原表位的氨基酸序列为DKNSNDLVKFSKDSNP。
[0010]优选地，本专利技术所述的5条伪狂犬病毒gB蛋白的抗原表位多肽的氨基酸序列分别
为：
[0011]抗原表位多肽2：SLEEIDGAVSPGPSDAPDGEYGDLD；
[0012]抗原表位多肽7：DVIDRRGKCVSKAEYVRNNHKVTAF；
[0013]抗原表位多肽11：FYGLREGAHGEHIGYAPGRFQQVEH；
[0014]抗原表位多肽13：WDWAPKTRRVCSLAKWREAEEMIRD；
[0015]抗原表位多肽23：IEPCTGNHRRYFKLGGGYVYYEDYS。
[0016]优选地，本专利技术所述的3条伪狂犬病毒gD蛋白的抗原表位多肽的氨基酸序列分别为：
[0017]抗原表位多肽5：DPRQIFGRCRRRTTPMWWTPSADYM；
[0018]抗原表位多肽8：RVDQHRTYKFGACWSDDSFKRGVDV；
[0019]抗原表位多肽11：RPRPRPRPRPRPKPEPAPATPAPPG。
[0020]优选地，本专利技术所述的结合MHC II类分子的抗原表位的氨基酸序列分别为KLTNKHSPE。
[0021]优选地，本专利技术所述的连接子的氨基酸序列分别为EAAAK。
[0022]再一方面，本专利技术还提供了一种伪狂犬病毒疫苗，所述的疫苗含有权利要求1所述的重组融合蛋白。
[0023]本专利技术公开的重组融合蛋白具有良好的免疫原性。因此，本专利技术公开的重组融合蛋白能够作为伪狂犬病毒亚单位疫苗的备选抗原，为伪狂犬病毒亚单位疫苗的研发提供了重要参考。另外，本专利技术公开的伪狂犬病毒gB蛋白的5条抗原表位多肽和伪狂犬病毒gD蛋白的3条抗原表位多肽，具有较好的抗原性，为伪狂犬病毒gB蛋白和gD蛋白的研究提供了重要的参考，也为后续开发伪狂犬病毒gB蛋白和gD蛋白的单克隆抗体提供了重要的线索。
附图说明
[0024]图1伪狂犬病毒gB蛋白去除信号肽后的跨膜区分析结果。Inside表示胞内区，inside数值越大，表示该氨基酸位于胞内区的可能性越大；Outside表示胞外区，outside数值越大，表示该氨基酸位于胞外区的可能性越大；Transmembrane表示跨膜区，Transmembrane数值越大，表示该氨基酸在跨膜区的可能性越大。
[0025]图2伪狂犬病毒gD蛋白去除信号肽后的跨膜区分析结果。Inside表示胞内区，inside数值越大，表示该氨基酸位于胞内区的可能性越大；Outside表示胞外区，outside数值越大，表示该氨基酸位于胞外区的可能性越大；Transmembrane表示跨膜区，Transmembrane数值越大，表示该氨基酸在跨膜区的可能性越大。
[0026]图3伪狂犬病毒gB+gD重组融合蛋白SDS
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PAGE图，其中1是纯化后的病毒伪狂犬病毒gB+gD重组融合蛋白。
具体实施方式
[0027]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0028]除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0029]实施例1：伪狂犬病毒gB蛋白抗原表位多肽设计和筛选
[0030]从NCBI中选择一株近年分离鉴定毒株的gB蛋白(GenBank:WCG92583.1)，对其信号肽进行分析，该蛋白有信号肽的概率为:62.951％,信号肽类型：SP(Sec/SPI)；切割位点：58
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59,概率：27.180％；因此，从N端去除58个氨基酸。对去除信号肽的氨基酸序列进行蛋白质跨膜区分析，结果如图1所示，N端740氨基酸为胞外区，因此，去除N端741～855氨基酸，对剩余的740氨基酸的gB蛋白进行多肽库设计，设计合成了28条抗原表位多肽(如表1所示)。将28条抗原表位多肽分别免疫小鼠，采集小鼠血清进行ELISA抗体效价检测，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组融合蛋白，所述重组融合蛋白为伪狂犬病毒gB+gD重组融合蛋白，其特征在于，所述的重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的重组融合蛋白，其特征在于，所述的重组融合蛋白由B细胞抗原表位、5条伪狂犬病毒gB蛋白的抗原表位多肽、3条伪狂犬病毒gD蛋白的抗原表位多肽、结合MHCII类分子的抗原表位、6His标签以及连接子组成。3.根据权利要求2所述的重组融合蛋白，其特征在于，所述的B细胞抗原表位的氨基酸序列为DKNSNDLVKFSKDSNP。4.根据权利要求2所述的重组融合蛋白，其特征在于，所述的5条伪狂犬病毒gB蛋白的抗原表位多肽的氨基酸序列分别为：抗原表位多肽2：SLEEIDGAVSPGPSDAPDGEYGDLD；抗原表位多肽7：DVIDRRGKCVSKAEYVRNNHKVTAF；抗原表位多肽11：FYGLREGAHGEHIGYAP...

【专利技术属性】
技术研发人员：李龙，庄严兵，
申请(专利权)人：广东兴亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：