犬抗体恒定区中的突变制造技术

本发明专利技术大体上涉及犬抗体变体和其用途。具体来说，本发明专利技术涉及犬抗体的恒定区中用于改进各种特征的突变。各种特征的突变。各种特征的突变。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】犬抗体恒定区中的突变
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请案要求2021年1月28日提交的美国临时专利申请第63/142,774号的优先权及权益，所述美国临时专利申请以全文引用的方式并入本文中。


[0003]本专利技术大体上涉及犬抗体变体和其用途。具体来说，本专利技术涉及犬抗体的Fc恒定区中用于改进各种特征的一个或多个突变。

技术介绍

[0004]犬IgG单克隆抗体(mAb)将研发作为兽医学中的有效治疗剂。几年前，鉴别且表征四种犬IgG子类别(贝瑞隆(Bergeron)等人，2014，兽医免疫病理学(Vet Immunol Immunopathol.)第157(1
‑
2)卷，第31
‑
41页)。然而，并未对延长犬IgG的半衰期进行许多研究。
[0005]经由再循环机制，新生儿Fc受体(FcRn)以与其片段可结晶(Fc)区的pH依赖性相互作用延长IgG的半衰期。具体来说，跨越CH2及CH3域的界面的Fc区与细胞表面上的FcRn相互作用以调节IgG内环境稳定。IgG胞饮之后的酸性相互作用有助于此相互作用且因此避免IgG降解。内吞IgG接着再循环回至细胞表面且以碱性pH释放进入血流中，借此保持用于恰当功能的足够血清IgG。因此，IgG的药物动力学概况视其Fc区的结构及功能特性而定。
[0006]三种犬IgG子类别结合犬FcRn且已经与人类IgG类似物进行比较。犬IgG的半衰期仍需要进行充分研究，因为在无任何实验支持的情况下，吾人不能预期或预测其是否将与人类IgG紧密对准。
[0007]延长IgG的半衰期可允许抗体药物的不太频繁给药和/或较低剂量，其继而减少兽医问诊，提高患者顺应性，且减少浓度依赖性细胞毒性/不良事件。
[0008]因此，需要鉴别Fc恒定区中用以改进半衰期的突变。

技术实现思路

[0009]本专利技术涉及突变犬IgG，相对于野生型犬IgG，所述突变犬IgG提供更高的FcRn亲和力。具体来说，本申请案的本专利技术人已发现，取代一个或多个氨基酸残基惊人且出乎意料地增强对FcRn的亲和力。
[0010]在一个方面，本专利技术提供经修饰的IgG，其包括：相对于野生型犬IgG恒定域包括至少一个氨基酸取代的犬IgG恒定域，其中所述取代处于氨基酸残基247、252、254、256、311、312、314、431、434或439处，根据如Kabat中的Eu索引编号。
[0011]在一些实施例中，恒定域包括以下取代中的一者或多者：P247V、L252Y、L252P、L252W、L252A、L252D、L252G、L252H、L252I、L252K、L252M、L252N、L252Q、L252S、L252T、L252V、L252F、L252R、A254F、A254G、A254H、A254N、A254Q、A254R、A254W、A254C、A254D、A254I、A254K、A254L、A254M、A254P、A254S、A254T、A254V、A254Y、T256H、T256I、T256K、
T256L、T256Q、T256Y、T256A、T256C、T256D、T256F、T256G、T256M、T256N、T256P、T256R、T256S、T256V、T256W、T256E、Q311H、Q311R、Q311Y、Q311W、D312P、L314K、A431K、N434A、N434C、N434D、N434E、N434F、N434G、N434H、N434I、N434K、N434L、N434M、N434P、N434Q、N434R、N434S、N434T、N434V、N434W、N434Y及E439K。
[0012]在另一方面，本专利技术提供一种多肽，其包括：相对于野生型犬IgG恒定域包括至少一个氨基酸取代的犬IgG恒定域，其中所述取代处于氨基酸残基247、252、254、256、311、312、314、431、434或439处，根据如Kabat中的Eu索引编号。
[0013]在又一方面，本专利技术提供一种抗体，其包括：相对于野生型犬IgG恒定域包括至少一个氨基酸取代的犬IgG恒定域，其中所述取代处于氨基酸残基247、252、254、256、311、312、314、431、434或439处，根据如Kabat中的Eu索引编号。
[0014]在另一方面，本专利技术提供一种用于产生或制造抗体或分子的方法，所述方法包括：提供具有包括犬IgG恒定域的抗体的载体或宿主细胞，相对于野生型犬IgG恒定域，所述犬IgG恒定域包括一个或多个氨基酸取代，其中所述一个或多个取代处于氨基酸残基247、252、254、256、311、312、314、431、434或439或其组合处。
[0015]在另一方面，本专利技术提供一种融合分子，其包括：相对于野生型犬IgG恒定域包括至少一个氨基酸取代的犬IgG恒定域，其中所述取代处于氨基酸残基247、252、254、256、311、312、314、431、434或439处，根据如Kabat中的Eu索引编号。
[0016]在另一方面，本专利技术提供一种用于延长狗的抗体血清半衰期的方法，所述方法包括：向所述狗投予治疗有效量的包括犬IgG恒定域的抗体，相对于野生型犬IgG恒定域，所述犬IgG恒定域包括至少一个氨基酸取代，其中所述取代处于氨基酸残基252、254、256、311、434或439处，根据如Kabat中的EU索引编号。在一个示范性实施例中，犬IgG恒定域包括以下突变中的一者或多者：L252F、L252R、L252Y、L252M、A254T、A254S、T256E、Q311W、N434H、N434Y及E439K。在另一示范性实施例中，犬IgG恒定域包括选自以下群组的一个或多个突变：(1)L252F；(2)L252R、N434H及Q311W；(3)L252R；(4)Q311W；(5)L252R、A254T、T256E及N434H；(6)L252Y及A254T；或(7)L252M、A254S及E439K。
[0017]本专利技术的其它特征及优势将从以下实施方式实例及图式变得显而易知。然而，应理解，实施方式及特定实例虽然指示本专利技术的优选实施例，但仅以说明方式给出，因为所属领域的技术人员将由此详细描述显而易见本专利技术的精神及范围内的各种改变及修改。
附图说明
[0018]本专利或申请案文件含有至少一张彩制图。在申请且支付必要的费用后，专利局将提供具有彩色图式的此专利或专利申请公开案的复本。
[0019]图1展示IgG的域结构。
[0020]图2展示野生型(WT)人类IgG1 WT犬1gGA、WT犬IgGB、WT犬IgGC及WT犬IgGD的氨基酸序列的比对。氨基酸残基是根据如Kabat中的Eu索引编号。CH1、铰链、CH2及CH3氨基酸残基分别呈红色、紫色、蓝色及绿色。
[0021]图3展示犬Fc IgGB WT核苷酸序列。
[0022]图4展示某些犬IgG点突变增加狗的半本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经修饰的IgG，其包括：相对于野生型犬IgG恒定域包括至少一个氨基酸取代的犬IgG恒定域，其中所述取代处于氨基酸残基247、252、254、256、311、312、314、431、434或439处，根据如Kabat中的EU索引编号。2.根据权利要求1所述的经修饰的IgG，其中所述恒定域包括以下取代中的一者或多者：P247V、L252Y、L252P、L252W、L252A、L252D、L252G、L252H、L252I、L252K、L252M、L252N、L252Q、L252S、L252T、L252V、L252F、L252R、A254F、A254G、A254H、A254N、A254Q、A254R、A254W、A254C、A254D、A254I、A254K、A254L、A254M、A254P、A254S、A254T、A254V、A254Y、T256H、T256I、T256K、T256L、T256Q、T256Y、T256A、T256C、T256D、T256F、T256G、T256M、T256N、T256P、T256R、T256S、T256V、T256W、T256E、Q311H、Q311R、Q311Y、Q311W、D312P、L314K、A431K、N434A、N434C、N434D、N434E、N434F、N434G、N434H、N434I、N434K、N434L、N434M、N434P、N434Q、N434R、N434S、N434T、N434V、N434W、N434Y及E439K。3.根据权利要求1所述的经修饰的IgG，其中相比于具有所述野生型犬IgG恒定域的IgG，所述经修饰的IgG具有针对FcRn的更高亲和力。4.根据权利要求1所述的经修饰的IgG，其中所述经修饰的IgG为犬或犬类化IgG。5.根据权利要求1所述的经修饰的IgG，其中所述IgG为IgG
A
、IgG
B
、IgG
C
或IgG
D
。6.根据权利要求1所述的经修饰的IgG，其中所述IgG恒定域为IgG
A
、IgG
B
、IgG
C
或IgG
D
的恒定域。7.根据权利要求1所述的经修饰的IgG，其中所述IgG恒定域包括具有CH3域的Fc恒定区。8.根据权利要求1所述的经修饰的IgG，其中所述IgG恒定域包括具有CH2及CH3域的Fc恒定区。9.根据权利要求1所述的经修饰的IgG，其中所述野生型犬IgG恒定域包括以下SEQ ID NO.:1中所阐述的氨基酸序列。10.一种医药组合物，其包括根据权利要求1所述的经修饰的IgG及药学上可接受的载剂。11.一种套组，其包括于容器中的根据权利要求1所述的经修饰的IgG，及使用说明书。12.一种多肽，其包括：相对于野生型犬IgG恒定域包括至少一个氨基酸取代的犬IgG恒定域，其中所述取代处于氨基酸残基247、252、254、256、311、312、314、431、434或439处，根据如Kabat中的EU索引编号。13.根据权利要求12所述的多肽，其中所述恒定域包括以下取代中的一者或多者：P247V、L252Y、L252P、L252W、L252A、L252D、L252G、L252H、L252I、L252K、L252M、L252N、L252Q、L252S、L252T、L252V、L252F、L252R、A254F、A254G、A254H、A254N、A254Q、A254R、A254W、A254C、A254D、A254I、A254K、A254L、A254M、A254P、A254S、A254T、A254V、A254Y、T256H、T256I、T256K、T256L、T256Q、T256Y、T256A、T256C、T256D、T256F、T256G、T256M、T256N、T256P、T256R、T256S、T256V、T256W、T256E、Q311H、Q311R、Q311Y、Q311W、D312P、L314K、A431K、N434A、N434C、N434D、N434E、N434F、N434G、N434H、N434I、N434K、N434L、N434M、N434P、N434Q、N434R、N434S、N434T、N434V、N434W、N434Y及E439K。14.根据权利要求12所述的多肽，其中相比于具有所述野生型犬IgG恒定域的IgG的多肽，所述多肽具有针对FcRn的更高亲和力。
15.根据权利要求12所述的多肽，其中所述多肽为犬或犬类化IgG的多肽。16.根据权利要求12所述的多肽，其中所述IgG为IgG
A
、IgG
B
、IgG
C
或IgG
D
。17.根据权利要求12所述的多肽，其中所述IgG恒定域为IgG
A
、IgG
B
、IgG
C
或IgG
D
的恒定域。18.根据权利要求12所述的多肽，其中所述IgG恒定域包括具有CH3域的Fc恒定区。19.根据权利要求12所述的多肽，其中所述IgG恒定域包括具有CH2及CH3域的Fc恒定区。20.根据权利要求12所述的多肽，其中所述野生型犬IgG恒定域包括SEQ ID NO.:1中阐述的氨基酸序列。21.一种抗体，其包括：相对于野生型犬IgG恒定域包括至少一个氨基酸取代的犬IgG恒定域，其中所述取代处于氨基酸残基247、252、254、256、311、312、314、431、434或439处，根据如Kabat中的EU索引编号。22.根据权利要求21所述的抗体，其中所述恒定域包括以下取代中的一者或多者：P247V、L252Y、L252P、L252W、L252A、L252D、L252G、L252H、L252I、L252K、L252M、L252N、L252Q、L252S、L252T、L252V、L252F、L252R、A254F、A254G、A254H、A254N、A254Q、A254R、A254W、A254C、A254D、A254I、A254K、A254L、A254M、A254P、A254S、A254T、A254V、A254Y、T256H、T256I、T256K、T256L、T256Q、T256Y、T256A、T256C、T256D、T256F、T256G、T256M、T256N、T256P、T256R、T256S、T256V、T256W、T256E、Q311H、Q311R、Q311Y、Q311W、D312P、L314K、A431K、N434A、N434C、N434D、N434E、N434F、N434G、N434H、N434I、N434K、N434L、N434M、N434P、N434Q、N434R、N434S、N434T、N434V、N434W、N434Y及E439K。23.根据权利要求21所述的抗体，其中相比于具有所述野生型犬IgG恒定域的IgG的多肽，所述多肽具有针对FcRn的更高亲和力。24.根据权利要求21所述的抗体，其中所述多肽为犬或犬类化IgG的多肽。25.根据权利要求21所述的抗体，其中所述IgG为IgG
A
、IgG
B
、IgG
C
或IgG
D
。26.根据权利要求21所述的抗体，其中所述IgG恒定域为IgG
A
、IgG
B...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：硕腾服务有限责任公司，
类型：发明
国别省市：