用于检测MICA脱落片段的结构域特异性抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，公开了一种用于检测MICA脱落片段的结构域特异性抗体及其应用。本发明专利技术的2种抗体MICA

【技术实现步骤摘要】
用于检测MICA脱落片段的结构域特异性抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及一种用于检测MICA脱落片段的结构域特异性抗体及其应用。

技术介绍

[0002]随着现代免疫学的发展和完善，免疫疗法在肿瘤治疗领域中的进展备受瞩目。免疫疗法主要依赖于人体自身免疫系统杀伤肿瘤细胞。正常情况下，免疫系统能识别和杀伤肿瘤细胞。然而，肿瘤细胞通过下调表达肿瘤抗原、封闭抗原、低表达MHC分子等途径实现免疫逃脱。其中，肿瘤细胞表面MICA
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NKG2D系统是免疫细胞识别和杀灭细胞的重要途径之一。
[0003]MICA是一对肿瘤细胞表面用于介导细胞应激时信号转导的MHCI类分子的相关蛋白，蛋白结构包括α1、α2和α3结构域，其中膜远端的α1和α2结构域包含NKG2D的结合结构域，膜近端的α3结构域包含关键抗原表位以及MICA的水解脱落位点。MICA是最早发现的NKG2D配体，能与NKG2D结合激活免疫反应，通过MICA
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NKG2D系统同时参与调节固有性免疫应答和适应性免疫应答，对肿瘤的发生具有免疫监视的作用。肿瘤细胞，尤其是进展期肿瘤细胞，能够水解MICAα3，释放MICAα1、2，从而实现逃避免疫细胞识别和杀伤，实现免疫逃逸。已有研究发现，采用抗体封闭MICAα3结构域上的水解酶位点能有效阻断MICAα1、α2脱落，从而恢复NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力。相信用于封闭MICAα3结构域上的水解酶位点的MICA相关抗体药上市只是时间的问题。
[0004]另一方面，研究发现，肺癌、肠癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌等恶性肿瘤患者血清中都存在MICA，而人体正常组织、细胞一般不表达MICA。因此，人体血清中MICA含量可以作为肿瘤诊断和预后的一项新的临床参考指标。然而，国内外市面上尚无专门针对MICA脱落片段(α1、α2)的结构域特异性抗体以及相应检测试剂盒。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了用于检测MICA脱落片段的结构域特异性抗体及其应用。本专利技术的2种抗体MICA
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16和MICA
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18能特异性结合MICAa1或MICAα2结构域，能够准确、完整地识别MICA脱落片段。该2种抗体配对使用后的检测灵敏度更高，可用于检测血清、体液、细胞上清中MICA脱落片段，检测结果可作为一项肿瘤诊断和预后的新的临床参考指标。
[0006]本专利技术的具体技术方案为：第一方面，本专利技术提供了一种用于检测MICA脱落片段MICAα1结构域的特异性抗体，命名为MICA
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16，包含重链可变区和轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0007]第二方面，本专利技术提供了一种用于检测MICA脱落片段MICA α2结构域的特异性抗体，命名为MICA
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18，包含重链可变区和轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0008]第三方面，本专利技术提供了MICA
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16和MICA
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18在制备用于检测MICA脱落片段的试剂盒中的应用。
[0009]进一步地，该试剂盒可实现定量检测。
[0010]进一步地，所述MICA片段为血清、体液或细胞培养上清液中的MICA脱落片段。
[0011]第四方面，本专利技术提供了MICA
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16和MICA
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18在制备用于诊断与MICA脱落片段相关的疾病的试剂盒中的应用。
[0012]进一步地，所述疾病包括肺癌、肠癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌等恶性肿瘤。
[0013]进一步地，所述MICA片段为血清、体液或细胞培养上清液中的MICA脱落片段。
[0014]第五方面，本专利技术提供了一种用于检测MICA脱落片段MICA α1和MICA α2的双抗体夹心ELISA试剂盒，以MICA
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16作为捕获抗体，以偶联生物素的MICA
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18作为检测抗体；其中，所述MICA
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16包含重链可变区和轻链可变区。轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述MICA
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18包含重链可变区和轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0015]第六方面，本专利技术提供了一种用于诊断与MICA脱落片段MICA α1和MICA α2相关的疾病的双抗体夹心ELISA试剂盒，以MICA
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16作为捕获抗体，以偶联生物素的MICA
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1 8作为检测抗体；其中，所述MICA
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16的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述MICA
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16的氨基酸序列包含重链可变区和轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述MICA
‑
18的氨基酸序列包含重链可变区和轻链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0016]与现有技术对比，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术提供的2种抗体(MICA
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16和MICA
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18)的序列不同于现有文献或专利的报道，是2种全新的MICA抗体。
[0017](2)本专利技术提供的2种抗体能特异性结合MICAa1结构域或MICAα2结构域，与MICA脱落片段α1或α2的亲和力较强(亲和力＞10
诺
)，能够准确、完整地识别MICA脱落片段；同时MICA
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16与MICA
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18无相互阻断作用，不与MICAα3结构域结合，不影响MICA与MICAa3抗体的结合，也不影响NKG2D与MICA的结合(即MICA
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16、MICA
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18对MICA与NKG2D的结合无竞争性抑制作用)。
[0018](3)本专利技术提供的2种抗体配对使用后对于MICA脱落片段α1或α2的检测灵敏度更高(10～100pg/mL)。
附图说明
[0019]图1为MICA
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16分别与MICA全长和MICAα3结合对比图；图2为MICA
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18分别与MICA全长和MICAα3结合对比图；图3为MICA
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NKG2D与MICA
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16、MICA18结合情况图；图4为MICA
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16和MICA
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18抗体阻断情况下ZSH3#、ZSH4#和MICA结合情况图；图5为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测MICA脱落片段MICA α1结构域的特异性抗体，其特征在于：命名为MICA
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16，包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。2.一种用于检测MICA脱落片段MICA α2结构域的特异性抗体，其特征在于：命名为MICA
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18，包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。3.如权利要求1或2所述的特异性抗体在制备用于检测MICA脱落片段的试剂盒中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述MICA片段为血清、体液或细胞培养上清液中的MICA脱落片段。5.如权利要求1或2所述的特异性抗体在制备用于诊断与MICA脱落片段相关的疾病的试剂盒中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述疾病为肺癌、肠癌、乳腺癌、肝癌和前列腺癌。7.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述MICA片段为血清、体液或细胞培养上清液中的MICA脱落片段。8.一种用于检测MICA脱落片段MICA α1和MICA α2的双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于：以MICA
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【专利技术属性】
技术研发人员：朱永良，汪睿，杨秋霞，余琳，
申请(专利权)人：杭州博谱医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：