IL10RB结合分子及使用方法技术

本发明专利技术涉及生物活性分子，所述生物活性分子包括特异性结合至人IL10Rb的胞外结构域的单域抗体(sdAb)，包含这种抗体的组合物及其使用方法。用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】IL10RB结合分子及使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年8月5日提交的美国临时申请号63/061,562、2020年9月15日提交的美国临时申请号63/078,745和2021年1月11日提交的美国临时申请号63/135,884的优先权权益，其公开通过引用全文纳入本文以用于所有目的。


[0003]本专利技术涉及生物活性分子，所述生物活性分子包括特异性结合至IL10Rb的胞外结构域的单域抗体，包含该单域抗体的组合物及其使用方法。

技术介绍

[0004]抗炎细胞因子白细胞介素
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10(IL
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10)，也称为人细胞因子合成抑制因子(CSIF)，被归类为2型(类)细胞因子，一组细胞因子包括IL
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19、IL
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20、IL
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22、IL
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24(Mda
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7)和IL
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26、干扰素(IFN
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α、
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β、
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γ、
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δ、
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ε、
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κ、
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Ω和
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τ)和干扰素样分子(利米汀(limitin)、IL
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28A、IL
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28B和IL
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29)。人IL
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10是分子量为37kDa的同二聚体，其中每个18.5kDa单体包含178个氨基酸，其中前18个包含信号肽，以及形成两个分子内二硫键的两个半胱氨酸残基。
[0005]IL
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10受体是一种II型细胞因子受体，由α和β亚基组成，分别称为R1和R2。受体激活需要与α和β结合。IL
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10多肽的一个同二聚体与α结合，而同一IL
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10多肽中的另一个同二聚体与β结合。除了形成ILRb受体复合物的亚基外，IL10Rb受体亚基也是IL22、IL26、IL28和干扰素λL1受体复合物IFNL1变体的组成部分。IFNLR1/IL10RB二聚体是细胞因子配体IFNL2和IFNL3的受体，并介导其抗病毒活性。IL10Rb也称为CDW210B。与主要在造血细胞上表达的IL10Ra相反，IL10Rb受体亚基是普遍表达的。尽管IL10和IL10Ra之间的相互作用是特定的高亲和力相互作用，但IL
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10与IL
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10Rb的关联是低亲和力共享受体，有报告表明，IL
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10与IL10Ra的相互作用诱导IL10Rb的确认性变化，促进其与IL10的结合。
[0006]人IL10Rb(hIL10Rb)表达为325个氨基酸的前蛋白，包括19个氨基酸的N
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末端信号序列。氨基酸20
‑
220(成熟蛋白的氨基酸1
‑
201)对应于细胞外结构域，氨基酸221
‑
242(成熟蛋白的氨基酸202
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223)对应于22个氨基酸的跨膜结构域，氨基酸243
‑
325(成熟蛋白的氨基酸224
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306)对应于胞内结构域。hIL10Rb在UniProtKB数据库中被引为条目Q08334。鼠IL10Rb(mIL10Rb)表达为349个氨基酸的前蛋白，包括19个氨基酸的N
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末端信号序列。氨基酸20
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220(成熟蛋白的氨基酸1
‑
201)对应于胞外结构域，氨基酸221
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241(成熟蛋白的氨基酸202
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222)对应于21个氨基酸的跨膜结构域，氨基酸242
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349(成熟蛋白的氨基酸223
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330)对应于胞内结构域。mCD132在UniProtKB数据库中被引为条目Q61190。
[0007]IL
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10通过对T细胞、B细胞、巨噬细胞和抗原呈递细胞(APC)的作用，在免疫调节和炎症中表现出多效性作用。IL
‑
10由肥大细胞产生，抵消这些细胞在过敏反应部位产生的炎症效应。尽管IL
‑
10主要在巨噬细胞中表达，但在活化的T细胞、B细胞、肥大细胞和单核细胞中也检测到表达。IL
‑
10可以通过抑制活化的单核细胞和活化的巨噬细胞中IL
‑
1α、IL
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1β、IL
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6、IL8、TNFα、GM
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CSF和G
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CSF的表达来抑制免疫反应，还可以抑制NK细胞产生IFN
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γ。
IL10可以阻断NF
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κB活性，并参与JAK
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STAT信号转导通路的调节。
[0008]尽管单克隆抗体是用于检测和定量蛋白质的最广泛的试剂，但单克隆抗体是约150kDa的大分子，有时会限制其在多个试剂竞争近表位识别的试验中的使用。一类独特的免疫球蛋白，含有重链结构域，但缺乏轻链结构域(通常称为重链”抗体(HCAb))存在于骆驼科动物中，包括单峰驼、双峰驼、野生双峰驼，美洲驼、羊驼、骆马和原驼，以及软骨鱼类，如鲨鱼。HCAb的分离的可变结构域区域被称为VHH(反映其“可变
‑
重
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重”结构的缩写)或(Ablynx)。单域VHH抗体具有体积小(～12
‑
14kD)、分子量约为常规哺乳动物IgG类抗体的十分之一的优点，这有助于这些VHH分子与靶标的抗原决定簇的结合，而常规单克隆IgG形式可能无法接近这些决定簇(Ingram等.,2018)。此外，VHH单结构域抗体通常具有高热稳定性，有助于将药剂分布到难以或不可能维持冷链的地理区域。这些性质，特别是结合不需要重/轻链配对(如IgG抗体的情况)和简单制造(如在细菌表达系统中)的简单噬菌体展示发现方法，使得VHH单域抗体在多种应用中有用，包括成像剂和治疗剂的开发。

技术实现思路

[0009]本专利技术提供了特异性结合IL10Rb胞外结构域的多肽。
[0010]本专利技术提供了一种IL10Rb结合分子，其特异性结合IL10Rb的胞外结构域(例如，人或小鼠IL10Rb)。
[0011]在一些实施方式中，IL10Rb结合分子包括单域抗体(sdAb)，其特异性结合至人IL10Rb(hIL10Rb)的胞外结构域。
[0012]在一些实施方式中，hIL10Rb结合分子是sdAb，sdAb包含一组CDR，对应于CDR1、CDR2和CDR3，如下表1的行所示。
[0013]在一些实施方式中，hIL10Rb结合分子包含如下表1的行中所述的CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1、CDR2和CDR2相对于下表1的行中所述的序列可各自独立地包含至少90％(例如，91％、92％、93％、94％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种特异性结合至IL10Rb胞外结构域的IL10Rb结合分子。2.如权利要求1所述的IL10Rb结合分子，其中所述IL10Rb结合分子包括单域抗体(sdAb)。3.如权利要求2所述的IL10Rb结合分子，其中所述sdAb包含互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3，如下表的行中所示：
4.如权利要求2或3所述的IL10Rb结合分子，其中所述sdAb与选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、97、101和105中的任一多肽序列具有至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％同一性或100％同一性。5.如权利要求2所述的IL10Rb结合分子，其中所述sdAb包含互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3，如下表的行中所示：
6.如权利要求2所述的IL10Rb结合分子，其中所述sdAb与选自SEQ ID NO:136、144、148、152和156中的任一多肽序列具有至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：辛德凯因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：