健脑补肾制剂的含量测定方法技术

本发明专利技术提供了一种健脑补肾制剂的含量测定方法，包括：供试品加入甲醇和乙酸的混合溶液１０－５０ｍｌ进行前处理得到供试品溶液；制备对照品溶液；采用ＨＰＬＣ进行测定；按照外标方法进行计算，即得该健脑补肾制剂中甘草酸的含量；该方法准确、便捷。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供一种中药制剂的含量测定方法，尤其是健脑补肾制剂的含量 测定方法。
技术介绍
目前临床应用的健脑补肾中成药的剂型主要以口服液或者传统丸剂的形式提供药用。己有的健脑补肾口服液(健脑补肾口服液为中药成方制剂第16册收 载，标准号WS3-B-2209-96)的质量标准中只是对人参药材进行了简单的鉴别， 这种鉴别也只是简单的定性制剂中是否含有人参，而含量多少则无法确定，除 此以外，没有对任何成分进行含量和限度测定。健脑补肾制剂成分复杂，多达25味不同药材，有很多成分从本领域技术人 员公知的常识角度是可以检测的，例如，乙醇回流提取的5味药材中的人参可 以采用比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法法、GLC法测定人参皂苷或人参 皂苷元的含量；鹿茸可以采用紫外分光光度法测定鹿茸酸性多糖的含量，或者 采用高效液相色谱法测定碱基的含量；肉桂可以采用容量法及高效液相色谱法 测定其中的桂皮醛及肉桂酸的含量；砂仁采用气相色谱法测定挥发性成分的含 量，或者重量法测定挥发油的含量等等。针对水提的20味药材的提取物，理论上可以检测的包括牛蒡子，采用用高 效液相色谱法或者TLCS法测定牛蒡甙及甙元含量；金银花采用高效液相色谱 法测定绿原酸、咖啡酸含量；连翘采用高效液相色谱法测定连翘甙和连翘脂素， 或者薄层扫描法测定齐墩果酸以及熊果酸；酸枣仁采用薄层层析法测定白桦脂酸的含量，或者采用紫外分光光度法测定酸枣皂甙的含量；当归采用高效液相 色谱法测定阿魏酸的含量；茯苓采用高效液相色谱法测定去氢茯苓多糖的含量， 或者比色法测定茯苳多糖的含量；白芍采用高效液相色谱法测定芍药苷含量；白术采用gc法测定苍术酮、高效液相色谱法测定苍术醇苷m、 gc—ms法测定苍术酮、脱水羟基苍术内酯、苍术内酯、羟基苍术内酯等等。这些虽然都是本领域技术人员公知或者从现有文献中可以査阅到的，但是 在实际应用中确完全不同，并不是简单的理论套用就可以轻而易举的实现。有 些根本不用实验，采用现有的理论推理计算即可以被轻而易举的否定，例如川 牛膝药材中齐墩果酸、熊果酸，健脑补肾制剂中的川牛膝采用的水提取工艺， 而齐墩果酸和熊果酸均为脂溶性物质，水溶液中溶解度很低，在水提工艺中， 其转移率不足10%左右，再加上川牛膝药材中齐墩果酸和熊果酸本身含量就偏 低，只有不足0.1%，所以在健脑补肾制剂成品中含量极低几乎无法有效检测。 还有如连翘药材中连翘苷，在健脑补肾制剂中连翘药材所占处方量很小，药材 转移率即使按照100%折算，根据药典的方法，其取样量需要7g，这么大的取样 量，在实际操作中很难实现，因此测定该成分根本没有实际意义。靳维荣、高国敬等人在2006年02期《时珍国医国药 >>中曾发表过采用高 效液相色谱(HPLC)法测定健脑补肾丸中绿原酸含量的方法，用以控制健脑补肾 丸的质量；本专利技术人重现了该方法，具体如下 测定方法采用高效液相色谱法色谱条件色谱柱C18柱；检测波长327nm;流动相乙腈-0.4%磷酸(13:87)。对照品以及溶液的制备绿原酸购买自由中国药品生物制品检定所，纯度 为供含量测定用；取绿原酸对照品适量，用50%甲醇制成适当浓度对照品溶液。供试品制备方法称取健脑补肾制剂适量，精密加入50y。甲醇50ml，称重， 超声处理30分钟，称重，用50%甲醇补足损失的量，过滤，进样测定。结果绿原酸出峰时间较靠前，没有达到完全基线分离。调整流动相比例为乙腈-0.4%磷酸(10:90)，仍然没有改变出峰时间。本领域技术人员公知用于含量测定的色谱峰如果出峰时间过早，势必会 造成其与溶剂峰重合从而无法准确量取色谱峰的峰面积，直接导致含量测定结果不准确；虽然文献中声明该方法简便，快速准确，灵敏度高，适用于健脑补 肾丸的质量控制，但是本专利技术人在具体实施上述文献内容中发现色谱图中绿 原酸跟其他杂峰虽然到达了分离，但绿原酸峰拖尾严重无法实现自动积分，根 本不适用于含量测定，即使是对流动相进行很大的调整也无法改善脱尾，这也 从另一方面反应了该色谱条件的不成熟。另外，实验中还发现，绿原酸对照品 溶液在室温下1小时以后就开始分解导致含量下降明显，3小时后几乎下降50 %，即使是采用棕色瓶低温放置也很难避免对照品溶液的分解。由于测定中药 成分的色谱图保留时间相对较长，所以一般检测时间都很长，这种不稳定极不 利于含量测定的准确性，实际操作性差。人参作为健脑补肾制剂中的君药，是该制剂进行含量控制的首选；本专利技术 人在实验中也试图对健脑补肾中的人参进行含量测定，并作了如下工作测定方法采用高效液相色谱法色谱条件色谱柱C18柱(150x4.6 mm， 5[xm);检测波长选择203nm 作为检测波长；流动相乙腈一0.1%磷酸(19 : 400)。对照品以及溶液的制备人参皂苷Rgl购买自由中国药品生物制品检定所， 纯度为供含量测定用；取人参皂苷Rgl对照品适量，用甲醇制成适当浓度的对 照品溶液，供试品溶液的制备称取健脑补肾制剂内容物适量，研细，加甲醇适量，用索氏提取器回流提 取，提取液蒸干，残渣用20ml甲醇溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇 提取数次，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次10ml，弃去氨试液， 正丁醇液水浴蒸干，残渣作为供试品准备物；实验方法l、将上述供试品准备物用3ml水溶解，通过大孔吸附树脂柱上，用水100ml冲洗，弃去水液，再用30。/。乙醇40ml冲洗，弃去30%乙醇洗脱液， 继用70%乙醇70ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至5ml， 过0.45um微孔滤膜，20ul进样，结果人参皂苷Rgl跟其他杂峰得不到有效分离。实验方法2、将上述供试品准备物用70%乙醇少量溶解，加在中性氧化铝-大孔吸附树脂柱(上层中性氧化铝为填料，下层为大孔吸附树脂填料)上，用 70W乙醇70ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，并定容至5ml，过 0.45um微孔滤膜，吸20ul进样，结果人参皂苷跟其他杂峰也得不到有效分离。从上述实验的结果可以知道，采用普通的单泵的高效液相色谱仪器很难实 现对人参皂苷Rgl与其他成分的有效分离， 一般要求采用带有双泵或者四元泵 的仪器，通过梯度洗脱才能实现其与其他成分的有效分离，即使这样也无法准 确测定它的真实含量，分析原因人参皂苷Rgl紫外吸收在末端，响应值低，检 测灵敏度极低，数据不准确。本专利技术人还对其他药材含有的测定成分进行了含量测定方法学考察，都或 多或少的存在问题，例如，肉桂药材中含有桂皮醛和肉桂酸2种可以测定的成 分，但是由于肉桂酸的含量偏低，即使是质量上好的肉桂药材中，其肉桂酸的 含量也不高于0.1%，通过制剂的各种提取手段后发现，其在制剂成品中含量极 低几乎无法有效检测；桂皮醛的色谱峰虽然与其他杂峰分离较好，但是由于采 用乙酸乙酯提取而无法直接进样(对色谱柱损害过大)，需要挥干乙酸乙酯；在 实验中发现，如果采用水浴挥干，在水浴蒸干过程中发现桂皮醛损失很大，如 果采用低温挥干，需要时间至少12小时，而且也有损失，这种需要长时间操作 的检测方法，不但不利于生产过程中的质量控制，测定的准确性也很差。本发 明人曾试图采用其他溶剂提取(如乙醇、甲醇等)，但是发现杂质干扰大，都无 法实现准确定量的测定。山药药本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种健脑补肾制剂的含量测定方法，其为测定该健脑补肾制剂中的甘草酸的含量，该含量测定方法包括：　（１）供试品的前处理，包括取健脑补肾制剂，取健脑补肾制剂的量折合含有中药甘草的生药材约为０．１７ｇ－０．３４ｇ，加入甲醇和乙酸的混合溶液１０ －５０ｍｌ处理至少１０分钟，滤过，得到供试品溶液；　（２）对照品溶液的制备，称取对照品，加流动相溶解并稀释，该对照品浓度以甘草酸计算为０．００２－５ｍｇ／ｍｌ，即得，所述对照品选自甘草酸铵、甘草酸单铵、甘草酸双铵或甘草苷；所述的流动相 为选自甲醇或乙腈的酸溶液；　（３）采用ＨＰＬＣ进行测定，该ＨＰＬＣ的色谱条件包括，流动相为甲醇或乙腈的酸溶液；填充剂选自十八烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶、苯基硅烷键合硅胶；检测波长为２２０－４５０ｎｍ；　（４）吸取对照品 溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪测定，按照外标方法进行计算，即得甘草酸的含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姚俊华，
申请(专利权)人：姚俊华，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]