【技术实现步骤摘要】
一种猫杯状病毒假病毒的制备方法
[0001]本专利技术涉及一种猫杯状病毒假病毒的制备方法,属于基因工程
技术介绍
[0002]猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)属于杯状病毒科疱疹病毒属成员,为大部分猫科动物的高致病性的病原体,在猫科动物中广泛的流行,且呈世界性分布。FCV能通过鼻、口腔和关节等途径感染猫科动物,传染性很强,其主要感染猫,能够引起典型的呼吸道症状和口腔溃疡,此外还可以感染包括狮子、老虎、猎豹等在内的猫科野生动物,对猫以及珍稀野生动物的健康造成了很大的威胁。近期一些报道认为FCV病毒的致病性呈逐渐增强趋势,FCV强毒变异株不断爆发,不仅会引起上呼吸道疾病,还可引起脾脏、肝脏的病变,更严重的会引起致命的全身性疾病。
[0003]在对猫杯状病毒进行科学研究和药物筛选时,需要直接使用FCV病毒,但由于FCV病毒致病性高、传染性强,因此急需开发安全有效的FCV研究手段。假病毒是指一种反转录病毒能够整合另外一种不同种类病毒的囊膜糖蛋白,形成的具有外源性病毒的囊膜,而基因组保持着反转录病毒本身基因组特性的病毒。假病毒由于核酸分子的缺陷性而只有一个细胞感染周期,因此具有较高生物安全性,被广泛应用于病毒的研究、抗病毒制剂的筛选和疫苗的研发等方面,在病毒核酸检测时还可作为阳性对照标准品和内控标准品。
[0004]目前,尚无有关猫杯状病毒假病毒的构建方面的报道。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于解决上述现有技术的不足,提供一种猫杯状病毒假病毒的制 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种猫杯状病毒假病毒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)设计引物进行PCR扩增获得gp2基因,然后通过BP反应将其连接pDONR 221载体,得到含有gp2基因序列的入门克隆载体pDown
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{FCV
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gp2};(2)将携带启动子的pUp
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EF1A载体、含有gp2基因序列的入门克隆载体pDown
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{FCV
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gp2}以及pLV.Des2d.C/EGFP:T2A:Puro骨架载体通过LR反应进行重组,得到重组表达载体pLV[Exp]
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EGFP:T2A:Puro
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EF1A>{FCV
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gp2};(3)将重组表达载体pLV[Exp]
‑
EGFP:T2A:Puro
‑
EF1A>{FCV
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gp2}和慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,结束后离心,收集上清并过滤,得到滤液;(4)将滤液进一步离心,弃上清,得到猫杯状病毒假病毒。2.如权利要求1所述猫杯状病毒假病毒的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述PCR扩增的引物包括pD
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220915
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1567wtt
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PF1和pD
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220915
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1567wtt
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PR1,pD
‑
22...
【专利技术属性】
技术研发人员:高巍,任文陟,袁宝,陈健,权福实,杜崇涛,马一然,罗婷婷,
申请(专利权)人:吉林大学,
类型:发明
国别省市:
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