短肽Fmoc-L-Ala-L-Ala-OH的制备方法技术

本发明专利技术公开了短肽Fmoc

【技术实现步骤摘要】
短肽Fmoc
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L
‑
Ala
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L
‑
Ala
‑
OH的制备方法


[0001]本专利技术属于多肽合成
，涉及一种短肽的制备方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是因胰岛素绝对或相对分泌不足以及胰岛素利用障碍引发机体糖、蛋白质、脂质等代谢紊乱性疾病，目前已成为全球性公共健康问题，世界各国糖尿病患者人数逐年增多。作为一类新型降糖药物，索玛鲁肽、利拉鲁肽、贝那鲁肽、度拉糖肽等胰高血糖样肽
‑
1受体激动剂(GLP
‑
1RA)，不仅在降糖方面表现突出，而且在减重、心血管系统获益以及安全性等方面表现出了显著的优势，临床应用越来越广泛。
[0003]目前GLP
‑
1RA主要采用从C端至N端逐个氨基酸偶联制备主肽链多肽序列的固相合成法来制备，每一个氨基酸的引入涉及偶联和脱除Fmoc保护基，不仅操作繁琐，而且存在氨基酸消旋、氨基酸异构、氨基酸缺失(缺损肽或不完整肽)等风险。索玛鲁肽、利拉鲁肽、贝那鲁肽、度拉糖肽等多肽肽序中都含有
‑
Ala
‑
Ala
‑
短肽片段，研究发现，氨基酸缺失问题在逐个偶联Ala的过程中尤为明显。如果能预先制备
‑
Ala
‑
Ala
‑
短肽片段，通过短肽片段的偶联来制备多肽序列就能克服上述氨基酸缺失问题。
[0004]短肽片段的合成，可以采用固相合成法、液相合成法等。固相合成法具有合成速度相对较快、后处理相对简单的优势，但其需要昂贵的树脂、大量的溶剂以及大大过量的氨基酸，存在制备成本很高、短肽片段纯度较低等不足。如果所得短肽片段不经过纯化就与其他片段偶联，会使最终制得的多肽纯度更低，既增加纯化难度又增加制备成本，显然固相合成法不是制备
‑
Ala
‑
Ala
‑
短肽片段的最佳选择。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于通过液相合成法制备
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Ala
‑
Ala
‑
短肽片段，产物纯度高、收率高、耗时短、成本低，适合工业化大规模生产，所得短肽片段可用于生产多肽药物索玛鲁肽、利拉鲁肽、贝那鲁肽、度拉糖肽等。
[0006]经研究，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]1.短肽Fmoc
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L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
‑
OH的制备方法，采用液相合成法，包括以下步骤：
[0008](1)将N
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芴甲氧羰基
‑
L
‑
丙氨酸即Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OH与活化剂HOR在缩合剂存在下于有机溶剂中反应，制得活性酯Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR；
[0009][0010](2)将Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR与三甲基硅基即TMS临时性保护的L
‑
丙氨酸即H
‑
L
‑
Ala
‑
OH偶
联，制得短肽N
‑
芴甲氧羰基
‑
L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
丙氨酸即Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
‑
OH；
[0011][0012]上述HOR和Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR中的R为
[0013]优选的，所述步骤(2)是先将H
‑
L
‑
Ala
‑
OH在缚酸剂存在下于有机溶剂中用三甲基氯硅烷即TMS
‑
Cl进行临时性保护，再与Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR偶联，最后在酸性条件下脱除TMS保护基，制得短肽Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
‑
OH。
[0014]更优选的，所述短肽Fmoc
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L
‑
Ala
‑
L
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Ala
‑
OH的制备方法，包括以下步骤：
[0015](1)将Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OH和活化剂HOR溶于有机溶剂中，控制温度在0℃以下，滴加缩合剂，加毕，搅拌反应；反应结束后，固液分离，收集含有Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR的反应液，备用；
[0016](2)将H
‑
L
‑
Ala
‑
OH和TMS
‑
Cl溶于有机溶剂中，加入缚酸剂，搅拌反应，然后控制温度为
‑
5～0℃，滴加步骤(1)所得含有Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR的反应液，加毕，继续控温
‑
5～0℃搅拌反应；反应结束后，依次用1mol/LHCl溶液、5％ NaCl溶液萃洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，固液分离，液体浓缩，加入石油醚，搅拌结晶，固液分离，固体干燥，即得短肽Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
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OH。
[0017]在上述技术方案的步骤(2)中，本专利技术创造性地采用
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TMS对H
‑
L
‑
Ala
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OH进行临时性保护，生成TMS
‑
L
‑
Ala
‑
OTMS后再与Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OBt缩合，能完全避免杂质Fmoc
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L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
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OH的产生，而TMS保护基在缩合反应后通过简单的酸水洗涤就能脱除，可以简单高效地制得纯度高于90％的目标短肽Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
‑
OH。
[0018]优选的，所述H本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.短肽Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
‑
OH的制备方法，其特征在于，采用液相合成法，包括以下步骤：(1)将N
‑
芴甲氧羰基
‑
L
‑
丙氨酸即Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OH与活化剂HOR在缩合剂存在下于有机溶剂中反应，制得活性酯Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR；(2)将Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR与三甲基硅基即TMS临时性保护的L
‑
丙氨酸即H
‑
L
‑
Ala
‑
OH偶联，制得短肽N
‑
芴甲氧羰基
‑
L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
丙氨酸即Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
‑
OH；上述HOR和Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR中的R为2.如权利要求1所述的短肽Fmoc
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L
‑
Ala
‑
L
‑
Ala
‑
OH的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)是先将H
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L
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Ala
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OH在缚酸剂存在下于有机溶剂中用三甲基氯硅烷即TMS
‑
Cl进行临时性保护，再与Fmoc
‑
L
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Ala
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OR偶联，最后在酸性条件下脱除TMS保护基，制得短肽Fmoc
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L
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Ala
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L
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Ala
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OH。3.如权利要求2所述的短肽Fmoc
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L
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Ala
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L
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Ala
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OH的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OH和活化剂HOR溶于有机溶剂中，控制温度在0℃以下，滴加缩合剂，加毕，搅拌反应；反应结束后，固液分离，收集含有Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR的反应液，备用；(2)将H
‑
L
‑
Ala
‑
OH和TMS
‑
Cl溶于有机溶剂中，加入缚酸剂，搅拌反应，然后控制温度为
‑
5～0℃，滴加步骤(1)所得含有Fmoc
‑
L
‑
Ala
‑
OR的反应液，加毕，继续控温
‑
5～0℃搅拌反应；反应结束后，依次用1mol/L HCl溶液、5％NaCl溶液萃洗，收...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑征，张东海，杨再宽，孙梦春，杨大成，吴惠峰，杨强，仲良，姚波，谢波，
申请(专利权)人：成都郑源生化科技有限公司，
类型：发明
国别省市：