一种快速适合药动学研究的人血浆中抗炎药美沙拉秦浓度分析方法技术

本发明专利技术提供了一种快速适合药动学研究的人血浆中抗炎药美沙拉秦浓度分析方法。其包括：向血浆样本中加入稳定同位素内标溶液和甲醇进行涡流，离心后收集上清液，上清液中加入水，涡流混匀得到预处理后的待测样品；采用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种快速适合药动学研究的人血浆中抗炎药美沙拉秦浓度分析方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种快速适合药动学研究的人血浆中抗炎药美沙拉秦浓度分析方法；所述美沙拉秦用于治疗溃疡性结肠炎和克罗恩氏病等炎症性肠道疾病。

技术介绍

[0002]炎症性肠病是一组病因尚未完全阐明的慢性非特异性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。临床表现为持续或反复发作的腹痛、腹泻、黏液脓血便、里急后重和不同程度的全身症状。目前临床上常用的药物有5
‑
氨基水杨酸(5
‑
ASA)类、肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂以及生物抗体制剂等，其中5
‑
ASA制剂是轻中度溃疡性结肠炎患者的首选治疗。
[0003]美沙拉秦属于新型5
‑
ASA制剂，由于具有更好的耐受性，被广泛应用于临床溃疡性结肠炎和克罗恩氏病等炎症性肠道疾病的治疗。美沙拉秦主要作用机制为抑制前列腺素合成，控制前列腺素E2在人结肠粘膜的释放、抑制自然杀伤细胞活性、抑制白三烯生成、抑制中性粒细胞的脂肪氧化酶活性等。美沙拉秦最初由Ferring公司开发，1985年在美国正式上市。20世纪末美沙拉秦引入我国市场。2000年辉凌(Ferring)公司的缓释片、栓剂进口注册，以商品名颇得斯安(Pentasa)在我国用于临床。随后法国Ethypharm制药公司的缓释颗粒剂上市。随后德国霍克公司(Dr.Falk Pharma GmbH)的灌肠液、栓剂和肠溶片在我国获得注册，商品名为肠溶剂型是通过pH值依赖控制药物在结肠释放。为了加速其临床应用，需要一种简便、准确、快速的生物分析方法。
[0004]液相色谱
‑
串联质谱(LC
‑
MS/MS)技术结合了液相色谱高效的分离性能和串联质谱的高灵敏度、高特异性等优势，现已成为生物医药领域最推荐的定量分析技术手段。目前文献中报道的人血浆中美沙拉秦的分析方法较少。顾建琴等2007年采用柱前衍生化
‑
HPLC
‑
荧光法建立了人血浆中美沙拉秦的检测方法，该方法采用250μL人血浆样本，丙酸酐进行衍生化处理。姜悦等2016年开发了LC
‑
MS/MS检测人体内美沙拉秦的血药浓度方法，该方法采用0.1mL人血浆样本，定量下限为50ng/mL，采用的是非同位素内标喷昔洛韦，且分析时间较长。
[0005]现有技术中针对人血浆样本中美沙拉秦的浓度检测方法无法兼顾灵敏度、分析速度，使用的为非同位素内标，且部分技术前处理操作复杂等。这些缺点不利于临床检测大批量血浆样本中美沙拉秦的浓度的准确分析。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术中的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种快速适合药动学研究的人血浆中抗炎药美沙拉秦浓度分析方法。
[0007]本专利技术的目的通过以下技术方案得以实现：
[0008]一方面，本专利技术提供一种快速适合药动学研究的人血浆中抗炎药美沙拉秦浓度分析方法，其包括如下步骤：
[0009]向血浆样本中加入稳定同位素内标溶液和甲醇进行涡流，离心后收集上清液，上清液中加入水，涡流混匀得到预处理后的待测样品；
[0010]采用液相色谱
‑
串联质谱检测，将待测样品进行液相色谱分离，然后进行质谱检测，基于检测峰面积比绘制标准曲线获得回归方程，最终计算获得待测样品中的美沙拉秦浓度。
[0011]上述的方法中，优选地，所述稳定同位素内标溶液为美沙拉秦
‑
d3。
[0012]上述的方法中，优选地，所述预处理的具体方法包括：
[0013]向96孔板中加入50.0μL血浆样本，接着加入50.0μL的内标溶液和300μL的甲醇，涡流混匀后离心收集上清液，取60.0μL的上清液到另一干净96孔板中，接着加入240μL的水，涡流混匀，得到待测样品。
[0014]上述的方法中，优选地，所述离心的时间为10min，离心温度为4℃，离心速度为3900rpm。
[0015]上述的方法中，优选地，所述内标溶液的浓度为800ng/mL。
[0016]上述的方法中，优选地，进行液相色谱分离所采用的色谱柱为：Venusil MP
‑
C18(2)色谱柱，5.0μm，4.6
×
100mm；所采用的流动相为：A相：含5mM醋酸铵的水溶液，B相：甲醇。
[0017]上述的方法中，优选地，进行液相色谱分离洗脱条件为：
[0018]梯度洗脱：
[0019]0‑
0.50min，10％ B相，90％ A相；
[0020]0.5
‑
1.50min，10％ B相
→
70％ B相，90％ A相
→
30％ B相；
[0021]1.50
‑
2.40min，70％ B相，30％ A相；
[0022]2.50
‑
3.50min，10％ B相，90％ A相。
[0023]洗脱时间：3.50min；
[0024]流速：0.700mL/min；
[0025]进样量：4.00μL；
[0026]自动进样器温度：4℃；
[0027]柱温：40℃。
[0028]上述的方法中，优选地，进行质谱检测的质谱条件为：
[0029]离子源：电喷雾离子源(ESI)；
[0030]喷射电压：
‑
4500V；
[0031]喷雾气(Gas1)：60psi；
[0032]辅助气(Gas2)：60psi；
[0033]检测方式：负离子；
[0034]离子源温度：550℃；
[0035]碰撞诱导解离(CAD)：8；
[0036]气帘气(Curtain Gas)：40psi；
[0037]驻留时间：300ms。
[0038]上述的方法中，优选地，进行质谱检测采用定量分析离子对，所述定量分析离子对
为：
[0039]美沙拉秦m/z 152.0
→
108.0，碰撞能量(CE)
‑
20eV，去簇电压(DP)
‑
60V；
[0040]美沙拉秦
‑
d3 m/z 155.0
→
111.0，碰撞能量(CE)
‑
20eV，去簇电压(DP)
‑
60V。
[0041]上述的方法中，优选地，标准曲线具体制作为：
[0042]以待测样品理论浓度为横坐标，待测样品与内标物的峰面积比为纵坐标，进行回归分析计算获得直线回归方程。
[0043]另一方面，本专利技术还提供上述的方法在分析血浆样本中美沙拉秦浓度中的应用；所述美沙拉秦用于治疗溃疡性结肠炎和克罗恩氏病等炎症性肠道疾病。
[0044]本专利技术的有益效果：
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速适合药动学研究的人血浆中抗炎药美沙拉秦浓度分析方法，其包括如下步骤：向血浆样本中加入稳定同位素内标溶液和甲醇进行涡流，离心后收集上清液，上清液中加入水，涡流混匀得到预处理后的待测样品；采用液相色谱
‑
串联质谱检测，将待测样品进行液相色谱分离，然后进行质谱检测，基于检测峰面积比绘制标准曲线获得回归方程，最终计算获得待测样品中的美沙拉秦浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述稳定同位素内标溶液为美沙拉秦
‑
d3。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预处理的具体方法包括：向96孔板中加入50.0μL血浆样本，接着加入50.0μL的内标溶液和300μL的甲醇，涡流混匀后离心收集上清液，取60.0μL的上清液到另一干净96孔板中，接着加入240μL的水，涡流混匀，得到待测样品；优选地，所述离心的时间为10min，离心温度为4℃，离心速度为3900rpm。4.根据权利要求1～3所述的方法，其中，所述内标溶液的浓度为800ng/mL。5.根据权利要求1所述的方法，其中，进行液相色谱分离所采用的色谱柱为：Venusil MP
‑
C18(2)色谱柱，5.0μm，4.6
×
100mm；所采用的流动相为：A相：含5mM醋酸铵的水溶液，B相：甲醇。6.根据权利要求5所述的方法，其中，进行液相色谱分离洗脱条件为：梯度洗脱：0
‑
0.50min，10％B相，90％A相；0.5
‑
1.50min，10％B相
→
70％B相，90％A相
→<...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓泮，冯超，
申请(专利权)人：苏州熙萃医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：