本发明专利技术公开了一种低活性成分损失的乳制品的处理方法，属于食品加工及分析检测技术领域。乳制品的处理方法包括前处理、预处理和杀菌处理三个步骤，通过先向乳制品加入叠氮化钠并对其进行过滤处理，再对过滤后的滤液进行灭菌处理，在45℃条件下处理45～60min，不仅可以有效杀灭乳制品中的细菌，降低乳制品中的微生物含量，还能较大程度的保持乳制品中生物活性物质的活性与含量。本发明专利技术的处理方法简单可行，所需的设备和试剂种类简单。本发明专利技术提供的黄嘌呤氧化酶和乳过氧化物酶的测试方法简单，能够较为准确的检测出乳制品中黄嘌呤氧化酶和乳过氧化物酶的活性，为准确评估乳制品中活性物质的含量与活性提供了指导意义。性物质的含量与活性提供了指导意义。
【技术实现步骤摘要】
一种低活性成分损失的乳制品处理方法
[0001]本专利技术涉及一种低活性成分损失的乳制品处理方法，属于食品加工及分析检测
技术介绍
[0002]乳被认为能为人类婴儿提供最佳营养。与配方奶粉喂养的婴儿相比，乳喂养的婴儿具有更高的抵抗力，同时乳喂养有助于促进婴儿肌肉和脑的发育，这些益处都归因于乳中存在的各种营养素和生物活性蛋白。
[0003]在给新生儿服用乳之前，通常会对乳制品进行热处理，以减少乳制品中的细菌数量。目前，供体乳库中常见的巴氏灭菌方法是Holder巴氏灭菌(HoP)，即将乳制品在62.5℃下加热30min。然而，许多生物活性蛋白对热处理较为敏感，较高的温度会导致乳制品中生物活性蛋白免疫球蛋白A(IgA)、乳铁蛋白、黄嘌呤氧化酶(XO)、乳过氧化物酶(LPO)和溶菌酶的较大损失。IgA占总免疫球蛋白的90％，能够通过肠道将母亲的免疫力从母亲传递给婴儿，以保护他们免受病原体的侵害。乳铁蛋白是乳中生物活性蛋白含量最高的一种，具有抗菌、抗氧化和抗炎活性。由于其多功能特性，乳铁蛋白的含量和功能的受到了关注，例如重组乳铁蛋白。乳铁蛋白最重要的应用之一是将其添加到婴儿配方奶粉中作为补充剂。XO是乳脂肪球膜中的一种重要蛋白质，它在新生儿肠道中提供抗菌保护作用。LPO是过氧化物酶家族的一员，其活性与过氧化物的XO生成有关，在预防母亲乳腺炎和保护婴儿免受感染方面发挥着关键作用。溶菌酶是乳中的一种必需酶，与牛乳相比，其在乳中的浓度极高。这种酶能够水解革兰氏阳性菌的细胞壁，破坏N
‑
乙酰葡糖胺和N
‑
乙酰胞壁酸之间的糖苷键。
[0004]研究发现，生牛乳中IgA和乳铁蛋白的活性分别为358mg/L和316mg/L(平均值差)，与人乳中558mg/L和492mg/L(平均值)的活性相似。生牛乳中LPO和XO的活性(分别为149U/L和40U/L)远高于人乳样品，生牛乳中溶菌酶的活性(<1)远低于乳中的溶菌酶活性(6.82
±
0.22mg/L)。然而，在目前研究的婴儿配方奶粉中，生物活性物质如蛋白免疫球蛋白A(IgA)、乳铁蛋白、黄嘌呤氧化酶(XO)、乳过氧化物酶(LPO)和溶菌酶的含量特别低，IgA的含量最高仅为2mg/L左右，乳铁蛋白的含量最高也不超过2.5mg/L，XO均小于0U/L，LPO均小于2U/L，溶菌酶均小于1U/L。由此可见，在将牛乳或人乳加工成婴儿配方奶粉的过程中，上述生物活性物质的活性及含量有非常明显的损失，因此，研究一种低活性成分损失的乳制品的处理方法具有重要的意义。
[0005]另一方面，由于乳制品中XO和LPO的活性较低，采用传统的分光光度法很难准确检测出乳制品中XO和LPO的活性，因此，研发一种乳制品中黄嘌呤氧化酶和乳过氧化物酶的检测方法对准确评估乳制品中活性物质的活性有重要的指导意义。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的在于针对当前热处理的乳中活性成分含量损失大，检测结果不准确的问题，提供一种低活性成分损失的乳制品处理方法，以减小乳制品中活性成分的损失，同
时提供了一种乳制品中活性成分的检测方法，该方法能准确评估乳制品中活性物质的活性和含量。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供了一种低活性成分损失的乳制品的处理方法，包括如下步骤：
[0008](1)乳制品的前处理：向乳制品中加入质量浓度为0.01％的叠氮化钠，搅拌使其混合均匀；
[0009](2)乳制品的预处理：将步骤(1)得到的前处理后的乳制品在4℃的条件下存放2h，在环境温度为4℃、过滤压力为0.15MPa的条件下，采用孔径为30～100nm的微孔膜对其进行微孔过滤，收集滤液；
[0010](3)乳制品的灭菌处理：将步骤(2)得到的滤液在45℃的条件下加热45～60min，冷却后测试乳制品中微生物含量和活性成分。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，在步骤(2)中，还包括对收集到的滤液进行二次过滤的步骤，二次过滤时，保持环境温度为20～40℃，过滤压力为0.15MPa。二次过滤时使用的微孔膜的粒径与第一次过滤时相同，微孔膜孔径为30～100nm，优选30nm。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，在步骤(3)中，将1mL的乳样品放置在震荡水浴摇床中，热电偶检测温度变化，达到对应的温度时，将乳样品在水浴中维持45～60min。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述冷却为冰浴冷却。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，所述乳制品为人乳样品。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，乳制品的活性成分测试包括对乳制品进行免疫球蛋白A、乳铁蛋白、黄嘌呤氧化酶、乳过氧化物酶和溶菌酶的免疫活性检测，所述黄嘌呤氧化酶的免疫活性使用Amplex Red荧光法检测，具体检测步骤包括：
[0016](1)制备黄嘌呤氧化酶测定混合物：将936μL浓度为100mM的磷酸盐缓冲液、50μL浓度为10mM的次黄嘌呤溶液、3μL酶活性为200U/mL的辣根过氧化物酶和25μL浓度为10mM的Amplex Red荧光红染料混合，制备黄嘌呤氧化酶测定混合物，其中，次黄嘌呤溶液的pH为7.4；
[0017](2)制备黄嘌呤氧化酶空白混合物：将936μL浓度为100mM的磷酸盐缓冲液、50μL水和3μL酶活性为200U/mL的辣根过氧化物酶混合，制备黄嘌呤氧化酶空白混合物；
[0018](3)黄嘌呤氧化酶测定曲线和空白曲线的绘制：分别将50μL的乳制品添加到两个96孔微量滴定板中，并分别向两个滴定板中添加50μL的步骤(1)中得到的黄嘌呤氧化酶测定混合物和步骤(2)中得到的黄嘌呤氧化酶空白混合物，在发射波长590nm和激发波长544nm处分别测定两组滴定板中混合溶液的吸光度值，分别绘制吸光度值随时间的变化曲线，即得到黄嘌呤氧化酶测定曲线和黄嘌呤氧化酶空白曲线；
[0019](4)过氧化氢标准曲线的绘制：将25μL浓度为10μM Amplex Red荧光红染料、4μL酶活性为0.8U/mL的辣根过氧化物酶和936μL浓度为100mM的磷酸盐缓冲溶液混合，配制标准混合液，将50μL不同浓度的过氧化氢溶液与50μL的标准混合液反应，在发射波长590nm和激发波长544nm处测定吸光度值，绘制吸光度值随浓度的变化曲线，即过氧化氢标准曲线，其中过氧化氢溶液的浓度在0
‑
8μM范围内变化；
[0020](5)黄嘌呤氧化酶活性的计算：分别计算步骤(3)得到的黄嘌呤氧化酶测定曲线和黄嘌呤氧化酶空白曲线的斜率以及步骤(4)得到的过氧化氢标准曲线的斜率，分别记为
Slope1、Slope0和Slope2，根据如下公式计算黄嘌呤氧化酶的活性：
[0021]酶活性(U/L)＝(Slope1
‑
Slope0)/Slope2
[0022]在本专利技术的一种实施方式中，所述乳过氧化物酶的免疫活性采用Amplex Red荧光法检测，具体包括以下步本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种低活性成分损失的乳制品的处理方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)乳制品的前处理：向乳制品中加入质量浓度为0.01％的叠氮化钠，搅拌使其混合均匀；(2)乳制品的预处理：将步骤(1)得到的前处理后的乳制品在4℃的条件下存放2h，在环境温度为4℃、过滤压力为0.15MPa的条件下，采用孔径为30～100nm的微孔膜对其进行微孔过滤，收集滤液；(3)乳制品的灭菌处理：将步骤(2)得到的滤液在45℃的条件下加热45～60min，冰浴冷却后检测乳制品中微生物含量和活性成分。2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，在步骤(2)中，还包括对收集到的滤液进行二次过滤的步骤，二次过滤时，保持环境温度为20～40℃，过滤压力为0.15MPa。3.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，在步骤(3)中，将1mL的乳制品放置在震荡水浴摇床中，热电偶检测温度变化，当温度达到45℃时，将乳制品在水浴中维持45～60min。4.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述乳制品为人乳样品。5.根据权利要求1～4所述的处理方法，其特征在于，乳制品中活性成分的检测包括对乳制品进行免疫球蛋白A、乳铁蛋白、黄嘌呤氧化酶、乳过氧化物酶和溶菌酶的免疫活性检测，所述黄嘌呤氧化酶的免疫活性使用Amplex Red荧光法检测，具体检测步骤包括：(1)制备黄嘌呤氧化酶测定混合物：将936μL浓度为100mM的磷酸盐缓冲液、50μL浓度为10mM的次黄嘌呤溶液、3μL酶活性为200U/mL的辣根过氧化物酶和25μL浓度为10mM的Amplex Red荧光红染料混合，制备黄嘌呤氧化酶测定混合物，其中，次黄嘌呤溶液的pH为7.4；(2)制备黄嘌呤氧化酶空白混合物：将936μL浓度为100mM的磷酸盐缓冲液、50μL水和3μL酶活性为200U/mL的辣根过氧化物酶混合，制备黄嘌呤氧化酶空白混合物；(3)黄嘌呤氧化酶测定曲线和空白曲线的绘制：分别将50μL的乳制品添加到两个96孔微量滴定板中，并分别向两个滴定板中添加50μL的步骤(1)中得到的黄嘌呤氧化酶测定混合物和步骤(2)中得到的黄嘌呤氧化酶空白混合物，在发射波长590nm和激发波长544nm处分别测定两组滴定板中混合溶液的吸光度值，分别绘制吸光度值随时间的变化曲线，即得到黄嘌呤氧化酶测定曲线和黄嘌呤氧化酶空白曲线；(4)过氧化氢标准曲线的绘制：将25μL浓度为10μM Amplex Red荧光红染料、4μL酶活性为0.8U/mL的辣根过氧化物酶和936μL浓度为100mM的磷酸盐缓冲溶液混合，配制标准混合液，将50μL不同浓度的过氧化氢溶液与50μL的标准混合液反应，在发射波长590nm和激发波长544nm处测定吸光度值，绘制吸光...
【专利技术属性】
技术研发人员：王科瑜，周鹏，李雪，谢蕴奇，张萍萍，谢渊，张捷，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
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