本发明专利技术公开了一种血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用,特点是该长链非编码RNA为AL139294.1基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;非小细胞肺癌诊断标志物在制备非小细胞肺癌分子靶向药物或非小细胞肺癌诊断试剂盒中的应用,其诊断试剂盒包括一对用于检测血清外泌体中lncRNA AL139294.1基因表达量的特异性扩增引物,具体核苷酸序列如下:上游扩增引物:5'
【技术实现步骤摘要】
一种血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用
[0001]本专利技术属于分子生物学领域,尤其是涉及一种血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用。
技术介绍
[0002]2023年全球癌症数据显示,肺癌是死亡率最高的癌症类型。非小细胞肺癌(non
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small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的主要病理类型,约占肺癌病例的85%。据统计,NSCLC患者的五年生存率仅为20%
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30%。因为NSCLC在早期阶段往往无症状或症状不明显,患者在首次诊断时已处于晚期,失去手术机会,同时NSCLC治疗方案有限,导致患者预后差。因此,肺癌的早期筛查对提高患者生存率和降低肺癌死亡率至关重要。
[0003]目前,早期肺癌非侵入性筛查可以基于低剂量计算机断层扫描(computed tomography,CT)和液体活检生物标志物。其中液体活检因其微创、实时监测和易获得的优点在早期筛查、测量治疗反应和预测肺癌预后方面具有优势。临床上液体活检常见的肿瘤标志物有神经元特异性烯醇化酶(neuron
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specific enolase,NSE)、细胞角蛋白19片段、癌胚抗原和糖类抗原72
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4(carbohydrate antigen 72
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4,CA72
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4)等。但它们的灵敏度和特异度都不够高,例如NSE虽然是小细胞肺癌的首选标志物,但只有60%左右的小细胞肺癌患者NSE水平会升高;CA72
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4不仅对肺癌,对其它胃肠道癌、乳腺癌和卵巢癌也有不同程度的检出率。由此可见,探寻灵敏度和特异度更高的肺癌诊断标志物对提高肺癌早期筛查率至关重要。
[0004]外泌体是直径为40
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200nm的细胞外囊泡,具有脂质双层膜结构。外泌体通过将其内容物,包括微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non
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coding RNA,lncRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)、信使RNA(messenger RNA,mRNA)、DNA以及蛋白转运并释放到受体细胞,介导细胞与细胞间的交流通讯,从而影响受体细胞的生理和病理功能。在肿瘤患者中体内,正常细胞和肿瘤细胞皆可分泌外泌体到血液循环中,其中肿瘤细胞是肿瘤患者血液循环中外泌体的主要来源,也是肿瘤发生发展的主要驱动者之一。在肿瘤发展的各个阶段,肿瘤细胞分泌的外泌体通过转运其内容物(miRNA、lncRNA、circRNA等)介导细胞间交流通讯,从而广泛参与肿瘤生长、血管生成、低氧驱动的上皮间质转化、肿瘤转移、免疫逃逸和耐药性等。因此,外泌体及其内容物有可能成为肺癌诊疗的新分子靶标。LncRNA是长度大于200nt的非编码RNA,其主要从表观遗传、转录和转录后三个层面实现对基因表达的调控作用,从而广泛参与机体的生理和病理过程,尤其是肿瘤的发生发展。大量研究表明,长链非编码RNA在癌症发生发展中起重要作用,可作为液体活检的非侵袭性生物标志物。例如,外泌体lncRNA Sox2ot在胰导管腺癌患者中高表达,与胰导管腺癌患者预后差密切相关。目前,国内外还没有公开任何关于血清外泌体lncRNAAL139294.1作为诊断非小细胞肺癌生物标志物的研究报道。
技术实现思路
[0005]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种灵敏度和特异性高且与非小细胞肺癌的患病率呈正相关的血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用。
[0006]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用,所述的长链非编码RNA为AL139294.1基因。
[0007]进一步,所述的AL139294.1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]进一步,所述的非小细胞肺癌诊断标志物在制备非小细胞肺癌分子靶向药物或非小细胞肺癌诊断试剂盒中的应用。
[0009]进一步,所述的非小细胞肺癌诊断试剂盒包括一对用于检测血清外泌体中lncRNA AL139294.1基因表达量的特异性扩增引物,具体核苷酸序列如下:上游扩增引物:5'
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TGTCACAGCAGATGCCACAT
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3';下游扩增引物:5'
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CCCACTCGCTGCCTATAACA
‑
3'。
[0010]进一步,所述的诊断试剂盒还包括荧光定量PCR反应体系,其组成为:5μl的SYBR Green,1μl cDNA模板,0.5μl浓度为10μM的上游引物,0.5μl浓度为10μM的下游引物,ddH2O补充到10μl,荧光定量PCR反应条件如下:95℃10min;95℃15s,60℃30s,72℃30s,循环40次;95℃15s,60℃1min,95℃,30s。
[0011]与现有技术相比,本专利技术的优点在于:本专利技术首次公开了血清外泌体中lncRNA AL139294.1在制备非小细胞肺癌诊断标志物的应用以及用于检测与非小细胞肺癌相关的长链非编码RNAlncRNA AL139294.1的试剂盒,其通过SYBR Green荧光定量PCR检测受试者血清外泌体中lncRNA AL139294.1和GAPDH的表达,通过计算比较外泌体中lncRNA AL139294.1在非小细胞肺癌患者样本、肺炎患者样本和正常样本中的表达,通过计算外泌体中lncRNA AL139294.1的相对表达量参数以用于辅助诊断非小细胞肺癌。相对传统非小细胞肺癌检测技术具有操作简单、灵敏性高、特异性强、周期短等特点,有利于非小细胞肺癌的早期诊断和治疗。
附图说明
[0012]图1非小细胞肺癌患者血清外泌体中高表达lncRNAs的筛选;图2为在10例非小细胞肺癌患者血清外泌体中检测前45个上调最显著的lncRNAs;图3为lncRNA AL139294.1在健康对照组(n=40)、肺炎组(n=49)和非小细胞肺癌组(n=111)血清中的表达水平;图4为受试者工作特征曲线分析血清外泌体中lncRNA AL139294.1区分非小细胞肺癌患者与健康人的灵敏度和特异性,曲线下面积为0.915;图5为lncRNA AL139294.1在有无淋巴结转移(N0/N1
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N3),有无远处转移(M0/M1)和高低TNM分期(
Ⅰ‑Ⅱ
/
Ⅲ‑Ⅳ
)非小细胞肺癌患者中的表达水平。
具体实施方式
[0013]以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。具体实施例
[0014]1、在2019年至2022年期间,从宁波大学第一附属医院和宁波大学附属李惠利医院随机收集非小细胞肺癌(n=111)和肺炎(n=49)患者手术或任何治疗前的血清样本。从宁
波康宁医院收集无任何癌症史的健康人(n=40)的血清样本。本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用,其特征在于:所述的长链非编码RNA为AL139294.1基因。2.根据权利要求1所述的一种血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用,其特征在于:所述的AL139294.1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1或2所述的一种血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用,其特征在于:所述的非小细胞肺癌诊断标志物在制备非小细胞肺癌分子靶向药物或非小细胞肺癌诊断试剂盒中的应用。4.根据权利要求3所述的一种血清外泌体中长链非编码RNA作为非小细胞肺癌诊断标志物的应用,其特征在于:所述的非小细胞肺癌诊断试剂盒包括一对用于检测血清外泌体中lncRNA AL139294.1基因表达量的特异性扩增引物,具体核...
【专利技术属性】
技术研发人员:马欣怡,孟小丹,陈振华,赏月,陈伟,陈子源,
申请(专利权)人:宁波大学,
类型:发明
国别省市:
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