HPV检测引物组、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了HPV检测引物组、试剂盒及其应用，属于HPV病毒检测技术领域。本发明专利技术提供的HPV检测引物组包括如SEQ ID NO.1~27所示的引物，利用该引物组可对HPV16、HPV18、HPV33、HPV52、HPV58进行检测，且灵敏度高；本发明专利技术提供的含有该引物组的试剂盒，使用该试剂盒可实现对HPV的居家检测，便于及时进行干预治疗和控制病情，可在35min内完成检测反应，结果判断简便，仪器设备要求低，适用于基层医疗单位，具有发展为居家自测的潜力，同时保持了检测的低成本化，有助于宫颈癌的早筛早诊。有助于宫颈癌的早筛早诊。有助于宫颈癌的早筛早诊。

【技术实现步骤摘要】
HPV检测引物组、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及HPV病毒检测
，尤其涉及HPV检测引物组、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]宫颈癌（Cevical Cancer，CC）是女性最常见的癌症之一，而人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）的持续感染是宫颈癌的主要危险因素之一。HPV是一种无包膜双链环状DNA病毒，属于乳头瘤病毒科，有核心单拷贝的病毒基因组DNA及病毒蛋白衣壳构成。目前发现的HPV约有200种型别，分为高危型和低危型，其中高危型HPV（high
‑
risk HPV，HR
‑
HPV）感染被认为是宫颈癌发病机制中最主要的因素。全世界传播的HR
‑
HPV包括HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、70、73、82。
[0003]宫颈癌发病率和致死率较高，究其原因，是宫颈癌隐匿性较高，其通常在晚期才被发现，据统计全世界仍有近50%的患者诊断为局部晚期，但宫颈癌预防性筛查在发展中国家并未普及，造成宫颈癌发病率和致死率居高不下。WHO于2021年发布的宫颈癌筛查指南推荐HPV
‑
DNA检测作为宫颈癌筛查的首选筛查方法。因此，发展基于HPV
‑
DNA的宫颈癌快捷筛查方法，特别是针对HR
‑
HPV的识别，将宫颈病变的高危人群筛查出来，有助于个性化早筛早诊，对于提示宫颈癌风险，从而降低宫颈癌发病率和致死率具有重要意义。
[0004]传统的HPV的检测手段，如细胞学检测和镜检，存在场所（专业实验室）和人员（专业检测人员）的限制，且检测所需时间较长，不利于HPV筛查的推广。
[0005]现有技术中针对HPV的检测主要使用荧光定量PCR技术，其依赖于特定荧光仪器和专业人员的操作，不利于检测的推广和便捷化。并且现有产品存在灵敏度和特异性不高的问题，如专利CN112575123A，其检测灵敏度约1.25E+05 copies/mL，也可能会受其他病原体的干扰，在实际中可能导致出现漏检或假阳性现象。因此，HPV病毒检测的准确程度还需改进；另外，中国专利CN114107560A公开了一种使用LAMP技术进行HPV检测的引物组合及试剂盒，但其分别使用荧光法和染色体显色法进行检测，仍存在仪器要求高（荧光法）、在低浓度下判读困难及易出现假阴性（染色体显色法）的缺陷。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供HPV检测引物组，利用该引物组可对HPV进行检测，且灵敏度高；同时，本专利技术提供了含有该引物组的试剂盒，使用该试剂盒可实现对HPV的居家检测。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了HPV检测引物组，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物HPV16 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的引物HPV16 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物HPV16 LF；核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的引物HPV16 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的引物HPV16 LB；
核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的引物HPV16 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的引物HPV18 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的引物HPV18 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的引物HPV18 LF；核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的引物HPV18 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的引物HPV18 LB；核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的引物HPV18 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的引物HPV33 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的引物HPV33 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的引物HPV33 LF；核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的引物HPV33 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的引物HPV33 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示的引物HPV52 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示的引物HPV52 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示的引物HPV52 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示的引物HPV52 LB；核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示的引物HPV52 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示的引物HPV58 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示的引物HPV58 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示的引物HPV58 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示的引物HPV58 LB；核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示的引物HPV58 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：具有SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷酸序列经删除或增加一个或几个核苷酸，得到与所述核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列的衍生引物；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：具有SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷酸序列经核苷酸取代或修饰，得到与所述核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列的衍生引物；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：与SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷酸序列具有80%以上同源性或与与SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷酸序列功能相似的衍生引物；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：与SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷酸序列互补的引物。
[0008]优选的，所述HPV16 BIP引物的5
’
端标记有荧光基团；所述HPV16 LF引物的5
’
端标记有生物素；
所述HPV18 FIP引物的5
’
端标记有荧光基团；所述HPV18 LF引物的5
’
端标记有生物素；所述引物HPV33 LF的5
’
端标记有荧光基团；所述引物HPV33 BIP的5
’
端标记有生物素；所述引物HPV52 BIP的5
’
端标记有荧光基团；所述引物HPV52 LB的5
’
端标记有生物素；所述引物HPV58 BIP的5
’
端标记有荧光基团；所述引物HPV58 LB的5
’
端标记有生物素。
[0009]优选的，所述荧光基团为FAM或FITC。
[0010]本专利技术还提供了上述HPV检测引物组在制备检测试剂盒中的应用。
[0011]优选的，所述HPV的分型包括HPV16、HPV18、HPV33、HPV52和HP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.HPV检测引物组，其特征在于，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物HPV16 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的引物HPV16 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物HPV16 LF；核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的引物HPV16 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的引物HPV16 LB；核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的引物HPV16 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的引物HPV18 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的引物HPV18 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的引物HPV18 LF；核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的引物HPV18 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的引物HPV18 LB；核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的引物HPV18 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的引物HPV33 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的引物HPV33 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的引物HPV33 LF；核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的引物HPV33 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的引物HPV33 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示的引物HPV52 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示的引物HPV52 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示的引物HPV52 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示的引物HPV52 LB；核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示的引物HPV52 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示的引物HPV58 F3；核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示的引物HPV58 FIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示的引物HPV58 BIP；核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示的引物HPV58 LB；核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示的引物HPV58 B3；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：具有SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷酸序列经删除或增加一个或几个核苷酸，得到与所述核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列的衍生引物；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：具有SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷酸序列经核苷酸取代或修饰，得到与所述核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列的衍生引物；和/或，所述HPV检测引物组包括如下引物：
与SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷酸序列具有80%以上同源性或与与SEQ ID NO.1~27任意所示的核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈冬冬，李翔，曾彦达，陈海琴，童本福，
申请(专利权)人：江苏美克医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：