一种检测ZNF9致病基因突变的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测ZNF9致病基因突变的方法，涉及遗传病致病基因检测技术领域，包括以下步骤：S1、对被检测者的静脉采血进行基因组DNA提取；S2、提取靶向目标区域前后1kb的序列，使用工具Primer3进行引物序列设计，挑选出横跨靶向目标区域ZNF9基因中包含CCTG拷贝区域的引物序列对，得到扩增引物；S3、通过琼脂糖凝胶电泳，对扩增片段的大小进行比对，区分ZNF9基因是否发生突变；S4、使用LabChip GXTouch生物分析仪验证扩增片段大小。本发明专利技术利用ZNF9基因序列中不稳定的CCTG拷贝，在适当位置设计扩增引物，将包含CCTG重复序列的片段扩增出来，直接通过扩增产物的大小区分ZNF9基因是否发生突变；本发明专利技术操作简单方便，能高效区分ZNF9基因是否异常。区分ZNF9基因是否异常。区分ZNF9基因是否异常。

【技术实现步骤摘要】
一种检测ZNF9致病基因突变的方法


[0001]本专利技术涉及遗传病致病基因检测
，具体涉及一种检测ZNF9致病基因突变的方法。

技术介绍

[0002]ZNF9编码蛋白在微管介导的转运和囊泡功能中发挥作用，正常ZNF9基因序列中CCTG核苷酸序列有12
‑
44次拷贝，而当这种不稳定的序列拷贝数达到52
‑
86次，会导致肌强直性营养不良。肌强直性营养不良是一种常染色体隐性遗传病，属于多系统疾病。主要表现为近端肌无力、肌强直、心脏病和白内障，还伴有多汗、睾丸萎缩、胰岛素抵抗和糖尿病、中枢神经系统异常。携带该致病基因的青少年，成人，老年人均可发病，具体的严重程度在发病人群中差异很大。治疗方法也针对不同个体特征和症状而不同。
[0003]目前，现有技术中检测ZNF9基因的技术主要是基于某个突变位点的扩增和测序方法，但是，现有技术中的检测方法存在的显著缺点是步骤繁琐，费用昂贵。
[0004]为此，本专利技术旨在提供一种检测ZNF9致病基因突变的方法，以解决上述问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决上述问题，提供一种检测ZNF9致病基因突变的方法。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：
[0007]本专利技术提供了一种检测ZNF9致病基因突变的方法，包括以下步骤：
[0008]S1、对被检测者的静脉采血进行基因组DNA提取；
[0009]S2、提取靶向目标区域前后1kb的序列，并使用工具Primer3进行引物序列的设计(用于扩增ZNF9基因内含子1到外显子2序列中包含CCTG拷贝的引物ZNF9 Forward和ZNF9 Reward)，挑选出横跨靶向目标区域ZNF9基因中包含CCTG拷贝区域的引物序列对，得到扩增引物(通过聚合酶链式反应，将肌强直性营养不良的致病基因ZNF9的片段扩增出来)；
[0010]S3、正常ZNF9的扩增片段在1198bp
‑
1314bp之间，属阴性；而异常基因的扩增片段在1494bp
‑
15274bp，属阳性。通过琼脂糖凝胶电泳，对扩增片段的大小进行比对，区分ZNF9基因是否发生突变；
[0011]S4、使用LabChip GX Touch生物分析仪验证扩增片段的大小，实现ZNF9致病基因突变的检测。
[0012]进一步地，步骤S2中PCR反应扩增ZNF9片段中，使用的引物序列为：
[0013]ZNF9 Forward：AATATCTCAGTCACCAGGCAA，
[0014]ZNF9 Reward：GCCAGATCGTCCACACTTGAA。
[0015]进一步地，设计上述引物，将ZNF9基因中包含CCTG重复序列的片段扩增出来，扩增片段序列如SEQ ID NO.1所示。
[0016]SEQ ID NO.1：
[0017]AATATCTCAGTCACCAGGCAAGTGCTGCAGTATAACTAGGTACTACGT
[0018]CAGGTGCTAAGGTTAAGAGAGTATTTTCTTCACTGACTCCTCACTCCG
[0019]AGAATCCATTTTACAGCTTCATTGGTTTGGGTTATTCCAATTTTTTGAT
[0020]GTGAGTAAATAAATGACTTCTATTTGCCCAAAATAAAGCTTATATAGGC
[0021]CTTATAACCATGCAAATGTGTCCATTAAGTTGGACTTGGAATGAGTGA
[0022]ATGAGTATTACTGCCAGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGT
[0023]GTGTGTCTGTCTGTCTGTCTGTCTGTCTGTCTGTCTGTCTGTCTGCCTG
[0024]CCTGCCTGCCTGCCTGCCTGCCTGCCTGGCTGCCTGTCTGCCTGTCTG
[0025]CCTGCCTGCCTGCCTGCCTGCCTGCCTGTCTGTCTCACTTTGTCCCCT
[0026]AGGCTGGAGTGCAGTGGTATGATCTCGGCTCACTGCAACCTCCACCC
[0027]CCCGGGTTCAAGCGATTCTTCTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGAT
[0028]TACAGGCGCATGCCGCCATGCCCGGCTGTTTTTTGTATTTTTAGTAGAG
[0029]ACGGGGTTTCGCCATGTTGGCCAGACTGGTCTCAAACTCCTGACCTC
[0030]AGATGGTCCACCCGCTTCAGCCTCCCAAAGTGCTAGGATTACAGGCAT
[0031]GAGCCACCGTGCCCAGCCACTACCAATTATTTCTCTTAATGGATTTTCA
[0032]TTGACCCTAACCCTGTAAATTCCATCACTTTTATCAAGGTGTATATTATA
[0033]ATAAGTCTATAATACCCAATCATGTAGTTGTGTGATTATTTTATTTTTTT
[0034]GAGACAGAGTCTCAATGTTGCCCAGGCTGGAGTACAGTGGCACCATC
[0035]TCAGCTCACTGTAAGCTCCGCCTCCTGGGTTCACACCATTCTCCTGCC
[0036]TCAGCCTCCCAAGTAGCTGGGATTACAGGCGCCTGCCACTTCACCGG
[0037]GCTAATTTTTTGTATTTTTCGTAGAGACGGGGTTTCACCATGTTAGCCA
[0038]AGATGGTCTCGATCTCATGATCCACCCACCTCGGCCTCCCAAAGTGAT
[0039]GGGATTACTGGCGTGAGCCACCATGCCCAGCTATTTTTTTAACCAATAT
[0040]ATTAGCTAGCTTTTTTCCCCAGAATAATTTTCCAAAAATACATTTAATA
[0041]GAGAATAAAAGTTAAAAGAACTTTCAGTGGTTTAATGCTGTTACTTTT
[0042]AATATTTCAAAGATCTGACTGCAGCCATGAGCAGCAATGAGTGCTTCAAGTGTGGACGATCTGGC。
[0043]进一步地，步骤S2扩增ZNF9片段中，扩增条件为：预变性95℃，5min；变性95℃，1min；退火56℃，1min；延伸72℃，1min；充分延伸72℃，10min；循环数30。
[0044]进一步地，在步骤S1中采取外周静脉血于EDTA抗凝试管中，立即混匀，使用TIANGEN试剂盒RelaxGene Blood DNA 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测ZNF9致病基因突变的方法，其特征是：包括以下步骤：S1、对被检测者的静脉采血进行基因组DNA提取；S2、提取靶向目标区域前后1kb的序列，并使用工具Primer3进行引物序列的设计，挑选出横跨靶向目标区域ZNF9基因中包含CCTG拷贝区域的引物序列对，得到扩增引物；S3、通过琼脂糖凝胶电泳，对扩增片段的大小进行比对，区分ZNF9基因是否发生突变；S4、使用LabChip GX Touch生物分析仪验证扩增片段的大小，实现ZNF9致病基因突变的检测。2.如权利要求1所述的一种检测ZNF9致病基因突变的方法，其特征是：步骤S2中PCR反应扩增ZNF9片段中，使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：李生斌，李小明，
申请(专利权)人：西安华壹健康医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：