一种检测高危型人乳头瘤病毒的引物、引物探针组合物及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测高危型人乳头瘤病毒的引物、引物探针组合物及试剂盒。所述高危型人乳头瘤病毒为HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73和HPV82；所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：19～54所示；所述引物探针组合物包含核苷酸序列如SEQ ID NO：1～18所示的探针和上述引物。本申请还涉及一种检测高危型人乳头瘤病毒的试剂盒。本申请提供的技术方案克服了传统HPV检测试剂盒检测灵敏度低、特异性差、检测型别少、不能分型、耗时长、费用高和操作复杂的缺点，可以高灵敏度、高特异性、高通量、低成本且简便快速地检测样本中是否存在18种高危型人乳头瘤病毒，同时可区分HPV16和HPV18两种型别，为HPV的预防和治疗提供新的技术选择。为HPV的预防和治疗提供新的技术选择。为HPV的预防和治疗提供新的技术选择。

【技术实现步骤摘要】
一种检测高危型人乳头瘤病毒的引物、引物探针组合物及试剂盒


[0001]本专利技术涉及核酸检测
，具体地，涉及一种检测高危型人乳头瘤病毒的引物、引物探针组合物及试剂盒。

技术介绍

[0002]宫颈癌是仅次于乳腺癌的人类第二大妇科恶性肿瘤，全球每年有超过51万名妇女被确诊，并且其发病呈年轻化趋势。宫颈癌主要由高危型人乳头瘤病毒持续感染所致，在99.7％的子宫颈癌中都可检测到高危型人乳头瘤病毒。
[0003]人乳头瘤状病毒(Human Papillomavirus,HPV)是一种约含有8000个碱基对的双链DNA病毒。目前已经鉴定的HPV型别超过200种。大量的科学研究发现，依据不同HPV型别的致癌潜力，将HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68列为高危型别，HPV26、53、66、73、82列为潜在高危型；HPV6、11、40、42、43、44、54、61等为低危型别。低危型与性传播疣或尖锐湿疣有关，一般不诱发癌变。据报道，约有70％的宫颈癌是由HPV16、18型病毒感染导致的，其致癌风险远高于其它高危型HPV，因此指南及全球专家共识均明确若检出HPV16/18型阳性，则直接进行阴道镜转诊，若检出其他高危型HPV阳性，则通过细胞学分流再进行风险分层管理。
[0004]HPV的检测方法可分为测序法、反向点杂交法、流式荧光杂交法、基因芯片杂交法、PCR法(电泳鉴定结果)以及荧光定量PCR检测方法等。测序法的结果准确，但因其灵敏度低且操作较复杂，限制了其在临床上的大规模应用；反向点杂交法的市场认可度高，但存在操作繁琐、耗时久、假阳性率高、交叉污染等的缺点；流式荧光杂交法具有良好的特异性，但耗时久、费用昂贵、且对操作者的要求高；基因芯片杂交法的特异性高且结果直观可靠，但芯片的制作和使用成本均较高，所以尚难普及使用。传统的PCR法(电泳鉴定结果)扩增后的产物暴露容易造成交叉污染，步骤繁琐、假阳性率偏高。而上世纪90年代中期，在传统的PCR基础上发展起来的实时荧光PCR技术，不但灵敏度高、特异性强，且自动化程度高，几乎不会造成污染，可以进行HPV分型，这些优点给人乳头瘤病毒的早期诊断带来了福音。
[0005]对高危型HPV进行检测，可以及早发现HPV感染并及时治疗，进而极大的降低宫颈癌的发生率；可以预测受检者的发病风险度，决定其筛查间隔；用于手术后的追踪指导HPV疫苗的研究及使用。因此，建立针对高危型HPV的检测方法，同时区分HPV16、18型，对宫颈癌的预防、诊断和治疗具有重要意义。目前，HPV部分分型的试剂盒仍存在检测型别少、灵敏度低、对操作人员、仪器和环境要求高等的缺点。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中检测灵敏度低、特异性差、检测型别少、不能分型、耗时长、成本高、费用高和操作复杂的问题，本专利技术提供了一种检测高危型人乳头瘤病毒的引物、引物探针组合物及试剂盒。
[0007]本专利技术的第一个目的是提供一组检测高危型人乳头瘤病毒的引物。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供一种检测高危型人乳头瘤病毒的引物探针组合物。
[0009]本专利技术的第三个目的是提供所述引物或任一所述的引物探针组合物在制备检测人乳头瘤病毒的试剂盒中的应用。
[0010]本专利技术的第四个目的是提供一种检测高危型人乳头瘤病毒的试剂盒。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
[0012]本专利技术采用实时荧光定量PCR法，对18种高危型人乳头瘤病毒的L1基因设计特异性引物和探针，配以热启动DNA聚合酶等成分组成核酸扩增试剂，使用荧光PCR仪进行对待测样本的DNA进行扩增检测，HPV16、HPV18与其余16个型别使用不同的荧光通道，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值(Ct值)实现对未知样本的定性检测。本方法可实现HPV16和HPV18的分型检测。
[0013]一组检测高危型人乳头瘤病毒的引物，所述高危型人乳头瘤病毒为HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73和HPV82，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：19～54所示。
[0014]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：19～20所示的引物，检测HPV16；
[0015]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：21～22所示的引物，检测HPV18；
[0016]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：23～24所示的引物，检测HPV26；
[0017]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：25～26所示的引物，检测HPV31；
[0018]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：27～28所示的引物，检测HPV33；
[0019]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：29～30所示的引物，检测HPV35；
[0020]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：31～32所示的引物，检测HPV39；
[0021]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：33～34所示的引物，检测HPV45；
[0022]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：35～36所示的引物，检测HPV51；
[0023]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：37～38所示的引物，检测HPV52；
[0024]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：39～40所示的引物，检测HPV53；
[0025]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：41～42所示的引物，检测HPV56；
[0026]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：43～44所示的引物，检测HPV58；
[0027]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：45～46所示的引物，检测HPV59；
[0028]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：47～48所示的引物，检测HPV66；
[0029]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：49～50所示的引物，检测HPV68；
[0030]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：51～52所示的引物，检测HPV73；
[0031]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：53～54所示的引物，检测HPV82。
[0032]一种检测高危型人乳头瘤病毒的引物探针组合物，包含核苷酸序列如SEQ ID NO：1～18所示的探针和上述的引物。
[0033]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的探针，检测HPV16；
[0034]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的探针，检测HPV18；
[0035]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的探针，检测HPV26；
[0036]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的探针，检测HPV31；
[0037]所述核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组检测高危型人乳头瘤病毒的引物，其特征在于，所述高危型人乳头瘤病毒为HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73和HPV82，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：19～54所示。2.一种检测高危型人乳头瘤病毒的引物探针组合物，其特征在于，包含核苷酸序列如SEQ ID NO：1～18所示的探针和权利要求1所述引物。3.根据权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包含引物探针组1～3；所述各组间的探针的5
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端设有不同的荧光报告基团，3
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端设有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团为Texas Red、VIC或FAM中的任意一种；所述荧光淬灭基团为BHQ1、BHQ2或DQ1中的任意一种；所述引物探针组1包含核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的探针及核苷酸序列如SEQ ID NO：19～20所示的引物；所述引物探针组2包含核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的探针及核苷酸序列如SEQ ID NO：21～22所示的引物；所述引物探针组3包含核苷酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，王世东，陈书容，黄志文，杨晓雯，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：