一种用于评估移植肾排斥状态的诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种用于评估移植肾排斥状态的诊断试剂盒，属于生物医药技术领域。本发明专利技术通过获取外周血中各免疫细胞群的相对比例和绝对计数的数据，以及测量移植肾的超声血流动力学参数，包括肾叶间动脉阻力指数和肾主动脉阻力指数；通过判定公式y1＝

【技术实现步骤摘要】
一种用于评估移植肾排斥状态的诊断试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种用于评估移植肾排斥状态的诊断试剂盒，属于生物医药


技术介绍

[0002]目前，肾脏移植是终末期肾病最佳的肾脏替代疗法，但异体移植引起的免疫排斥反应至今仍然是威胁移植肾脏的最重要且无法避免的风险因素。包括排斥反应在内的多种移植肾并发症可以具备相似的临床表现，因此准确的评估移植肾排斥状态是做出对应治疗决策的前提。要明确判断移植肾排斥状态，目前唯一方法是肾脏穿刺活检。然而：一、穿刺活检这一方法的限制较多。移植肾穿刺具有绝对禁忌症，包括：具有明显出血倾向、重度高血压、精神病或不配合操作等。其相对禁忌症则包括活动性肾盂肾炎，肾结核，肾盂积水或积脓，肾脓肿，肾动脉瘤，肾肿瘤，过度肥胖等。心功能衰竭、严重贫血、低血容量、妊娠或年迈者也属于相对禁忌证。二、移植肾穿刺活检尽管已开展多年，技术已经成熟，但基于这项技术有创性的本质，穿刺仍然有多种并发症的风险。移植肾穿刺的潜在并发症具体可包括血尿，肾周脓肿，感染、动静脉瘘等。
[0003]移植肾穿刺的有创性操作过程使患者感到痛苦，对移植肾造成一定损伤，且具有一定风险。因此进行移植肾穿刺的患者依从度相对低，临床常有难以实现的情况。此外，肾穿刺的费用较高，检测周期较长。这些因素都限制了移植肾穿刺活检在临床上的应用，也对确定移植肾免疫状态的临床工作带来了挑战。因此，本
亟需获得一种可以替代移植肾活检的无创检测方法。在目前的临床工作中，已经有一些相关于移植肾排斥的无创指标。其中，肾移植术后常规进行的血清肌酐检验是监测移植肾状态的重要指标。血清肌酐是肾功能损伤的可靠标志，但它常常在急性排斥反应发生一段时间后才开始上升，因此缺乏及时诊断的能力。超过上限值或持续上升的肌酐水平固然提示移植肾可能出现排斥，但由于药物毒性、病毒感染等原因也可以造成肌酐上升，所以血清肌酐不能单独作为判断排斥的指标。据报道，使用血清肌酐时，诊断为移植肾排斥的AUC只有0.549。供者特异性抗体(donor derived antibody，DSA)在临床上也被用来检测移植物是否发生排斥。然而，DSA只与抗体介导的排斥反应有关，要确定是否发生其他类型的排斥反应则有困难。移植肾超声是临床常用的诊断手段，据报道肾脏血流的阻力指数(resistance index，RI)在发生排斥的肾脏中常有升高，但这一指标完全不能区分移植物排斥与急性肾小管坏死，因此也不尽人意。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为解决如何获得一种可替代移植肾活检的检测移植肾排斥状态的无创检测的方法及诊断试剂盒的技术问题。
[0005]为达到本专利技术的目的，本专利技术提供一种用于评估移植肾排斥状态的方法，包括以下步骤：
[0006]步骤1：对临床怀疑出现肾移植排斥的患者，抽取外周血5ml；
[0007]步骤2：获取外周血中各免疫细胞群的相对比例和绝对计数数据；
[0008]步骤3：移植肾超声使用临床超声，在抽取外周血的同日测量移植肾的超声血流动力学参数，包括肾脏叶间动脉阻力指数和肾主动脉阻力指数；
[0009]步骤4：判断急性排斥/无急性排斥时：
[0010]a)定义供肾类型为变量a，其中：活体供肾＝0，死亡供肾＝1；
[0011]b)定义外周血CD4绝对值为连续变量b，其单位为：个；
[0012]c)定义外周血CD8绝对值为连续变量c，其单位为：个；
[0013]d)判定公式为：y1＝
‑
1.228a+0.008b
–
0.009c；
[0014]i.当y1>0.5时，判定为急性排斥；
[0015]ii.当y1<0.5时，判定为无急性排斥；
[0016]步骤5：鉴别急性排斥的病理类型时：
[0017]a)定义外周血CD8比例为连续变量a，其单位为：％；
[0018]b)定义外周血CD8绝对值为连续变量b，其单位为：个；
[0019]c)定义移植肾叶间动脉阻力指数为连续变量c，其单位为：1；
[0020]d)定义移植肾主动脉阻力指数为连续变量d，其单位为：1；
[0021]e)判定公式为：y1＝0.28a
‑
0.018b+24.457c
–
23.714d；
[0022]i.当y1>0.5时，判定为ABMR(抗体介导的排斥反应，antibody mediated rejection)；
[0023]ii.当y1<0.5时，判定为TCMR(细胞介导的排斥反应，T cell mediated rejection)。
[0024]优选地，所述步骤2中获取外周血中各免疫细胞群的相对比例和绝对计数数据是通过使用Ficoll分层液分离外周血单个核细胞，吸取这部分细胞后使用磷酸缓冲盐溶液重悬，再次离心去除上清，洗净细胞外组分；使用6色TBNK试剂盒染色，并使用Trucount绝对计数管孵育，最后通过上流式细胞仪读取各免疫细胞群的相对比例和绝对计数数据。
[0025]本专利技术提供一种用于评估移植肾排斥状态的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒采用上述的一种用于评估移植肾排斥状态的方法。
[0026]本专利技术提供一种用于评估移植肾排斥状态病理类型的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒采用上述的一种用于评估移植肾排斥状态的方法。
[0027]本专利技术提供一种检测系统，包括上述的诊断试剂盒。
[0028]本专利技术提供一种存储装置，所述存储装置存储有多条指令，所述指令用于执行上述的一种用于评估移植肾排斥状态的方法中的检测步骤。
[0029]相比现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0030]本专利技术的主要目的是弥补目前的移植肾免疫状态诊断方法的有创性、繁琐性的缺点，使移植肾的免疫状态诊断无创化，且具备进行常规监测的潜能。
[0031]本专利技术提供了肾移植临床工作中诊断急性排斥反应的诊疗工具，优化了肾移植诊疗流程，提高了肾移植患者的生活质量。
附图说明
[0032]图1为联合使用患者基线和外周血免疫细胞诊断移植肾急性排斥的敏感性和特异性ROC曲线图。
[0033]其中A图为ROC曲线；B图为无排斥组和急性排斥组模型预测值。
[0034]图2为联合使用患者外周血免疫细胞和移植肾超声诊断移植肾排斥病理分型的敏感性和特异性ROC曲线图。
[0035]其中A图为ROC曲线；B图为TCMR组和ABMR组模型预测值。
具体实施方式
[0036]为使本专利技术更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下：
[0037]本专利技术的目的在于提供一种用于评估移植肾排斥状态的方法，包括以下步骤：
[0038]步骤1：对临床怀疑出现肾移植排斥的患者，抽取外周血5ml；
[0039]步骤2：获取外周血中各免疫细胞群的相对比例和绝对计数数据；
[0040]步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于评估移植肾排斥状态的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：对临床怀疑出现肾移植排斥的患者，抽取外周血5ml；步骤2：获取外周血中各免疫细胞群的相对比例和绝对计数数据；步骤3：移植肾超声使用临床超声，在抽取外周血的同日测量移植肾的超声血流动力学参数，包括肾脏叶间动脉阻力指数和肾主动脉阻力指数；步骤4：判断急性排斥
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无急性排斥时：a)定义供肾类型为变量a，其中：活体供肾＝0，死亡供肾＝1；b)定义外周血CD4绝对值为连续变量b，其单位为：个；c)定义外周血CD8绝对值为连续变量c，其单位为：个；d)判定公式为：y1＝
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1.228a+0.008b
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0.009c；i.当y1>0.5时，判定为急性排斥；ii.当y1<0.5时，判定为无急性排斥；步骤5：鉴别急性排斥的病理类型时：a)定义外周血CD8比例为连续变量a，其单位为：％；b)定义外周血CD8绝对值为连续变量b，其单位为：个；c)定义移植肾叶间动脉阻力指数为连续变量c，其单位为：1；d)定义移植肾主动脉阻力指数为连续变量d，其单位为：1；e)判定公式为：y1＝0.28a
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾亦臣，朱同玉，曹懿睿，戎瑞明，许明，童琳，戚贵生，赵彧锋，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：