一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒。该胶乳比浊生化试剂盒包括R1试剂、R2试剂和标准品，R2试剂包括胶乳微球

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒


[0001]本专利技术属于体外诊断生化检测
，具体涉及一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒。

技术介绍

[0002]自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)是由机体自身产生的抗体或致敏淋巴细胞破坏、损伤自身的组织和细胞成分导致组织损害和器官功能障碍的原发性免疫性疾病，是目前世界上主要的致残性疾病之一。自身免疫性疾病发病率高，发病率为全球总人口的3％
‑
5％。
[0003]自身免疫性疾病中有许多自身抗体，其中包括抗核抗体、抗心磷脂抗体、中性粒细胞胞浆抗体、抗线粒体抗体、抗红细胞抗体、抗血小板抗体、抗内皮细胞抗体、抗神经原抗体、类风湿因子、抗甲状腺球蛋白抗体、抗胰岛素受体抗体等。正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体而不会发生疾病，但如果自身抗体的滴度超过某—水平，就可能对身体产生损伤，诱发疾病。
[0004]自身抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）识别的靶抗原主要见于中性粒细胞和单核细胞胞浆颗粒内。ANCA包括cANCA（胞浆型）和pANCA（核周型）。其中胞浆型ANCA（cANCA）的主要靶抗原是蛋白酶3（PR3），抗PR3抗体主要见于韦格纳肉芽肿（WG，阳性率占80%），抗PR3抗体在临床上主要用于WG血管炎等抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）相关性血管炎的辅助诊断。
[0005]抗蛋白酶3抗体目前在临床及实验室的测定方法主要是酶联免疫法（ELISA）和间接免疫荧光法。ELISA检测抗PR3抗体，方便易行，特异性高，但检测范围和灵敏度都较低，检测所需时间较长，试剂多，操作繁琐，存在交叉污染影响检测结果以及试剂混用造成结果判读无效等问题。间接免疫荧光法灵敏度较高，但难以区分非特异性识别，易出现假阳性，操作难度相对更高，需要价格较昂贵的荧光显微镜，并且结果判定需要有经验的专业人员。另外，荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种灵敏度和准确度高，稳定好的用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒，所述胶乳比浊生化试剂盒包括R1试剂、R2试剂和标准品，所述R2试剂包括胶乳微球
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蛋白酶3偶联物，所述胶乳微球
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蛋白酶3抗原偶联物由第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3与胶乳微球混合孵育得到，所述第一生物素为能够与蛋白酶3的伯胺基相连的生物素，所述第二生物素为能够与蛋白酶3的羧基相连的生物素，所述第三生物素为能够与蛋白酶3的巯基相连的生物素。
[0008]根据一些具体实施方式，所述第一生物素为N
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羟基琥珀酰亚胺酯
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四聚乙二醇
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生物素。
[0009]根据一些具体实施方式，所述第二生物素为烷氧基胺
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四聚乙二醇
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生物素。
[0010]根据一些具体实施方式，所述第三生物素为马来酰亚胺
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聚乙二醇
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生物素。
[0011]优选地，所述第一生物素化蛋白酶3、所述第二生物素化蛋白酶3和所述第三生物素化蛋白酶3的质量比为（0.5~1.5）：（0.5~1.5）：1。
[0012]进一步优选地，所述第一生物素化蛋白酶3、所述第二生物素化蛋白酶3和所述第三生物素化蛋白酶3的质量比为（0.8~1.2）：（0.8~1.2）：1。
[0013]根据一些具体实施方式，所述第一生物素化蛋白酶3、所述第二生物素化蛋白酶3和所述第三生物素化蛋白酶3的质量比为1：1：1。
[0014]优选地，所述R2试剂中的胶乳微球和蛋白酶3的质量比为1：（0.01~0.5），例如1：0.01、1：0.05、1：0.1、1：0.15、1：0.2、1：0.25、1：0.3、1：0.35、1：0.4、1：0.45、1：0.5。
[0015]优选地，所述R2试剂还包括保存缓冲液，所述保存缓冲液为含有0.1wt%~1wt% 牛血清白蛋白、5g/L~15g/L蔗糖、0.05wt%~0.2wt% ProClin 300的浓度为40mM ~60mM的HEPES缓冲液，pH 值为7.4~7.8。
[0016]进一步优选地，所述R2试剂还包括保存缓冲液，所述保存缓冲液为含有0.4wt%~0.6wt% 牛血清白蛋白、8g/L~12g/L蔗糖、0.08wt%~0.15wt% ProClin 300的浓度为40mM~60mM的HEPES缓冲液，pH 值为7.4~7.8。
[0017]优选地，在所述R2试剂中，所述胶乳微球
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蛋白酶3偶联物的浓度为0.1mg/mL~1mg/mL，例如0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL、1.0mg/mL。
[0018]优选地，所述胶乳微球为采用链霉亲和素预处理后的胶乳微球。
[0019]优选地，预处理前的胶乳微球的平均粒径为50nm~500nm，例如50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、150nm、200nm、250nm、300nm、350nm、400nm、450nm、500nm。
[0020]优选地，预处理前的胶乳微球的表面含有羧基基团。
[0021]优选地，所述R1试剂为含有400mM~600mM氯化钠、0.1g/L~1g/L吐温
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20、0.01g/L~0.05g/L聚氧乙烯月桂醚、5g/L~15g/L聚乙二醇
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6000、0.01wt％~0.05wt％叠氮钠的浓度为40mM~60mM的Tris缓冲液，pH值为7.4~7.8。
[0022]进一步优选地，所述R1试剂为含有450mM~550mM氯化钠、0.4g/L~0.6g/L吐温
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20、0.01g/L~0.05g/L聚氧乙烯月桂醚、8g/L~12g/L聚乙二醇
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6000、0.01wt％~0.03wt％叠氮钠的浓度为40mM~60mM的Tris缓冲液，pH值为7.4~7.8。
[0023]优选地，所述标准品包括浓度范围为5AU/mL~300AU/mL的抗PR3抗体梯度标准品。
[0024]根据一些实施方式，所述R2试剂由如下制备方法制备得到：（1）采用第一生物素标记蛋白酶3得到第一生物素化蛋白酶3，采用第二生物素标记蛋白酶3得到第二生物素化蛋白酶3，采用第三生物素标记蛋白酶3得到第三生物素化蛋白酶3；（2）采用链霉亲和素预处理胶乳微球，然后保存在保存缓冲液中得到胶乳微球溶液；（3）将所述第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测抗蛋白酶3抗体的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述胶乳比浊生化试剂盒包括R1试剂、R2试剂和标准品，所述R2试剂包括胶乳微球
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蛋白酶3偶联物，所述胶乳微球
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蛋白酶3偶联物由第一生物素化蛋白酶3、第二生物素化蛋白酶3和第三生物素化蛋白酶3与胶乳微球混合孵育得到，所述第一生物素为能够与蛋白酶3的伯胺基相连的生物素，所述第二生物素为能够与蛋白酶3的羧基相连的生物素，所述第三生物素为能够与蛋白酶3的巯基相连的生物素。2.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述第一生物素为N
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羟基琥珀酰亚胺酯
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四聚乙二醇
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生物素；和/或，所述第二生物素为烷氧基胺
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四聚乙二醇
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生物素；和/或，所述第三生物素为马来酰亚胺
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聚乙二醇
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生物素。3.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述第一生物素化蛋白酶3、所述第二生物素化蛋白酶3和所述第三生物素化蛋白酶3的质量比为（0.5~1.5）：（0.5~1.5）：1。4.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中的胶乳微球和蛋白酶3的质量比为1：（0.01~0.5）。5.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述R2试剂还包括保存缓冲液，所述保存缓冲液为含有0.1wt%~1wt% 牛血清白蛋白、5g/L~15g/L蔗糖、0.05wt%~0.2wt% ProClin 300的浓度为40mM ~60mM的HEPES缓冲液，pH 值为7.4~7.8。6.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，在所述R2试剂中，所述胶乳微球
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蛋白酶3偶联物的浓度为0.1mg/mL~1mg/mL。7.根据权利要求1所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球为采用链霉亲和素预处理后的胶乳微球。8.根据权利要求7所述的胶乳比浊生化试剂盒，其特征在于，预处理前的胶乳微球的平均粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：张睿，
申请(专利权)人：苏州惠中生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：