杂交瘤细胞株L025及Taq酶抗体制造技术

本申请实施例属于生物技术领域，涉及杂交瘤细胞株L025及Taq酶抗体。本申请杂交瘤细胞株L025的单抗包括重链可变区VH和轻链可变区VL。本申请通过以天然Taq酶免疫小鼠，并通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞能够稳定的分泌抗体，且该杂交瘤细胞分泌的抗体属天然蛋白，稳定性较好。本申请对该抗体进行蛋白测序，获得其蛋白序列，最终得到Taq酶抗体的天然蛋白序列。最终得到Taq酶抗体的天然蛋白序列。

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞株L025及Taq酶抗体


[0001]本申请涉及生物
，尤其涉及杂交瘤细胞株L025及Taq酶抗体。

技术介绍

[0002]多聚酶链式反应简称PCR，是体外酶促合成特定DNA片段的一种方法，它能将目的基因或DNA片段在数小时内扩增十万至数百万倍。在传统的PCR反应体系中，各组分均是一次加入并进入循环，反应温度由室温(25℃)上升至高温(94～95℃)过程中，可能发生引物错配和二聚体的形成。若引物与模板中一些非靶位点的错配和引物之间形成了二聚体，其在Taq酶的作用下亦可延伸。这些非特异性产物也可在后续的PCR循环中继续扩增，使得非特异性产物不断积累。同时，也消耗了反应体系的各组分，最终使得PCR扩增的特异性产物大量减少。
[0003]热启动是一种在PCR反应中优化目标扩增产物，同时抑制非特异扩增的方法。目前常用的热启动PCR方法包括：其通过各种物理和化学方法，控制PCR反应的必须组分，如DNA聚合酶，使其直到反应混合物被加热到可以阻止非特异引导和引物聚合的温度后，再启动PCR来实现的达到有效扩增特异性PCR产物的目的。
[0004]Taq酶抗体可用于热启动PCR，其与Taq酶结合后抑制其DNA聚合酶活性。在进行PCR扩增体系中加入Taq酶抗体后，在高温变性前，Taq酶抗体会与Taq酶结合，抑制DNA聚合酶活性，能够在低温条件下有效地抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。当PCR反应体系温度到达最初的DNA变性温度，Taq酶抗体发生变性，DNA聚合酶活性恢复，以达到热启动PCR效果。
[0005]目前制备该抗体主要方法有免疫动物法，杂交瘤制备法，基因工程重组蛋白表达等。其中免疫动物法，耗时长，步骤及操作复杂，无法满足现代工业需求。基因工程重组蛋白表达法，获得的重组Taq酶抗体，稳定性较低。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供杂交瘤细胞株L025，本专利技术的杂交瘤细胞株L025是由骨髓瘤细胞和小鼠脾脏细胞在饲养细胞中培养获得的。
[0007]为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种杂交瘤细胞株L025，采用了如下所述的技术方案：
[0008]一种杂交瘤细胞株L025，所述杂交瘤细胞株L025的单抗包括重链可变区VH和轻链可变区VL，其中：
[0009]VH重链可变区的氨基酸如下：
[0010]DVHLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSNFGLHWVRQSPERGLEWVAYISNGSSNIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARSERPFFDGWGQGTTLTVSS；
[0011]VL轻链可变区的氨基酸如下：
[0012]DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSNLHSGVPSRFSGSGSG
TDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSNLPWSFGGGTKLEIK。
[0013]进一步的，单抗的氨基酸序列中包括八个可变区，具体如下：
[0014]VH重链可变区中的四个可变区分别为：
[0015]aaFR1：DVHLVESGGGLVQPGGSRKLSCAAS；
[0016]aaFR2：LHWVRQSPERGLEWVAY；
[0017]aaFR3：YYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYC；
[0018]aaFR4：WGQGTTLTVSS；
[0019]VL轻链可变区中的四个可变区分别为：
[0020]aaFR1：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSAS；
[0021]aaFR2：LNWYQQKPDGTVKLLIY；
[0022]aaFR3：NLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYC；
[0023]aaFR4：FGGGTKLEIK。
[0024]为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种Taq酶抗体，采用了如下所述的技术方案：
[0025]一种Taq酶抗体，所述Taq酶抗体包括上述的杂交瘤细胞株L025。
[0026]与现有技术相比，本申请实施例主要有以下有益效果：
[0027]本专利技术克服了通过免疫动物得到多克隆Taq抗体特异性较差，灵敏度较低的缺陷，同时也克服了通过基因工程重组蛋白表达Taq抗体稳定性较差的问题。本专利技术通过以天然Taq酶免疫小鼠，并通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞能够稳定的分泌抗体，且该杂交瘤细胞分泌的抗体属天然蛋白，稳定性较好。并对该抗体进行蛋白测序，获得其蛋白序列。得到Taq酶抗体的天然蛋白序列。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本申请中的方案，下面将对本申请实施例描述中所需要使用的附图作一个简单介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0029]图1是本申请杂交瘤细胞株L025和对照样的PCR反应图；
[0030]图2是本申请杂交瘤细胞株L025基因序列图。
具体实施方式
[0031]在通过示例性描述、实施例和结果进一步详细描述本公开的各种实施方案之前，应理解本公开的化合物、组合物和方法在应用中不限于以下描述中阐述的具体实施方案和实施例的细节。本文提供的描述仅用于说明目的，而无意在限制意义上进行解释。这样，本文所使用的语言旨在给予尽可能广泛的范围和含义，并且实施方式和实施例是示例性的，而不是穷举的。另外，应理解，本文所采用的措词和术语仅仅是出于描述的目的，除非另有说明，否则不应视为限制性的。此外，在下面的详细描述中，阐述了许多具体细节以便提供对本公开的更透彻的理解。然而，对于本领域普通技术人员将显而易见的是，可以在没有这些具体细节的情况下实施本公开。在其他情况下，没有详细描述本领域普通技术人员公知的特征，以避免说明书有不必要的复杂。申请人意图将对本领域普通技术人员显而易见的
所有替代、替换、修改和等同方式都包括在本公开的范围内。根据本公开内容，无需过度实验即可制备和实施本文公开的所有化合物、组合物、方法、应用和用途。因此，尽管已经根据特定实施方案描述了本公开的化合物、组合物和方法，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是，本文描述的化合物、组合物、方法以及方法的步骤或步骤的顺序可以有变化而不脱离本专利技术构思的概念、精神和范围。
[0032]说明书中提到的或在本申请的任何部分中引用的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物(包括公开文章)均以引用的方式明确地全文并入本文，其程度与每篇单独的专利或出版物被具体和单独地指出以引用方式并入的程度相同。
[0033]除非本文另有定义，否则与本公开内容结合使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另外要求，否则单数术语应包括复数并且本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株L025，其特征在于，所述杂交瘤细胞株L025的单抗包括重链可变区VH和轻链可变区VL，其中：VH重链可变区的氨基酸如下：DVHLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSNFGLHWVRQSPERGLEWVAYISNGSSNIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARSERPFFDGWGQGTTLTVSS；VL轻链可变区的氨基酸如下：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSNLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSNLPWSFGGGTKLEIK。2.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株L025，其特征在于，所述单抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，黄黉，梁国立，卢杰锋，何祖强，张盈盈，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：