本发明专利技术提供了一种紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,通过在血浆中加入10~18.76g/L氨基酸作为灭活保护剂,然后在紫外线照射下进行灭活。在有效灭活血浆中病毒的同时,降低血浆蛋白中有效蛋白成分的破坏,减少血浆中凝血因子损失,且经灭活后血浆中残留的氨基酸对人体无害,能提供使用安全的血浆制品,可快速用于临床。临床。
【技术实现步骤摘要】
一种紫外线照射灭活血浆中病毒的方法
[0001]本专利技术涉及血液制品病毒灭活
,特别涉及一种紫外线照射灭活血浆中病毒的方法。
技术介绍
[0002]临床实践证实,多种病毒可经输血传播,引起输血后病毒性传染病。含有多种病毒抗体的高效价血浆作为特异性免疫球蛋白及凝血因子的起始原料,其主要来源于国家批准的企业单采浆站。我国原料血浆安全性受到严格的控制。虽然每份血浆在采集之前都经过严格的病毒等病原体检查程序,但是由于病毒的未知性及检查手段的限制,原料血浆不能保证绝对安全。
[0003]目前血浆病毒灭活的方法主要包括:S/D灭活法、亚甲蓝光化学处理法、补骨脂素光化学处理法、紫外线照射法等方法。S/D灭活主要针对多人份冰冻混合血浆,利用1%TNBP和1%TritonX
‑
100在30℃孵育4小时灭活脂包膜病毒。亚甲蓝光化学处理法是常用的处理单袋血浆方法,利用1μM亚甲基蓝和白色荧光45000lux(51)照射1小时,或用低压钠灯200J/cm2照射20分钟,该方法能灭活脂包膜病毒,且尚无完全去除亚甲基蓝(细菌诱变剂)的方法。补骨脂素光化学处理法实施过程中为避免副反应发生,需要在厌氧条件下进行,对环境要求较高。紫外线照射灭活血浆病毒的原理是:紫外线通过对病毒、细菌的DNA、RNA起作用,可使DNA链上的胸腺嘧啶与胸腺嘧啶、胸腺喀啶与胞密啶及胞嘧啶与胞嘧啶之间形成二聚体,对RNA的影响在于它能使之产生水化合物和尿密啶二聚体。因此,当细菌或病毒受到紫外线照射之后,其核蛋白和DNA强烈吸收照射能,引起DNA链断裂,核酸和蛋白的交联被破坏,从而导致病毒或细菌死亡。紫外线可分为3个波段:A波段320~380nm(UVA),B波段290~320nm(UVB),C波段190~290nm(UVC),大部分细菌和病毒接受的累积紫外剂量达到20mJ时,其灭活率可以高达99%以上。其中253.7nm的紫外线能有效破坏微生物的遗传物质(DNA或RNA),使细菌和病毒等无法完成遗传物质的复制和转录,从而杀灭细菌病原体,杜绝传染源;但是紫外线在杀灭细菌病毒的同时会对血浆蛋白分子中的氢键产生破坏作用,影响蛋白质二级结构的完整性,导致蛋白质变性、失活、效价降低等。以上血浆病毒灭活方法均不同程度存在灭活后化学试剂残留、或者病毒灭活不彻底的现象。
[0004]氨基酸不仅仅是构成蛋白质的结构单元,而且对蛋白质结构的维持和功能的发挥具有重要作用。例如,甘氨酸即α
‑
氨基乙酸,属于不带电荷的极性氨基酸,是一种非必需氨基酸,含一个氨基和一个羧基。由于其分子小,所以易于在蛋白中作为灵活的连接区,利于稳定天然蛋白质结构并提高蛋白质制剂的稳定性。精氨酸作为一种极性带正电的双性氨基酸,一端带有胍基,可形成多重氢键,其多用作蛋白质复性、聚集抑制和柱层析的通用溶剂添加剂。精氨酸具有抑制蛋白质聚集但不破坏蛋白质稳定性的能力,通常作为蛋白稳定剂。盐酸精氨酸在生物药品的生产过程中作为蛋白质聚集抑制剂可用做液体和冷冻干燥制剂中蛋白质药物的稳定剂。
技术实现思路
[0005]有鉴于此,本专利技术旨在提出一种紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,通过在血浆中添加对人体无害的氨基酸,有效灭活血浆蛋白中存在的各种病毒,且维持灭活过程中凝血因子结构的完整性,为血液制品安全生产及血浆安全注射提供有效具体的解决方法。
[0006]为达到上述目的,本专利技术的技术方案是这样实现的:
[0007]一种紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,在血浆中加入10~18.76g/L氨基酸作为灭活保护剂,然后在紫外线照射下进行灭活。
[0008]进一步的,所述紫外线照射的强度为160~180J/m2。
[0009]进一步的,所述紫外线照射的时间为30~60s。
[0010]进一步的,所述氨基酸选自甘氨酸、盐酸精氨酸、精氨酸中的至少一种。
[0011]进一步的,所述氨基酸为盐酸精氨酸。
[0012]进一步的,所述紫外线照射灭活血浆中病毒的方法包括如下步骤:
[0013]S1.将单份或多份血浆在2~8℃混合;
[0014]S2.计量血浆的体积,在温度为25
±
2℃的条件下,使用孔径为1μm的滤板进行超滤,得到血浆滤液;
[0015]S3.在所述血浆滤液中加入氨基酸,并使血浆滤液中氨基酸最终质量分数为10~18.76g/L;
[0016]S4.用紫外吸收分光光度计在254nm处测血浆滤液的吸收因子,根据所测得的吸收因子确定紫外线照射的剂量范围。
[0017]进一步的,所述血浆来源于人、猪、犬、鼠、牛、马血浆中的任意一种。
[0018]血浆可以治疗各种凝血因子缺乏性疾病,也适用于某些免疫缺陷患者。鉴于血浆的重要作用,需要确保血浆中不含病毒,且能保持血浆中凝血因子的活性。氨基酸作为一种蛋白质的非特异性稳定剂,在紫外线灭活过程中对血浆蛋白可以起到一定的保护作用。氨基酸的结构、电荷分布及形成多重氢键的能力可以保护血浆中蛋白分子的氢键,维持灭活过程中蛋白质结构的完整性。本申请人发现利用紫外线照射过程中,通过加入一定量的氨基酸,使氨基酸充当灭活保护剂,不仅可以发挥紫外线灭活病毒的作用,而且能有效保护血浆中的凝血因子不被紫外线照射破坏。采用本专利技术的紫外线照射灭活血浆中病毒的方法能去除脂包膜或非脂包膜病毒。新冠病毒的病原学特点为表面有包膜,因此本专利技术也可用于对新冠病毒的灭活,对于高效价新冠病毒血浆的制备提供一种新的思路。
[0019]相对于现有技术,本专利技术所述的一种紫外线照射灭活血浆中病毒的方法具有以下优势:
[0020](1)通过紫外线灭活病毒和氨基酸作为灭活保护剂,在有效灭活血浆中病毒的同时,减少血浆蛋白中有效蛋白成分的破坏,保证血浆中凝血因子不受损失,且经灭活后血浆中残留的氨基酸对人体无害,能提供使用安全的血浆制品,可快速用于临床。
[0021](2)氨基酸加入后,可提高血浆的透光率,在同等照射剂量的情况下,提高病毒灭活效果。
具体实施方式
[0022]下面结合具体实施方式,进一步阐述本专利技术。首先应说明的是,下述实验例中的数
据是由专利技术人通过大量实验获得,限于篇幅,在说明书中只展示其中的一部分,且本领域普通技术人员可以在此数据下理解并实施本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解,在阅读了本专利技术的内容之后,本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改,这些改动或修改同样落于本申请所保护的范围。
[0023]本专利技术的一种紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,在血浆中加入10~18.76g/L氨基酸作为灭活保护剂,然后在紫外线照射下进行灭活。采用本专利技术的紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,利用紫外线照射从而灭活或去除可能存在于血浆蛋白中的病毒等微生物,而且由于加入了氨基酸,可以减少血浆蛋白中有效蛋白成分的破坏,以保护血浆中的凝血因子,充分发挥血浆的用途,且保证血浆使用的安全性。单纯的利用紫外线照射血浆,虽然可以起到灭活病毒的作用,但本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,其特征在于,在血浆中加入10~18.76g/L氨基酸作为灭活保护剂,然后在紫外线照射下进行灭活。2.根据权利要求1所述的紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,其特征在于,所述紫外线照射的强度为160~180J/m2。3.根据权利要求1所述的紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,其特征在于,所述紫外线照射的时间为30~60s。4.根据权利要求1所述的紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,其特征在于,所述氨基酸选自甘氨酸、盐酸精氨酸、精氨酸中的至少一种。5.根据权利要求4所述的紫外线照射灭活血浆中病毒的方法,其特征在于,所述氨基酸为盐酸精氨酸。6.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员:张学成,陈健,吴冬彦,李冠军,王承勖,马力,赵东生,孙振国,马超援,
申请(专利权)人:华兰生物工程股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。