一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法技术

一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法，所述中药复方是甘草泻心汤，是先建立甘草泻心汤指纹图谱，再进行抗炎抑菌活性试验，将抑菌试验结果进行PCA分析获得抑菌综合药效指标，通过OPLS分析建立抗炎、抑菌的谱

【技术实现步骤摘要】
一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法


[0001]本专利技术涉及药剂成分检测
，具体涉及一种基于指纹图谱的中药复方的抗炎、抑菌质量检测方法。

技术介绍

[0002]甘草泻心汤是中医方剂名，出自《伤寒论》，临床运用甘草泻心汤治疗复发性口腔溃疡取得较好的治疗效果。复发性口腔溃疡被认为是非特异性炎症表现，而细菌、病毒等是炎症的主要原因，因而甘草泻心汤也具有抗炎、抑菌功效。
[0003]超高效液相色谱(UPLC)是一种色谱分析方法，与传统的HPLC相比，UPLC能分离的色谱峰比HPLC多出一倍以上。在同样条件下，UPLC的分辨率能够认出更多的色谱峰，分离度高、检测速度快，灵敏度也得到了显著提升。然而，单一的UPLC检测方法只能通过药物成分种类的检测来体现药物的质量，但是甘草泻心汤的药物原料构成、提取方式等均会对其药效产生较大的影响，不同批次的甘草泻心也不能保证其能有效发挥出较为优异的抗炎、抑菌功效，保证其质量稳定性，为了对其药物质量进行有效监控，必须对其药物成分进行鉴别，以及其中具有抗炎、抑菌药效的有效组分进行测定。利用指纹图谱技术检测药物组分成为较为高效便捷的质量检测的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于提供一种基于指纹图谱的甘草泻心汤的抗炎、抑菌质量检测方法，有效快速检测出任意批次的甘草泻心汤的抗炎及抑菌的效果，检测结果准确性高。
[0005]本专利技术目的通过如下技术方案实现：
[0006]一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法，其特征在于：所述中药复方是甘草泻心汤，是先建立甘草泻心汤指纹图谱，再进行抗炎抑菌活性试验，将抑菌试验结果进行主成分(PCA)分析获得抑菌综合药效指标、将抗炎药效结果和抑菌药效结果其与指纹图谱进行谱效关系分析，通过正交投影偏最小二乘法(OPLS)分析建立抗炎、抑菌的谱
‑
效关系数学模型，通过计算灰色关联度分析(GRA)关联度，获取与抗炎、抑菌有关的药物组分。
[0007]本专利技术中将指纹图谱结合PCA分析、OPLS分析和GRA关联度值联合分析，将指纹图谱中检测的各组分与抗炎、抑菌进行关联，实现了对复杂混合物更为准确的定量和定性的分析，通过优势互补，更为精准的检测药物质量。
[0008]进一步，所述建立甘草泻心汤全方UPLC指纹图谱，其特征在于，包括如下步骤：
[0009](1)制备供试品溶液
[0010]按单次剂量为甘草20g，黄芩15g，干姜15g，大枣12g，半夏13g，黄连5g，即单次剂量共80g称量为全方组方，利用半仿生提取法提取样品，提取条件：第一煎水pH＝4.0、第二煎水pH＝7.0、第三煎水pH＝8.0、煎煮时间共2h，其中第一次煎煮1.0h，第二次煎煮0.5h，第三次煎煮0.5h，提取温度95℃，液料比1:10，回流提取；以上PH水用HCl(0.1mol
·
L
‑1)和NaOH(0.1mol
·
L
‑1)调节；合并3次提取液，55℃减压浓缩至1g.mL
‑1，作为样品母液，在4℃下保存
备用，此时获得样品母液为全方样品；
[0011](2)对照品溶液的制备：
[0012]取适量姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6
‑
姜辣素、甘草酸铵、黄芩苷、甘草苷、汉黄芩素11个对照作为全方样品混合对照品，以甲醇溶解至浓度为1.0mg
·
mL
‑1，4℃冰箱保存作为对照品溶液；
[0013](3)UPLC最佳色谱条件
[0014]色谱柱Shim
‑
pack Scepter C18
‑
200(3μm，4.6
×
250mm)，检测波长277nm，流速0.3mL
·
min
‑1，进样量3μL，柱温15℃；
[0015]梯度洗脱：A为体积分数为0.4％的甲酸水溶液，B为乙腈，0～5min，流动相B的体积百分含量从2％升至6％；5～10min，流动相B的体积百分含量从6％升至8％；10～15min，流动相B的体积百分含量从8％升至15％；15～20min，流动相B的体积百分含量从15％升至20％；20～30min，流动相B的体积百分含量从20％升至23％；30～40min，流动相B的体积百分含量从23％升至32％；40～60min，流动相B的体积百分含量从32％升至35％；60～80min，流动相B的体积百分含量从35％升至50％；80～85min，流动相B的体积百分含量从50％升至80％；85～90min，流动相B的体积百分含量从80％升至98％；90～95min，流动相B的体积百分含量从98％降至60％；95～100min，流动相B的体积百分含量从60％降至35％；100～105min，流动相B的体积百分含量从35％降至2％；
[0016](4)指纹图谱的建立
[0017]取16批甘草泻心汤处方药材，粉碎，按提取工艺制备16批次全方样品，按色谱条件进样，记录UPLC数据(CDF格式数据)，将原始数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)软件中，以多点校正法进行共有峰匹配，建立指纹图谱；以S11为参考图谱，对照谱图生成方法为中位数法，时间窗宽度0.5，图谱间距400，得到16批样品指纹图谱；全方共有色谱峰有61个，由图谱结果可知，16批样品与对照指纹图谱(R)的相似度分别依次为0.999、0.999、0.999、0.997、0.997、0.996、0.996、0.997、0.999、0.997、0.996、0.997、0.996、0.996、0.997、0.997，RSD值为0.11％，相似度非常高，说明这16批样品差异性不显著。同时，比较共有峰色谱峰出峰时间RSD，其值0.01～0.29％，小于1％，显示共有峰出峰时间一致；比较共有峰色谱峰面积均RSD，其值1.22～29.80％。
[0018]进一步，采用甘草泻心汤全方样品对RAW264.7细胞进行抗炎试验，获得对应的抗炎数据，同时对大肠埃希氏菌、猪霍乱沙门氏菌和奇异杆菌进行抑菌试验获得三组抑菌数据，采用SPSS.25统计分析软件对三组抑菌数据进行PCA分析，标准化处理得综合抑菌数据；采用SIMCA
‑
P14.1软件以全方样品共有峰峰面积为自变量X，抗炎药效指标为因变量Y，进行OPLS分析，拟合得回归方程：Y＝a1X1+a2X2+
…
a
61
X
61
，其中Y对应抗炎或抑菌药效结果，X1～X
61
对应共有峰的峰面积，a1～a
61
对应共有峰与药效的回归系数，回归系数为正值说明其与药效呈正相关，负数则表示与药效呈负相关；再通过EXCEL计算GRA关联度值，当关联度＞0.6，则可以作为抗炎或抑菌有效色谱峰。
[0019]进一步，通过上述分析，以灰色关联度＞0.6，OPLS分析回归系数为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法，其特征在于：所述中药复方是甘草泻心汤，是先建立甘草泻心汤指纹图谱，再进行抗炎抑菌活性试验，将抑菌试验结果进行主成分(PCA)分析获得抑菌综合药效指标、将抗炎药效结果和抑菌药效结果其与指纹图谱进行谱效关系分析，通过正交投影偏最小二乘法(OPLS)分析建立抗炎、抑菌的谱
‑
效关系数学模型，通过计算灰色关联度分析(GRA)关联度，获取与抗炎、抑菌有关的药物组分。2.如权利要求1所述的一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法，其特征在于，所述建立甘草泻心汤全方UPLC指纹图谱按照如下步骤：(1)制备供试品溶液按单次剂量为甘草20g，黄芩15g，干姜15g，大枣12g，半夏13g，黄连5g，即单次剂量共80g称量为全方组方，利用半仿生提取法提取样品，提取条件：第一煎水pH＝4.0、第二煎水pH＝7.0、第三煎水pH＝8.0、煎煮时间共2h，其中第一次煎煮1.0h，第二次煎煮0.5h，第三次煎煮0.5h，提取温度95℃，液料比1:10，回流提取；以上PH水用0.1mol
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L
‑1的HCl和0.1mol
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‑1的NaOH调节；合并3次提取液，55℃减压浓缩至1g
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‑1，分别作为样品母液，在4℃下保存备用，此时获得样品母液为全方样品；(2)对照品溶液的制备：取适量姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6
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姜辣素、甘草酸铵、黄芩苷、甘草苷、汉黄芩素11个对照作为全方样品混合对照品，以甲醇溶解至浓度为1.0mg
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‑1，4℃冰箱保存作为对照品溶液；(3)UPLC最佳色谱条件色谱柱Shim
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pack Scepter C18
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200，检测波长277nm，流速0.3mol
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L
‑1，进样量3μL，柱温15℃；梯度洗脱：A为体积分数为0.4％的甲酸水溶液，B为乙腈，0～5min，流动相B的体积百分含量从2％升至6％；5～10min，流动相B的体积百分含量从6％升至8％；10～15min，流动相B的体积百分含量从8％升至15％；15～20min，流动相B的体积百分含量从15％升至20％；20～30min，流动相B的体积百分含量从20％升至23％；30～40min，流动相B的体积百分含量从23％升至32％；40～60min，流动相B的体积百分含量从32％升至35％；60～80min，流动相B的体积百分含量从35％升至50％；80～85min，流动相B的体积百分含量从50％升至80％；85～90min，流动相B的体积百分含量从80％升至98％；90～95min，流动相B的体积百分含量从98％降至60％；95～100min，流动相B的体积百分含量从60％降至35％；100～105min，流动相B的体积百分含量从35％降至2％；(4)指纹图谱的建立取16批甘草泻心汤处方药材，粉碎，按提取工艺制备16批次全方样品，按色谱条件进样，记录UPLC数据，将原始数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件中，以多点校正法进行共有峰匹配，建立指纹图谱；以S11为参考图谱，对照谱图生成方法为中位数法，时间窗宽度0.5，图谱间距400，得到16批样品指纹图谱；全方共有色谱峰有61个，由图谱结果可知，16批样品与对照指纹图谱(R)的相似度分别是0.999、0.999、0.999、0.997、0.997、0.996、0.996、0.997、0.999、0.997、0.996、0.997、0.996、0.996、0.997、0.997，RSD值为0.11％，比较共有峰色谱峰出峰时间RSD为0.01～0.29％，显示共有峰出峰时间一致；比较共有峰色谱峰面积均RSD为1.22～29.80％。
3.如权利要求2所述的一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法，其特征在于：采用甘草泻心汤全方样品对RAW264.7细胞进行抗炎试验，获得对应的抗炎数据，同时对大肠埃希氏菌、猪霍乱沙门氏菌和奇异杆菌进行抑菌试验获得三组抑菌数据，采用SPSS.25统计分析软件对三组抑菌数据进行PCA分析，标准化处理得综合抑菌数据；采用SIMCA
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P14.1软件以全方样品共有峰峰面积为自变量X，抗炎药效指标为因变量Y，进行OPLS分析，拟合得回归方程：Y＝a1X1+a2X2+
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，其中Y对应抗炎或抑菌药效结果，X1～X
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对应共有峰的峰面积，a1～a
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对应共有峰与药效的回归系数，回归系数为正值说明其与药效呈正相关，负数则表示与药效呈负相关；再通过EXCEL计算GRA关联度值，当关联度＞0.6，则可以作为抗炎或抑菌有效色谱峰。4.如权利要求3所述的一种基于指纹图谱的中药复方的质量检测方法，其特征在于，以...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱买勋，唐红梅，张阳，
申请(专利权)人：生猪技术创新中心重庆，
类型：发明
国别省市：