一种小檗碱衍生物在防治奶牛乳腺炎致病菌中的用途制造技术

本发明专利技术公开系列小檗碱衍生物在防治奶牛乳腺炎方面的用途，属于天然药物化学领域。该类衍生物对奶牛乳腺炎致病菌无乳链球菌Streptococcus agalactiae ATCC12386，无乳链球菌Streptococcus agalactiae ATCC27956，停乳链球菌Streptococcus dysgalactiae ATCC27957表现出优异的抑制活性。本发明专利技术所涉及化合物合成方法简单且原料廉价易得，在代替抗生素成为防治奶牛乳腺炎天然产物来源化合物方面极具应用价值。所涉及化合物结构式如下：下：下：下：下：

【技术实现步骤摘要】
一种小檗碱衍生物在防治奶牛乳腺炎致病菌中的用途


[0001]本专利技术属于天然药物化学领域，公开了一种小檗碱衍生物的新用途，具体涉及小檗碱衍生物A1～A37、D1～D7、E1～E7、F1～F5以及Z1～Z3在防治由无乳链球菌Streptococcus agalactiae ATCC12386，无乳链球菌Streptococcus agalactiae ATCC27956，停乳链球菌Streptococcus dysgalactiae ATCC27957引起的奶牛乳腺炎中的用途。

技术介绍

[0002]奶牛乳腺炎是由于奶牛乳房组织受到物理性刺激、化学物质侵染以及病原微生物的入侵，导致乳腺组织部位产生的炎症反应，是在奶牛养殖业发展期间，奶牛最常见的疾病之一。近50％的奶牛乳房炎是由细菌引起的，其中无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)是引起奶牛乳腺炎主要的细菌性病原。奶牛乳腺炎严重危害了奶牛的健康，导致泌乳量减少，影响牛乳品质和营养含量。患病奶牛的乳汁制备的乳制品极易变质，降低牛乳的利用价值。奶牛乳腺炎给全世界的奶牛养殖产业和乳制品加工业造成了巨大的经济损失。此外，由此带来的食品安全问题严重威胁着人类健康。
[0003]目前，乳腺内抗生素输注是治疗奶牛乳腺炎最常见和保守的做法。然而，反复和不当使用抗生素可诱导菌株对抗生素产生耐药性，严重影响疗效。同时，抗生素残留的发生，会导致牛奶中蓄积药物，还会对奶牛造成肠道菌群失调，对水和土壤环境造成负面影响。乳腺炎病原体的抗菌生耐药性已成为全球广泛关注的问题，这迫使人们开发安全有效的替代抗菌素来维持奶牛乳房的健康，使用抑菌作用强、对环境稳定的天然产物来源的化合物来防治奶牛乳腺炎，是绿色防控奶牛乳腺炎的一个重要课题。
[0004]小檗碱是从中药黄连中分离的一种异喹啉生物碱，是黄连抗菌的主要有效成分，在植物界广泛分布，大约有4个科10个属内发现有小檗碱存在。小檗碱抗菌谱广，体外对多种革兰阳性及阴性菌均具抑菌作用，而目前无系统的关于小檗碱系列化合物在奶牛乳腺炎防治方面的相关报道。课题组以小檗碱结构为核心，构建了一系列小檗碱衍生物，并对其进行了抗无乳链球菌和停乳链球菌的活性测试，结果显示出优异的抗菌活性。因此，小檗碱系列化合物在治疗奶牛乳腺炎方面具有潜在的应用价值，值得进一步研究和开发。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供小檗碱衍生物在治疗奶牛乳腺炎方面的新用途，用于防治由无乳链球菌和停乳链球菌引起的奶牛乳腺炎。
[0006]为了实现以上目的，本专利技术提供了如下技术方法：
[0007]本专利技术提供了一种小檗碱衍生物在抗奶牛乳腺炎致病细菌中的新用途，这些衍生物对无乳链球菌Streptococcus agalactiae ATCC12386，无乳链球菌Streptococcus agalactiae ATCC27956，停乳链球菌Streptococcus dysgalactiae ATCC27957的给药浓度
为100、50、25、12.5、6.25、3.12μg/mL等。
[0008]该专利技术采用了文献报道方法合成小檗碱衍生物，经多次硅胶柱层析等常规方法分离获得纯品，经质谱和核磁共振等波谱技术确定了小檗碱衍生物A1～A37、D1～D7、E1～E7、F1～F5以及Z1～Z3的结构。其中，小檗碱衍生物A1～A37如化学式1所示，其中R1、R2、R3、R4以及R5可为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、叔丁基、异丙基、甲基；小檗碱衍生物D1～D7如化学式2所示；小檗碱衍生物E1～E7如化学式3所示，其中n为0～8个碳原子；小檗碱衍生物F1～F5如化学式4所示，R6为烷烃以及苯环等取代基；小檗碱衍生物Z1～Z3如化学式5所示。
[0009][0010]具体地，所述小檗碱衍生物的化学结构式为：
[0011][0012][0013][0014]本专利技术提供的杀菌剂具有以下优势：
[0015]1)本专利技术发现小檗碱衍生物对奶牛乳腺炎致病菌表现出优异的抑制作用，在治疗奶牛乳腺炎方面极具应用价值。
[0016]2)此小檗碱衍生物具有易合成、结构简单、绿色高效、不易产生耐药性等特点，在防治奶牛乳腺炎方面具有应用价值，值得进一步研究和开发。
具体实施方式
[0017]为了更好地理解本专利技术，通过以下具体实施例对本专利技术的上述内容做进一步的详细说明。但不应将此理解为对本专利技术的限制。以下是本专利技术的具体实施例，对本专利技术的技术方案做进一步描述，但本专利技术的内容不仅仅局限于实施例所述的范围，凡是不背离本专利技术
构思的改变或等同替代均包括在本专利技术的保护范围之内。
[0018]实施例1：小檗碱衍生物抗核果褐腐病菌ACCC 36263活性测定
[0019]1)供试药剂：小檗碱衍生物。
[0020]2)供试菌种：无乳链球菌Streptococcus agalactiae ATCC12386，无乳链球菌Streptococcus agalactiae ATCC27956，停乳链球菌Streptococcus dysgalactiae ATCC27957。
[0021]3)测试方法：
[0022]本实验中所用的菌株为实验室
‑
80℃含30％甘油冻存的菌株。将冻存菌株取出，分别在羊血琼脂平板上面进行划线，在37℃下恒温培养直到长出单菌落。分别挑取单菌落至脑心浸出液肉汤(BHI)液体培养基(胰蛋白胨：10.0g，牛心浸粉：17.5g，氯化钠：5.0g，葡萄糖：2.0g，磷酸氢二钠(12H2O)：2.5g，蒸馏水：1L；121℃灭菌20min)，在37℃、140rpm恒温摇床振荡培养到对数生长期。将处于对数生长期的菌株用相应的液体培养基稀释至约106CFU/mL备用。将化合物分别用DMSO溶解，加入液体培养基中，混合均匀，配制成浓度为200μg/mL的含药液体培养基。取50μL含药培养基和相同体积的含约106CFU/mL细菌培养物加入到96孔板的孔中，最终给药浓度为100μg/mL。含等量DMSO的相同浓度100μL菌液做对照。将96孔板在37℃恒温培养箱中培养12
‑
24h直至对照组菌液长出，在酶标仪上测定孔中菌液的OD值(OD
600
)。并且另外测定100μL液体培养基和浓度为100μg/mL药剂的OD值，对培养基和药剂本身造成的OD值进行矫正。校正OD值和抑制率的计算公式如下：
[0023]校正OD值＝含菌培养基OD值
‑
无菌培养物OD值；
[0024]抑制率＝(校正后对照培养基菌液OD值
‑
校正后含药培养基OD值)/校正后对照培养基菌液OD值
×
100％
[0025]所有实验设置三个重复，测定得到化合物的抑制率见表1。
[0026]表1小檗碱衍生物在100μg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.本发明涉及小檗碱衍生物在防治奶牛乳腺炎中的应用。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所涉及化合物结构式如下：
3.根据权利要求1
‑
2所述的小檗碱衍生物化合物在防治由无乳链球菌Streptococcus...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘映前，金亚瑞，张雯，张保琪，安俊霞，张智军，王艺荣，丁艳艳，李福平，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：