埃博拉病毒重组疫苗及其应用制造技术

本公开涉及埃博拉病毒重组疫苗及其应用。本公开通过筛选获得编码埃博拉病毒的糖蛋白(GP)的分离的核酸分子，以及含该核酸分子的疫苗组合物。本公开的核酸分子或者疫苗组合物具有升高的蛋白表达和免疫原性。有升高的蛋白表达和免疫原性。

【技术实现步骤摘要】
埃博拉病毒重组疫苗及其应用


[0001]本公开属于疫苗
，尤其涉及一种新型的埃博拉疫苗及其应用。

技术介绍

[0002]埃博拉病毒病(Ebola Virus Disease，EDV)，以往被称作埃博拉病毒性出血热，是一种由埃博拉病毒导致的急性出血性传染病，是迄今发现的感染性最强的传染性疾病之一，具有极高的致病性和致死率。埃博拉病毒可通过野生动物传到人，并通过感染病人的血液、精液、汗液、唾液及分泌物等方式在人际之间传播蔓延。EDV先期症状为突发性发热、乏力、肌肉疼痛、头痛和咽喉痛症状。随后会出现呕吐、腹泻、皮疹、肾脏和肝脏功能受损等症状，最终导致死亡。
[0003]目前，获得世界卫生组织(WHO)资格预审的埃博拉疫苗方案有两种：以重组水泡性口炎病毒(rVSV)为载体表达埃博拉病毒糖蛋白(GP)的单剂量rVSVΔG
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ZEBOV
‑
GP方案；以及26型腺病毒载体(Ad26.ZEBOV)和改良型安卡拉痘苗病毒载体(MVA
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BN
‑
Filo)的双剂量方案。而以5型腺病毒为载体表达埃博拉病毒糖蛋白(GP)的Ad5
‑
EBOV疫苗也已在中国获批上市。但我们应当注意到，这四种疫苗的安全性均需大规模的临床验证，此外，疫苗的免疫原型仍需进一步提高。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中存在的上述技术问题之一，本公开提供了一种分离的核酸分子，其编码埃博拉病毒的糖蛋白(GP)。本公开还提供了一种重组疫苗，该重组疫苗包括表达载体和编码埃博拉病毒的GP蛋白的核苷酸序列。
[0005]根据本公开的一个方面，提供了一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码埃博拉病毒的糖蛋白(gP)。
[0006]在一些实施方式中，所述核酸分子包括如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸分子或其片段，或与如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸分子或其片段具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
[0007]在优选的实施方式中，所述核酸分子包括如SEQ ID NO：1所示的核苷酸分子，或与如SEQ ID NO：1所示的核苷酸分子具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
[0008]根据本公开的另一方面，提供了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括表达载体和本公开的上述分离的核酸分子。
[0009]在一些实施方式中，所述表达载体可以选自腺病毒载体、新城疫病毒载体、逆转录病毒载体、痘苗病毒载体、腺相关病毒载体、多瘤病毒载体、甲病毒载体、弹状病毒载体或疱疹病毒载体。
[0010]在一些实施方式中，所述表达载体为新城疫病毒载体。在一些实施方式中，所述新
城疫病毒为弱毒株。在一些实施方式中，所述新城疫病毒为新城疫病毒LaSota毒株。
[0011]在一些实施方式中，所述表达载体包括编码衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素神经氨酸酶蛋白(HN)和聚合酶蛋白(L)的核苷酸序列。
[0012]在一些实施方式中，本公开的编码埃博拉病毒的糖蛋白(GP)的核苷酸序列位于新城疫病毒载体上的编码磷蛋白(P)的核苷酸序列和编码基质蛋白(M)的核苷酸序列之间。
[0013]现有技术中通常使用5型腺病毒载体，但由于人群普遍感染过5型腺病毒，因此人体针对该载体本身存在十分普遍的预存免疫。临床试验表明，人体内较高滴度的5型腺病毒中和抗体水平会显著降低载体的转导效率和转基因表达水平，并且易引发机体的不良反应。新城疫病毒(NDV)的自然宿主为禽类，在抗原上与常见人类病原无交叉反应，不受人体预存免疫的影响。此外，NDV为RNA病毒，消除了与宿主细胞DNA整合的可能性，安全性高。并且NDV载体疫苗可在多种细胞系及鸡胚中增殖并能达到很高的滴度，生产成本低廉、便于大规模推广应用。
[0014]在一些实施方式中，所述疫苗组合物还可以包括药学上可接受的载剂。
[0015]在一些实施方式中，所述药学上可接受的载剂包括佐剂。在一些实施方式中，所述佐剂包括，但不限于油佐剂、水溶性佐剂、铝盐佐剂、细胞因子佐剂或CpG ODN。
[0016]在一些实施方式中，所述疫苗组合物的可以是滴剂、喷雾剂、片剂、注射剂、颗粒剂、胶囊剂、软膏剂、丸剂等剂型。
[0017]在一些实施方式中，所述疫苗组合物可以通过施用递送至个体，通常通过全身施用(例如鼻内途径、静脉内途径、腹腔内途径、肌内途径、皮内途径、皮下途径、真皮下途径、透皮途径、颅内途径、粘膜途径、肛门途径、阴道途径、口腔途径、颊途径或它们可以被吸入)来递送。在一些实施方式中，所述疫苗组合物可以通过局部应用来施用。在一些实施方式中，所述疫苗组合物的施用途径是鼻内(例如，鼻喷雾剂或滴剂)施用。在一些实施方式中，所述疫苗组合物的施用途径是肌内施用。在一些实施方式中，所述疫苗组合物的施用途径是皮下。在一些实施方式中，所述疫苗组合物的施用途径是粘膜。在一些实施方式中，所述疫苗组合物的施用途径是透皮或皮内。
[0018]在一些实施方式中，所述疫苗组合物可用于治疗或预防埃博拉病毒病。
[0019]在一些实施方式中，所述埃博拉病毒可以选自以下亚型中的一种或多种：扎伊尔型(Zaire
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EBOV，EBOV)、本迪布焦型(Bundibugyo
‑
EBOV，BDBV)、苏丹型(Sudan
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EBOV，SUDV)、塔伊森林型(Tai
‑
Forest
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EBOV，TAFV)、赖斯顿型(Reston
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EBOV，RESTV)、邦巴里型(Bombali
‑
EBOV，Bombali)。
[0020]根据本公开的又一方面，提供了一种治疗或预防埃博拉病毒病的方法，所述方法包括向个体施用本公开的分离的核酸分子或疫苗组合物。在一些实施方式中，所述个体可以包括哺乳动物，例如人。
[0021]根据本公开的又一方面，提供了本公开的分离的核酸分子或疫苗组合物在制备用于治疗或预防埃博拉病毒病的药物中的用途。
附图说明
[0022]图1示意性示出了表达EBOV GP
‑
OP蛋白的NDV重组质粒的构建。
[0023]图2示出了重组病毒EBOV GP蛋白表达的检测结果。M：Marker；1：重组病毒rLS
‑
EBOV
‑
GP；2：重组病毒rLS
‑
EBOV
‑
GP
‑
OP
‑
1；3：重组病毒rLS
‑
EBOV
‑
GP
‑
OP
‑
2。
[0024]图3示本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码埃博拉病毒的糖蛋白(gP)。2.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸分子或其片段，或与如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸分子或其片段具有至少85％的序列同一性。3.一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括权利要求1或2所述的分离的核酸分子，和表达载体。4.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其特征在于，所述表达载体选自腺病毒载体、新城疫病毒载体、逆转录病毒载体、痘苗病毒载体、腺相关病毒载体、多瘤病毒载体、甲病毒载体、弹状病毒载体或疱疹病毒载体。5.根据权利要求3或4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述表达载体为新城疫病毒载体，优选地，所述表达载体包括编码衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素神经氨酸酶蛋白(HN)和聚合酶蛋白(L)的核苷酸序列，优选地，所述新城疫病毒为弱毒株，更优选为新城疫病毒LaSota毒株。6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其特征在于，所述分离的核酸分子位于编码磷蛋白(P)的核苷酸序列和编码基质蛋白(M)的核苷酸序列之间。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵伟，白霜，吴疆，吕敏，索罗丹，
申请(专利权)人：北京市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：