一种同步检测十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种同步检测十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分的方法及应用，该方法中萝卜硫素和萝卜硫苷经70%甲醇水溶液提取，水相微孔滤膜过滤后经超高效液相色谱柱分离，三重四级杆质谱仪检测，以保留时间和特征离子丰度值进行定性，外标

【技术实现步骤摘要】
一种同步检测十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分的方法及应用


[0001]本专利技术涉及食品检测
，特别涉及一种同步检测十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分的方法及应用。

技术介绍

[0002]十字花科蔬菜营养丰富，包括芥菜、甘蓝、奶油菜、油菜、大白菜、西兰花、萝卜等，富含大量营养素，如维生素C、微量元素锌、膳食纤维等，其中硫代葡萄糖苷类物质被认为是活性成分的前体物质，在外界虫害侵略或物理损坏时，细胞遭到破损，释放黑芥子酶，催化硫苷生成硫素，硫素具有生物活性，可以抵御细胞损伤。蔬菜中功能成分主要以萝卜硫苷为代表，是特征活性成分萝卜硫素的前体物质。1992年，美国约翰.霍普金斯大学的Talalay教授发现萝卜硫素有潜在的抗癌作用，并在乳腺癌动物模型实验中得以验证。2014年，约翰.霍普金斯大学教授Thomas Kensler通过人群干预实验，发现了萝卜硫素的抗空气污染危害作用；Shyam教授通过动物实验发现了萝卜硫素的抗COPD和肺部肿瘤作用。随后国内外大量的研究表明，不管是对细胞、动物还是人体，萝卜硫素均表现出广谱抗癌作用。萝卜硫素的广谱抗癌功效，也得到了国际诸多权威科研机构的证实，其机制可能是萝卜硫素激活NRF
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2信号通路，上调Ⅱ相代谢解毒酶，发挥污染物无害化代谢排出及抗癌、抗炎、抗氧化作用。研究认为萝卜硫素可以降低糖尿病、心血管疾病、精神性疾病等的发生，亦可以杀灭胃HP（幽门螺旋杆菌），一种难治愈的慢性胃炎的危险因子。因此，特征活性成分萝卜硫素及其前体物质萝卜硫苷的分析方法在理解十字花科蔬菜可能发挥的多种功能机制方面变得越来越重要。
[0003]此外，蔬菜因破碎及其液态或固态制品，释放的黑芥子酶，将部分萝卜硫苷水解为萝卜硫素，因此生活消费品中常常出现萝卜硫苷和萝卜硫素共存现象。
[0004]目前国内外，已经报道了一些检测方法，这些方法大多基于高效液相色谱(HPLC)分析，配多种检测器（紫外检测器、电化学检测器等），可以检测种子、植物组织、功能食品、人类或大鼠血浆中萝卜硫素。对于萝卜硫苷的检测，国内常用的样品前处理是通过干燥来灭活黑芥子酶。目前，国内还没有一种方法能够实现萝卜硫苷和萝卜硫素含量的同时定量。而蔬菜及其制品中萝卜硫苷和萝卜硫素共存的现象需要一种简介的方法，能够同时定量两种物质含量。
[0005]本专利技术拟建立高效液相色谱
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串联质谱法（HPLC
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MS/MS），以定量分析十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分萝卜硫素（SFN）和萝卜硫苷（RAA）的含量，并将其应用在抗癌、抗炎、抗氧化等功能性食用制品中萝卜硫素和萝卜硫苷含量的检测，为将来十字花科蔬菜特征活性成分萝卜硫素和萝卜硫苷含量测定提供标准化方法，为开发新功能性食品、保健品或药品提供有效成分检测保障。

技术实现思路

[0006]本专利技术为了弥补现有技术的不足，提供了一种同步检测十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分的方法及应用。
[0007]本专利技术是通过如下技术方案实现的：第一方面，本专利技术提供了一种同步检测十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分的方法，包括以下步骤：S1：样品处理；其中，萝卜硫素和萝卜硫苷经70%甲醇水溶液提取；S2：采用液相色谱
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串联质谱仪对样品进行检测；其中，步骤S2中液相色谱条件为：色谱柱为C18，粒径为1.7
ꢀµ
m，内径为100
ꢀ×
3.0 mm，填充颗粒为亚乙基桥杂化颗粒，柱温25 ℃，流动相A为0.1% 甲酸水；流动相B为乙腈；流动相超声5
‑
10min，流速：0.4 mL/min，进样量为1
‑
10
ꢀµ
L；步骤S2中质谱条件为：离子源为电喷雾离子源，离子化模式为正/负离子模式，扫描模式为多反应监测模式，脱溶剂温度为250 ℃，电喷雾离子电压为2.8 kV；S3：十字花科蔬菜及其制品中萝卜硫素和萝卜硫苷的浓度用质量分数计，按下式计算：
[0008]式中：ρ——由标准曲线计算出试样中待测物的浓度，单位为毫克每升（mg/L.）；v——试样提取液定容体积，单位为毫升（mL)；x——测得的待测物浓度，单位为毫克每千克（mg/kg）,或毫克每升（mg/L.）；m——所取试样的量，单位为克(g)，或者毫升（mL）。
[0009]进一步的，步骤S1具体包括如下步骤：S11：新鲜蔬菜取样将新鲜蔬菜可食部等体积大小切割，四分法取样，保证切的时候不能出水；S12：速冻将上述样品，掰成几截或切成几块，同样不能切出水，然后将准备好的样品放置到保温杯，倒入液氮，盖上盖子，进行速冻；S13：破壁粉碎待冷冻后，迅速用小型高速破壁机粉碎成细粉状态，粉碎时间为1分钟；S14：称量及时用天平，精确称量新鲜蔬菜固态粉末置于离心管中，冷冻保存，备用；蔬菜固态制品取样：用破壁机破壁成粉末，精确称取粉末置于离心管中冻存备用；蔬菜液态制品取样：混合均匀，直接准确量取液体置于离心管冻存备用；S15：萝卜硫素和萝卜硫苷提取进一步的，步骤S15中萝卜硫素和萝卜硫苷提取方法为：精确称取固态粉末试样于棕色离心管中，加入70%甲醇水溶液，混匀，50
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70℃水浴下超声5
‑
10 min，5000
‑
10000 rpm/min离心3
‑
10 min，上清液转入棕色容量瓶中，残渣再用70 %甲醇水溶液按上述步骤重复提取一次；合并两次提取液，用70 %甲醇水溶液定容至20 mL，用于固态粉末中萝卜硫素和萝
卜硫苷的检测。
[0010]进一步的，步骤S15中萝卜硫素和萝卜硫苷提取方法为：准确量取液态制品于棕色离心管中，加入70 %甲醇水溶液，混匀，50
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70℃水浴下超声5
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10 min，5000
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10000 rpm/min离心3
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10 min，上清液转入20 mL棕色容量瓶中，用70%甲醇水溶液定容至20 mL，用于液态制品中萝卜硫素和萝卜硫苷的检测。
[0011]进一步的，固态粉末中萝卜硫素和萝卜硫苷、液态制品中萝卜硫素和萝卜硫苷分别经水相微孔滤膜过滤，引入UPLC
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ESI
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MS/MS系统进行检测。
[0012]第二方面，本专利技术将上述检测方法用于十字花科蔬菜及其功能性食品中特征活性成分萝卜硫素和萝卜硫苷的测定。
[0013]第三方面，本专利技术将上述检测方法用于保健品、药品中特征活性成分萝卜硫素和萝卜硫苷的测定。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益之处为：1、本专利技术建立的方法，可以同步测定十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分萝卜硫素和萝卜硫苷的含量，并将其应用于抗癌、抗氧化食品、保健品、药品中特征活性成分含量的测定；为将来十字花科蔬菜特征营养成分萝卜硫素和萝卜硫苷检测方法的标准化及含量比较提供依据，为开发新功能性食品、保健品或药品提供有效成分检测保障。
[001本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同步检测十字花科蔬菜及其制品中特征活性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：样品处理；其中，萝卜硫素和萝卜硫苷经70%甲醇水溶液提取；S2：采用液相色谱
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串联质谱仪对样品进行检测；其中，步骤S2中液相色谱条件为：色谱柱为C18 ，粒径为1.7
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m，内径为100
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3.0 mm，填充颗粒为亚乙基桥杂化颗粒，柱温为25 ℃，流动相A为0.1% 甲酸水；流动相B为乙腈；流动相超声5
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10min，流速：0.4 mL/min，进样量为1
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L；步骤S2中质谱条件为：离子源为电喷雾离子源，离子化模式为正/负离子模式，扫描模式为多反应监测模式，脱溶剂温度为250 ℃，电喷雾离子电压为2.8 kV；S3：十字花科蔬菜及其制品中萝卜硫素和萝卜硫苷的浓度用质量分数计，按下式计算：；式中：ρ——由标准曲线计算出试样中待测物的浓度，单位为毫克每升（mg/L.）；v——试样提取液定容体积，单位为毫升（mL)；x——测得的待测物浓度，单位为毫克每千克（mg/kg）,或毫克每升（mg/L.）；m——所取试样的量，单位为克(g)，或者毫升（mL）。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1具体包括如下步骤：S11：新鲜蔬菜取样将新鲜蔬菜可食部等体积大小切割，四分法取样，保证切的时候不能出水；S12：速冻将上述样品，掰成几截或切成几块，同样不能切出水，然后将准备好的样品放置到保温杯，倒入液氮，盖上盖子，进行速冻；S13：破壁粉碎待冷冻后，迅速用小型高速破壁机粉碎成细粉状态，粉碎时间为1分钟；S14：称量及时用天平，精确称量新鲜蔬菜固态粉末置于离心管中，冷冻保存，备用；蔬菜固态制品取样：用破壁机破壁成粉末，精确称取粉末置于离心管中冻存备用；蔬菜液态制品取样：...

【专利技术属性】
技术研发人员：程学美，赵颖琪，
申请(专利权)人：道源自然山东特医食品有限公司，
类型：发明
国别省市：