一种特异性识别SARS-CoV-2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体及制备和应用制造技术

一种特异性识别SARS

【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体及制备和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽，具体来说是一种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体及制备和应用。

技术介绍

[0002][0003]适应性免疫系统可以通过抗体和T细胞来清除病毒。中和抗体可以结合病毒S蛋白上的受体结合位点(RBD)或周围区域，进而影响病毒与细胞上的受体血管紧张素转化酶
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2(ACE2)结合，从而阻止SARS
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2病毒入侵细胞。但随着感染人群的不断扩大，SARS
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2病毒也不断进化，从原始株到Delta、Omicron和XBB毒株，病毒已经产生了多轮突变。RBD区域的突变使得抗体无法识别的突变体，更容易入侵细胞从而成为新的优势毒株。且SARS
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2病毒入侵到胞内，抗体也难以发挥作用。这些突变使得以激活抗体应答为目标的新冠预防性疫苗，以及以治疗为目标的中和抗体，难以发挥保护或治疗作用。
[0004]新冠病毒SARS
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2已经在全球大规模流行并出现大量突变株，作为抵抗病原体的免疫功能分子抗体可以阻断病毒和细胞受体来阻断病毒入侵，但大量的突变株能逃避抗体的识别，且抗体无法清除入侵胞内的病毒。
[0005]T细胞也是获得性免疫反应中最重要的组成。体内存在T细胞受体(T
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cell receptor，TCR)多样的T细胞库，一旦细胞发生感染，胞内的蛋白酶体可部分降解病毒蛋白为肽段(即表位肽)，肽段与MHC
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1类分子形成复合物迁移到细胞表面，进而被TCR特异性的CD8+T细胞识别。T细胞上的TCR由异源二聚体α和β两条链组成，每条链又各自包含恒定区(C区)和可变区(V区)，可变区由骨架区和三个超变区，即CDR1、CDR2和CDR3组成。CDR1和CDR2通常被认为结合MHC分子，而CDR3则结合MHC递呈的抗原肽段。人群中MHC
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1类分子具备多态性，其中最广泛的MHC
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1型别之一为HLA
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A*0201型，人群中约占比约40％。
[0006]不同于中和抗体识别病毒S蛋白的RBD区域，CD8+T细胞TCR识别的肽段序列通常与病毒的入侵无直接关系，因此，这些肽段的序列更保守，不易受病毒突变的影响。而且T细胞可以通过TCR来识别已感染SARS
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2的靶细胞，并利用颗粒霉素和穿孔素等直接杀伤已感染细胞，或通过细胞因子等非杀伤性机制来清除感染细胞中的病毒。为了获得不易受病毒突变影响，且能清除感染细胞胞内病毒的新冠治疗策略，本专利技术筛选到一对HLA
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A*0201限制的TCR Vα和Vβ，可用于新冠患者的治疗。
[0007]HLA
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A*0201是世界各人群中均高频表达的HLA等位基因。发现和筛选HLA
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A*0201限制性SARS
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2病毒S抗原特异性T细胞受体TCR，获取其编码基因并表达成可溶性TCR蛋白后，使这些蛋白具有HLA
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A*0201限制性模式下，清除胞内SARS
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2病毒的能力。由于HLA
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A*0201表达的高频性，使得这种方法可以应用于较多的人群，具有很高的应用价值。

技术实现思路

[0008]针对现有技术中的上述技术问题，本专利技术提供了一种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体及制备和应用，所述的这种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体及制备和应用要解决现有技术中以激活抗体应答为目标的新冠预防性疫苗，以及以治疗为目标的中和抗体，难以发挥保护或治疗作用的技术问题。
[0009]本专利技术提供了一种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体(TCR)，包括α链可变区和β链可变区；其中，
[0010]所述α链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的α链互补决定区ACDR1，如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的α链互补决定区ACDR2，以及如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列组成的α链互补决定区ACDR3；
[0011]所述β链可变区包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的β链互补决定区BCDR1、如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列组成的β链互补决定区BCDR2以及如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列组成的β链互补决定区BCDR3。
[0012]具体的，所述的特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体α链可变区中互补决定区ACDR1、ACDR2、ACDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示，α链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；β链可变区中互补决定区BCDR1、BCDR2、BCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示，β链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0013]进一步地，所述TCR的α链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示或与其相似性不小于80％的氨基酸序列，所述TCR的β链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或与其相似性不小于80％的氨基酸序列。
[0014]可理解的是的，上述TCR由α链序列和与之对应的β链序列组成，α链和β链的可变区都决定其结合识别和特异性，TCR的特异性取决于其结合位点和抗原肽/HLA复合物决定区间的结构互补，TCR结合位点由主要来自高度可变区或互补决定区(CDR)的残基组成，而CDR间可通过插入框架区(FR)进行连接，在获知CDR的氨基酸序列后，本领域的技术人员可轻易确定框架区。因此，只要发现的α链序列和β链序列的CDR序列不变，都能够基本实现本专利技术TCR的功能和应用。因此，本专利技术的TCR，其具体序列不仅限于以上具体的α链序列可变区和β链序列可变区，以上具体序列的α链序列可变区和β链序列可变区只是本专利技术的一种实现方式中具体采用的TCR序列。
[0015]由与参照序列“至少80％一致性”的氨基酸序列组成的蛋白与参照序列相比可包含突变如缺失、插入和/或取代。在取代的情况中，由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体，包括α链可变区和β链可变区；其特征在于：所述α链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的α链互补决定区ACDR1，如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的α链互补决定区ACDR2，以及如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列组成的α链互补决定区ACDR3；所述β链可变区包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的β链互补决定区BCDR1、如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列组成的β链互补决定区BCDR2以及如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列组成的β链互补决定区BCDR3。2.根据权利要求1所述的一种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体，其特征在于：所述T细胞受体的α链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示或与其相似性不小于80％的氨基酸序列，所述TCR的β链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或与其相似性不小于80％的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的一种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体，其特征在于：编码所述ACDR1的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，编码所述ACDR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，编码所述ACDR3的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，编码所述BCDR1的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，编码所述BCDR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，编码所述BCDR3的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。4.根据权利要求1所述的一种特异性识别SARS
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2新冠病毒S蛋白抗原肽的T细胞受体，其特征在于：编码所述α链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，编码所述β链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示。5.权利要求1所述的一种特异性识别SARS<...

【专利技术属性】
技术研发人员：方钟，张毅，李亚明，张荣，白金金，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：