本发明专利技术提供了一种通用流感mRNA疫苗，所述通用流感mRNA疫苗编码的蛋白由甲型流感病毒的基质蛋白2胞外结构域(M2e)、血凝素(HA)茎部LAH区域和核蛋白(NP)组成。此外，本发明专利技术还提供了通用流感mRNA疫苗在小鼠动物模型中的应用，该通用流感mRNA疫苗可诱导强烈的体液免疫和细胞免疫应答，能够保护动物模型小鼠免受多种甲型流感病毒的侵害。通用流感mRNA疫苗安全有效，且具备快速生产平台，是新一代通用型流感疫苗研发的理想目标。疫苗研发的理想目标。
【技术实现步骤摘要】
一种编码通用流感的mRNA疫苗及其用途
[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种包含编码通用流感的mRNA疫苗。此外，本专利技术还涉及该mRNA疫苗在小鼠模型中的应用。
技术介绍
[0002]流感病毒是一种造成人类或动物患上流行性感冒的RNA病毒，会造成急性上呼吸道感染，并借由空气传播极易在世界各地引起周期性的大流行(一般流行于每年冬春季和夏季)。世界卫生组织(WHO)建议每年接种流感疫苗，这是预防流感的最有效方法。然而由于流感病毒血凝素(HA)常发生抗原漂移和/或抗原转换，造成疫苗毒株的抗原性与流行毒株不匹配，从而导致目前的流感疫苗不能有效预防季节性和大流行性流感。据报道，全球范围内季节性流感疫苗效力仅为10％～60％。因此市场迫切需要研发出一款靶向保守流感病毒抗原表位的通用型疫苗。本专利技术将流感病毒三种保守且具有免疫原性的区域，即基质蛋白M2胞外结构域，血凝素HA茎部结构域，核蛋白NP组合在一起，以更加广泛性触发免疫保护效果。
[0003]当前市面上存在的流感疫苗主要有流感裂解疫苗、流感减毒疫苗、蛋白亚单位疫苗。无论是传统的基于鸡胚生产的流感裂解疫苗，还是基于细胞基质或者重组蛋白方式生产的流感疫苗生产时间均较长。流感相关mRNA疫苗的研发可以避开细胞发酵等一系列复杂生物活性过程，只需要体外合成mRNA即可，极大程度提高了研发速度，简化了工艺步骤。不管是针对某个流感毒株的特异性疫苗还是通用型疫苗，通过mRNA技术都可以将候选流感疫苗快速推进到临床试验阶段。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供一种包含编码通用流感的mRNA疫苗及其应用。
[0005]具体地，本专利技术要解决的技术问题之一是提供一种包含编码通用流感的mRNA疫苗。
[0006]本专利技术要解决的技术问题之二是提供包含编码通用流感的mRNA疫苗的制备方法。
[0007]本专利技术要解决的技术问题之三是提供包含编码通用流感的mRNA疫苗的应用。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白从N端到C端具有如下式(I)或(II)所示的结构：
[0009]S
‑
M
‑
H
‑
N(I)，
[0010]S
‑
H
‑
M
‑
N(II)，
[0011]式中，
[0012]“‑”
各自独立地为键或连接肽；
[0013]S为无或信号肽；
[0014]M为无、或n个串联的流感病毒基质蛋白2胞外结构域(M2e)或其免疫原性片段；
[0015]H为无、或m个串联的血凝素(HA)茎部(LAH)区域或其免疫原性片段；
[0016]N为核蛋白NP、或其免疫原性片段；
[0017]其中，n为1
‑
6的整数；
[0018]m为1
‑
6的整数，优选为1、2或3；
[0019]并且M和H不同时为无。
[0020]在另一优选例中，n为1、2、3或4。
[0021]在另一优选例中，m为1、2或3。
[0022]在另一优选例中，所述的信号肽包括组织型纤溶酶原激活剂信号肽、或血清免疫球蛋白E的信号肽、或其组合。
[0023]在另一优选例中，S具有如SEQ ID NO:1第1
‑
23位所示的氨基酸序列。
[0024]在另一优选例中，所述重组蛋白在细胞中合成时不进入细胞核。
[0025]在另一优选例中，所述的核蛋白(NP)包括：来自PR8毒株的NP蛋白，或其同源序列。
[0026]在另一优选例中，所述的来自PR8毒株的NP蛋白是由野生型PR8毒株NP蛋白经过一个或多个核定位信号区中的氨基酸突变产生的。
[0027]在另一优选例中，所述的核定位信号区包括SEQ ID NO:10所示序列第2
‑
12位、第197
‑
215位、第339
‑
344位、或其组合。
[0028]在另一优选例中，所述的突变位于对应于SEQ ID NO:10所示序列第6、7、212、213、214、215、341、342位氨基酸、或其组合。
[0029]在另一优选例中，所述的突变包括选自下组的突变：K6P、R6P、R212P、K213P、R215P、R341P、V342L、或其组合，所述氨基酸位置编号对应于突变后序列SEQ ID NO:10的位置编号。
[0030]在另一优选例中，所述的核蛋白的氨基酸序列选自下组：
[0031](N1)如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；
[0032](N2)在如SEQ ID NO:10所示序列的基础上，进行一个或多个氨基酸残基的替换、缺失、改变或插入，或在其N端或C端添加1至30个氨基酸残基，较佳地1
‑
10个氨基酸残基，更佳地1
‑
5个氨基酸残基，从而获得的氨基酸序列；并且所述获得的氨基酸序列与如SEQ ID NO:10所示序列具有≥85％(优选地≥90％，更优选地≥95％，例如≥96％、≥97％、≥98％或≥99％)的序列同一性；并且所获得的氨基酸序列与(N1)中的序列具有相同或相似的免疫原性，并且不发生核定位。
[0033]在另一优选例中，所述的M为n个串联的相同或不同的M2e。
[0034]在另一优选例中，所述的流感病毒来源于人流感、禽流感、猪流感、或其组合。
[0035]在另一优选例中，所述的流感病毒为甲型流感病毒。
[0036]在另一优选例中，所述的M2e的氨基酸序列选自下组：
[0037](M1)如SEQ ID NO:3
‑
6中任一所示的氨基酸序列；
[0038](M2)在如SEQ ID NO:3
‑
6中任一所示序列的基础上，进行一个或多个氨基酸残基的替换、缺失、改变或插入，或在其N端或C端添加1至3个氨基酸残基，较佳地1
‑
2个氨基酸残基，更佳地1个氨基酸残基，从而获得的氨基酸序列；并且所述获得的氨基酸序列与如SEQ ID NO:3
‑
6中任一所示序列具有≥85％(优选地≥90％，更优选地≥95％，例如≥96％、≥97％、≥98％或≥99％)的序列同一性；并且所获得的氨基酸序列与(M1)中的序列具有相同或相似的免疫原性。
[0039]在另一优选例中，所述的M从N端到C端具有如下式(III)所示结构：
[0040]M1
‑
M2
‑
M3
‑
M4(III)；
[0041]式中，
[0042]“‑”
各自独立地为键或连接肽；
[0043]M1、M2、M3、和M4各自独立地为无或M2e或其免疫原性片段，且M1、M2、M3、和M4不同时为无。
[0044]在另一优选例中，M1、本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白从N端到C端具有如下式(I)或(II)所示的结构：S
‑
M
‑
H
‑
N(I)，S
‑
H
‑
M
‑
N(II)，式中，
“‑”
各自独立地为键或连接肽；S为无或信号肽；M为无、或n个串联的流感病毒基质蛋白2胞外结构域(M2e)或其免疫原性片段；H为无、或m个串联的血凝素(HA)茎部(LAH)区域或其免疫原性片段；N为核蛋白NP、或其免疫原性片段；其中，n为1
‑
6的整数，m为1
‑
6的整数；并且M和H不同时为无。2.如权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于，所述的核蛋白(NP)是由野生型PR8毒株NP蛋白经过一个或多个核定位信号区中的氨基酸突变产生的，所述的核定位信号区包括SEQ ID NO:10所示序列第2
‑
12位、第197
‑
215位、第339
‑
344位、或其组合。3.如权利要求2所述的重组蛋白，其特征在于，所述的突变位于对应于SEQ IDNO:10所示序列第6、7、212、213、214、215、341、342位氨基酸、或其组合。4.如权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于，所述的核蛋白的氨基酸序列选自下组：(N1)如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；(N2)在如SEQ ID NO:10所示序列的基础上，进行一个或多个氨基酸残基的替换、缺失、改变或插入，或在其N端或C端添加1至30个氨基酸残基，较佳地1
‑
10个氨基酸残基，更佳地1
‑
5个氨基酸残基，从而获得的氨基酸序列；并且所述获得的氨基酸序列与如SEQ ID NO:10所示序列具有≥85％(优选地≥90％，更优选地≥95％，例如≥96％、≥97％、≥98％或≥99％)的序列同一性；并且所获得的氨基酸序列与(N1)中的序列具有相同或相似的免疫原性，并且不发生核定位。5.如权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于，所述的n个M2e的氨基...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗剑，熊斐斐，商宝元，郑眉，李秀玲，
申请(专利权)人：上海生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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