一种中大型成年鱼类个体透明染色标本的制作方法技术

本发明专利技术提供了一种中大型成年鱼类个体透明染色标本的制作方法，属于标本制作领域，所述方法包括样品预处理、标本制作和标本保藏；所述的标本制作包括去鳞去皮、无水乙醇固定、骨骼染色、透明化预处理和透明化；本发发明专利技术采用精准定点肌肉注射胰蛋白酶消化液的方法，能够加快消化进程，从而缩短制作过程；本发明专利技术将消化后的标本先后移至两种氢氧化钾

【技术实现步骤摘要】
一种中大型成年鱼类个体透明染色标本的制作方法


[0001]本专利技术属于标本制作领域，具体地涉及一种中大型成年鱼类个体透明染色标本的制作方法。

技术介绍

[0002]在一般科普、科研与教学活动中，常见的鱼类标本类型有干制标本、浸制标本和骨骼标本等。透明骨骼染色标本是一种特色性标本，既是研究鱼类骨骼解剖学的必要材料，又是较稀有美观的展览展示用标本。在鱼类发育学、形态学、解剖学乃至于遗传进化的研究中，该类型标本都是重要的研究对象，但目前常用的制作方法，有很大的缺陷，无法使中大型鱼类的软组织透明化完全，一般仅能将鱼类幼体或体长小于10cm、不超过50g的成年鱼个体制作成透明骨骼染色标本，极大地限制了该类标本的应用范围。目前国内外各大鱼类相关科研机构和博物馆、标本馆都在积极研发鱼类中大型成年个体的透明骨骼染色标本的制作工艺，但仅有个别成功案例，已知的有鲽类、鲇类、鲉类的成年个体，体长一般不超过20cm，体重不超过100g。不同科目的鱼类软组织的透明化效果往往因为成分、结构的不同，而有所差异。油脂含量、组胺含量、氨基酸偏好、连接性软组织位置、骨骼构造等因素都有可能导致标本的制作失败。失败分为透明化不完全和透明过度两种。透明化不完全会导致无法清晰观察到内部骨骼，透明过度则会导致标本的破损，鱼鳍、颌骨等部位的脱落或腹腔的破裂。

技术实现思路

[0003]本专利技术要解决的技术问题在于提供一种中大型成年鱼类个体透明染色标本的制作方法，本专利技术方法制作的标本不局限于鱼类幼体或者体长不超过10cm的尺寸，通过改良的透明化工艺流程，能够将10cm
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50cm的鱼类成年个体制作成透明骨骼染色标本。
[0004]本专利技术是通过如下技术方案来实现的：
[0005]一种中大型成年鱼类个体透明染色标本的制作方法，所述方法包括样品预处理、标本制作和标本保藏；
[0006]所述的标本制作包括去鳞去皮、无水乙醇固定、软骨染色、中和、硬骨染色、透明化预处理和透明化；
[0007]所述的透明化预处理：对于内部有较多色素沉积的个体采用质量百分比3％双氧水脱色处理；对于油脂含量丰富的鱼类使用脂肪酶溶液浸泡，分解多余的脂肪；
[0008]所述的透明化：使用胰蛋白酶溶液进行消化，对于软组织厚或者致密的标本，参照X光或CT照片，使用多孔注射器将质量百分比1％胰蛋白酶溶液注射入大型肌肉群中，注意避开重要的骨与骨间的连接性结缔组织和肌肉束，注射位置在轴上肌第二肌节至倒数第五肌节之间和腹椎后轴下肌第二肌节至倒数第五肌节之间区域，以及包括下颌收肌第一分肌在内的大肌肉束，37℃恒温浸泡于质量百分比0.5％胰蛋白酶溶液中消化2
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5天；将消化后的标本先后移至两种氢氧化钾
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水
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甘油
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二甘醇体系中浸泡，第一种试剂成分为质量百分
比1.5％的氢氧化钾水溶液、纯甘油和二甘醇以7：2：1的体积比进行配制，浸泡3
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7天；第二种试剂成分为质量百分比1.5％的氢氧化钾水溶液、纯甘油和二甘醇以4：4：2的体积比进行配制，浸泡5
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10天；之后转入二甘醇
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甘油中静置1
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3个月完成透明化，二甘醇和甘油体积比为1：1。
[0009]优选的，所述的无水乙醇固定：将鱼体放入无水乙醇中固定，体长30cm以上或体重500g以上的鱼类在浸泡前需将无水乙醇注入腹腔内固定内脏。
[0010]优选的，所述的软骨染色：将无水乙醇固定后的鱼体移至阿利新兰染色液中浸泡1
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4天，之后转入清水中清洗，洗去多余染色液。
[0011]优选的，所述的中和：将水洗后的鱼体移至饱和硼酸钠的溶液中浸泡2
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5天。
[0012]优选的，所述的硬骨染色：将中和后的鱼体移至茜素红染色液中浸泡2
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4天，之后转入清水中清洗1
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2小时，洗去多余染色液。
[0013]优选的，对于体长超过20cm的鱼类个体需在二甘醇
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甘油化处理完后，再移入短期保存液中，所述的短期保存液为含有体积比0.1％麝香酚的二甘醇
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甘油体系，二甘醇和甘油体积比为1：2，直至透明化完全。
[0014]本专利技术与现有技术相比的有益效果：
[0015](1)本专利技术突破了鱼类的透明骨骼染色标本的体积和鱼龄的局限，原有方法只能制作鱼幼体和体长不超过10cm、体重不超过50g的鱼的透明骨骼染色标本，本专利技术能够制作体长10
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50cm、体重0
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1kg的鱼类成年个体的透明骨骼染色标本。
[0016](2)本专利技术相较于其它制作鱼类透明骨骼染色标本的方法，在处理相同体积大小相同种类鱼时，制作周期更短。
[0017](3)本专利技术采用脂肪酶分解脂肪的方法，去除鱼体内多余油脂，避免油脂对透明化造成的影响。
[0018](4)本专利技术在透明化过程中运用解剖学知识理论，精准定点肌肉注射胰蛋白酶消化液。采用胰蛋白酶消化液可排除氨基酸偏好的干扰，由于鱼体软组织的厚薄程度不同，在相同的消化条件下各部位的消化程度有差异。避开重要的连接部位进行注射，可防止消化过度导致的鱼体破坏，将高浓度蛋白酶消化液注射入大肌肉群内，又能加快消化进程，从而缩短制作过程。
[0019](5)本专利技术将消化后的标本先后移至两种氢氧化钾
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水
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甘油
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二甘醇体系中浸泡，再转入二甘醇
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甘油中完成透明化，相较于以往氢氧化钾
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水
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甘油的体系来说，既能够使透明化更快更完全，又能排除组胺、色素等干扰。经实验所得结果表明，本专利技术的透明化效果明显优于其他方法。
[0020](6)本专利技术方法进行精准定点肌肉注射胰蛋白酶消化液时，采用了软X光照相系统或动物CT呈像系统对骨骼拍照作为参考，极大保证了注射位置的准确性。
[0021](7)本专利技术制得标本的浸泡液和保存液的配方稳定性强、无挥发性、无毒性、不易燃、不易与接触物发生化学反应，标本保藏效果持久，适宜用于展览展示。
附图说明
[0022]图1为实施例1中所使用的多孔注射器，1、针筒，2、芯杆，3、胶塞，4、固定体，5、针、6、外螺纹；
[0023]图2为利用本专利技术方法成功制备的中大型成年鱼类透明骨骼染色标本；
[0024]图3为本专利技术方法与现有技术对鱼类标本进行透明化的处理结果对比图；其中a为第二组透明化处理，b为第一组透明化处理，c为第三组透明化处理。
具体实施方式
[0025]下面通过实施例来对本专利技术的技术方案做进一步解释，但本专利技术的保护范围不受实施例任何形式上的限制。
[0026]实施例1
[0027]一种中大型成年鱼类个体透明染色标本的制作方法，所述方法包括样品预处理、标本制作和标本保藏，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中大型成年鱼类个体透明染色标本的制作方法，所述方法包括样品预处理、标本制作和标本保藏；所述的标本制作包括去鳞去皮、无水乙醇固定、软骨染色、中和、硬骨染色、透明化预处理和透明化，其特征在于：所述的透明化预处理：对于内部有较多色素沉积的个体采用质量百分比3％双氧水脱色处理；对于油脂含量丰富的鱼类使用脂肪酶溶液浸泡，分解多余的脂肪；所述的透明化：先使用胰蛋白酶溶液进行消化，对于软组织厚或者致密的标本，参照X光或CT照片，使用多孔注射器将质量百分比1％胰蛋白酶溶液注射入大型肌肉群中，注意避开重要的骨与骨间的连接性结缔组织和肌肉束，注射位置在轴上肌第二肌节至倒数第五肌节之间和腹椎后轴下肌第二肌节至倒数第五肌节之间区域，以及包括下颌收肌第一分肌在内的大肌肉束，37℃恒温浸泡于质量百分比0.5％胰蛋白酶溶液中消化2
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5天；将消化后的标本先后移至两种氢氧化钾
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水
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甘油
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二甘醇体系中浸泡，第一种体系的试剂成分为质量百分比1.5％的氢氧化钾水溶液、纯甘油和二甘醇以7：2：1的体积比进行配制而成，浸泡3
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7天；第二种体系的试剂成分为质量百分比1.5％的氢氧化钾水溶液、纯甘油和二甘醇以4：4：2的体积比进行配制，浸泡5
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10天；之后转入二甘醇
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甘油中静置1

【专利技术属性】
技术研发人员：亢世华，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：