一种通过级联聚合反应生成尺寸可控的通用多聚显色物的方法技术

本发明专利技术公开了一种“一拖多”形式的能发生正交点击化学反应的分子元件组合物以及通过级联的多聚伞状反应制备伞状多聚物的方法。该组合物，包括分子元件M和分子元件N；分子元件M是在基础物质m上连接了互不干扰的点击化学基团p2，q1，其中，一种基团数目为1，即单价，则另一种基团数目大于1，即多价；分子元件N是在基础物质n上连接了互不干扰的点击化学基团p1，q2，其中，一种基团数目为1，即单价，则另一种基团数目大于1，即多价；元件M的单价端与元件N的多价端形成一组正交点击化学反应，而元件M的多价端与元件N的单价端形成另一组正交的点击化学反应。本发明专利技术提供的分子元件组合物可用于合成伞状多聚物。合成伞状多聚物。

【技术实现步骤摘要】
一种通过级联聚合反应生成尺寸可控的通用多聚显色物的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种通过级联聚合反应生成尺寸可控的通用多聚显色物的方法。

技术介绍

[0002]在基于分子染色的检测技术中，我们可以框架性的把染色分子分成两个模块，(A)结合目标分子的识别模块，(B)负责信号显示的显色模块。染色分子或分子复合物通过(A)
‑
(B)的结构进行目标物的显示。
[0003]显色模块B有许多种类，比如荧光基团，胶体物质，化学发光基团，酶等，配合下游的相关路线，构成各种相关的显色方法学，以抗原抗体反应为例，可以分别产生但不限于免疫荧光，侧向层析，电化学发光，免疫组化等方法学。
[0004]为产生灵敏的显色信号，对于B模块，把显色基团多聚在和识别模块A结合，构成(A)
‑
(B)n的结构。其中使用最广泛的是免疫组化中的二抗染色。在二抗染色分子中，(A)是识别一抗Fc端的抗体，(B)n是多聚酶，通常为辣根过氧化酶。目前，生成多聚酶的方式主要有两种，一种是团聚法，即把单体酶随机交联团聚，形成团聚型多聚酶；二是链式法，即把单体酶和一个链式多聚物，如葡聚糖连接在一起，形成长链型多聚酶。
[0005]现有的方法对于多聚物大小控制力弱，既对于(B)n，n值控制不易，导致产物的尺寸受限，或者均一性不佳。另外，目前多聚显色物主要集中在多聚酶，对于多聚荧光等另外的多聚显色物不易生成，缺乏通用的办法。

技术实现思路

[0006]本专利技术通过制作分子元件M和N，在两种不互相干扰的点击化学反应作用下形成由M和N构成的伞状多聚物，其尺寸大小由反应轮数控制。并且，在伞状多聚物外周的点击化学基团可以方便的插上各类显色基团，生成可控尺寸的通用多聚显色物。
[0007]本专利技术的第一个目的是提供一种“一拖多”形式的能发生正交点击化学反应的分子元件组合物。
[0008]本专利技术所提供的分子元件组合物，包括分子元件M和分子元件N；
[0009]所述分子元件M是在基础物质m上连接了互不干扰的点击化学基团p2，q1，其中p2，q1的数量有特别的安排，一种基团数目为1(即单价)，则另一种基团数目大于1(即多价)；
[0010]所述分子元件N是在基础物质n上连接了互不干扰的点击化学基团p1，q2，其中p1，q2的数量有特别的安排，一种基团数目为1(即单价)，则另一种基团数目大于1(即多价）；
[0011]所述分子元件M的单价端与所述分子元件N的多价端形成一组正交点击化学反应，而所述分子元件M的多价端与所述分子元件N的单价端形成另一组正交的点击化学反应；
[0012]所述点击化学反应，其中一组反应的功能团为p1,q1，另一组反应的功能团为p2,q2；
[0013]其中，所述p1，q1通过混合即通过点击化学反应生成共价键；所述p2,q2通过混合即通过点击化学反应生成共价键；
[0014]且所述(p1,p2)、(p1,q2)、(p2,q1)、(q2,q2)两两之间均不会相互发生反应，即上述两组点击化学反应有正交性。
[0015]进一步的，所述基础物质m和基础物质n可为多肽或DNA。
[0016]所述基础物质m和基础物质n可以相同或不同。
[0017]本专利技术中所述分子元件M以及分子原件N的合成方法可按照现有技术公开的常规修饰方法在基础物质M或N上连接上相应的点击化学基团。
[0018]根据本专利技术的一个实施例，两对正交的点击化学反应为(p1,q1,例如，p1可以是azide
‑
叠氮基，q1可以是DBCO
‑
二苯并环辛炔基；或p1可以是azide
‑
叠氮基，q1可以是BCN
‑
双环[6.1.0]壬炔；或p1可以是azide
‑
叠氮基，q1可以是propargyl
‑
炔丙基)和(p2,q2,p2可以是Tetrazine
‑
四嗪基，q2可以是TCO
‑
反式环辛烯基)。
[0019]对于分子元件M，其基础物质m可以为一段多肽(序列为GGGSYPYDVPDYAGKPIPNPLLGLDSTEQKLISEEDLC)，其上通过Maleimide反应带上1个q1(即DBCO或BCN或propargyl)，通过NHS反应带上多(此例为2)个p2(即Tetrazine)，则M＝q1
‑
m
‑
(p2)2，
‘‑’
代表共价键。
[0020]同理，对于分子元件N，其基础物质n可以为一段多肽(序列为GGGSYPYDVPDYAGKPIPNPLLGLDSTEQKLISEEDLC)，其上通过NHS反应带上多(此例为2)个的p1(即azide)，通过Maleimide反应带上1个q2(即TCO)，则N＝q2
‑
n
‑
(p1)2,
‘‑’
代表共价键。
[0021]本专利技术提供的分子元件组合物可用于合成伞状多聚物。
[0022]本专利技术的第二个目的是提供一种通过级联的多聚伞状反应制备伞状多聚物的方法。
[0023]本专利技术所提供的制备伞状多聚物的方法，包括下述步骤：
[0024]1)在固相基质上可逆固定上述分子元件M；
[0025]2)在第1轮的反应下，用过量的上述分子元件N与固定的分子元件M孵育，在点击化学(p2,q2)的作用下，生成M
‑
2N的结构，洗去过量的N；
[0026]3)在第2轮的反应下，用过量的分子元件M与固定的M
‑
2N孵育，在点击化学(p1,q1)的作用下，生成M
‑
2N
‑
4M的伞状结构，洗去过量的M；
[0027]4)在第3轮的反应下，用过量的分子元件N与固定的M
‑
2N
‑
4M孵育，在点击化学(p2,q2)的作用下，生成M
‑
2N
‑
4M
‑
8N的伞状结构，洗去过量的N；
[0028]5)以此类推，可以根据反应的轮次，生成可控大小的伞状多聚物。
[0029]上述方法中，所述固相基质可为交联于琼脂糖凝胶上的修饰p1(如azide)的蛋白。所述琼脂糖凝胶具体可采用Ni NTA Beads 6FF珠子。
[0030]本专利技术的第三个目的是提供一种伞状多聚显色物的合成方法。
[0031]当所需尺寸的伞状多聚物生成完毕，最外周会留下多价端的点击化学基团(在此例是p1或p2)。使显色基团(包括荧光，化学发光分子，酶等)带上互补的点击化学基团(在此例是q1或q2)，与伞状物进行孵育，即得到相应尺寸的各类伞状多聚显色物。
[0032]本专利技术所提供的伞状多聚显色物的合成方法，包括下述步骤：
[0033]1)按照上述方法合成伞状多聚物；
[0034]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能发生正交点击化学反应的分子元件组合物，包括分子元件M和分子元件N；所述分子元件M是在基础物质m上连接了互不干扰的点击化学基团p2，q1，其中，一种基团数目为1，即单价，则另一种基团数目大于1，即多价；所述分子元件N是在基础物质n上连接了互不干扰的点击化学基团p1，q2，其中，一种基团数目为1，即单价，则另一种基团数目大于1，即多价；所述分子元件M的单价端与所述分子元件N的多价端形成一组正交点击化学反应，而所述分子元件M的多价端与所述分子元件N的单价端形成另一组正交的点击化学反应；所述点击化学反应，其中一组反应的功能团为p1，q1，另一组反应的功能团为p2,q2；其中，所述p1，q1通过混合即通过点击化学反应生成共价键；所述p2，q2通过混合即通过点击化学反应生成共价键；且所述(p1,p2)、(p1,q2)、(p2,q1)、(q2,q2)两两之间均不会相互发生反应，即上述两组点击化学反应有正交性。2.根据权利要求1所述的分子元件组合物，其特征在于：所述基础物质m和基础物质n为多肽或DNA；所述基础物质m和基础物质n可以相同或不同。3.根据权利要求1或2所述的分子元件组合物，其特征在于：两对正交的点击化学反应为p1,q1反应以及p2,q2反应；所述p1是azide
‑
叠氮基，q1是DBCO
‑
二苯并环辛炔基；或，所述p1是azide
‑
叠氮基，q1是BCN
‑
双环[6.1.0]壬炔；或，所述p1是azide
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叠氮基，q1是propargyl
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炔丙基；或，所述p2是Tetrazine
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四嗪基，q2是TCO
‑
反式环辛烯基。4.一种通过级联的多聚伞状反应制...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈韬，吕爽，
申请(专利权)人：苏州有诺真生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：