一种幽门螺旋杆菌抗原胶体金检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种幽门螺旋杆菌抗原胶体金检测试剂盒及其应用，所述检测试剂盒包括试纸条，试纸条包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体1，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线；所述样品垫上含有烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐和环氧丙烷环氧乙烷乙烯基二元胺共聚物。本发明专利技术一方面是可以有效的增加玻璃纤维膜的吸湿性，保证液体的向上层析；另一方面是可以增加产品的灵敏度，特别是能够同时提高在检测粪便样品和唾液样品时的灵敏度。液样品时的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺旋杆菌抗原胶体金检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于医药生物
，具体涉及一种幽门螺旋杆菌抗原胶体金检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，HP)是上消化道疾病的主要致病菌，他的感染不但与B型胃炎、消化性溃疡、MALT淋巴瘤和胃癌的发生有密切关系，而且与胃肠道外疾病的发生也有重要关系，已被世界卫生组织列为胃癌等恶性肿瘤发生的相关致病菌[1
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8]。Hp在我国普通人群的感染率较高，达到50～80％，并仍以每年1～2％的速度增加，每年新增感染病例超过1200万人，因此，Hp的诊断及根除治疗日益受到重视。
[0003]目前，对于幽门螺杆菌的感染诊断方法有生化实验检测，形态学检测，分离培养检测，免疫学检测，核酸检测等方法。其中免疫学检测又分为检测抗原的方法和血清学检测抗体的方法。对于幽门螺杆菌抗原的检测主要是针对粪便样本中的检测；有少量文献报道唾液，唾液中能检测出幽门螺杆菌，且这类检测试剂都是针对单一样本进行检测。目前，针对粪便中的幽门螺杆菌抗原的检测方法有免疫胶体金检测试剂盒，免疫荧光检测试剂盒及免疫乳胶检测试剂盒。
[0004]胶体金标记技术是上世纪80年代发展起来的技术。1971年Faulk和Taylor将胶体金引入到免疫化学中，此后，该标记方法在药物检测、生物医学等许多领域得到了广泛的应用。目前国内外已经有约几百余种商品化胶体金试剂盒出售，如最常见的早早孕检测试纸、淋病检测盒等。胶体金快速检测技术是一项新兴的检测技术，目前已经应用到农兽药残留检测、临床疾病检测、毒品检测等多个领域。随着广泛的应用，该项技术逐步趋向于成熟化。本项目计划将抗Hp抗原的抗体做为包被源、羊抗鼠IgG等生物原料作为检测线和质控线包被在硝酸纤维素膜等载体上；与包被在聚酯膜上的金标记与包被抗体有竞争关系的抗Hp单克隆抗体等生物学原料及样品垫，滤纸等其它试剂共同组成产品检测试剂条。该试纸条需在确定阈值范围内，定性检测人粪便中的幽门螺杆菌的含量。
[0005]例如，中国授权专利CN104897892B公开了一种幽门螺旋杆菌抗原胶体金检测试剂盒，所述检测试剂盒用于检测样品中的幽门螺旋杆菌抗原，所述样品具体为人粪便，所述检测试剂盒包括试纸条，试纸条包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体
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1，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线；所述金标垫采用缓冲液预处理，所述缓冲液为甘氨酸缓冲液；所述甘氨酸缓冲液中添加的成分为NaCl和冠醚，所述冠醚为18
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冠醚
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6，所述NaCl在所述缓冲液中的浓度为0.25
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0.5mg/ml，冠醚在所述缓冲液中的浓度为4
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8mg/ml。
[0006]检测过程中，先将粪便标本稀释，然后将稀释样本加在产品的加样孔位置，样品通过玻璃纤维垫，然后与金标抗体一起在硝酸纤维素膜上进行层析。如果样本中不含有目标物质，金标记的抗体会随着溶液在硝酸纤维素膜上层析，不会与包被在硝酸纤维素膜上T线
位置的抗体，形成抗体
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目标物质
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抗体的夹心物，从而不能被T线捕获，因而无法在T线区域形成一条红色的条带。若样本中含有目标物质，目标物质首先会与金标抗体结合，然后一起在硝酸纤维素膜上层析，当层析至T线区域时，目标位置会与T线位置包被的抗体结合，从而形成，金标抗体
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目标物质
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包被抗体夹心结合物，从而在T线位置形成一条红色条带，为阳性结果。
[0007]然而，目前的幽门螺杆菌抗原检测胶体金试纸灵敏度低；对于家庭使用，有时候不能检出样本中的幽门螺杆菌，不能很好的起到预警作用。另外，目前的幽门螺杆菌抗原检测胶体金试纸通常仅针对粪便单一样本，对于同时能够检测粪便和唾液样本的幽门螺杆菌抗原检测胶体金试纸较少被报道。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于一种幽门螺杆菌抗原检测胶体金试纸及其应用，以提高检测灵敏度，并且能够同时适用于粪便样本和唾液样本。为了实现本专利技术的目的，拟采用如下技术方案：
[0009]本专利技术提供了一种幽门螺旋杆菌抗原胶体金检测试剂盒，所述检测试剂盒包括试纸条，试纸条包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体
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1，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线；所述样品垫上含有烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐和环氧丙烷
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环氧乙烷
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乙烯基二元胺共聚物。
[0010]对于本专利技术的烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐，没有特别的限定，例如可以是乳化剂A103/乳化剂YC103等单一成分且烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐的含量大于90％的表面活性剂。
[0011]对于本专利技术的环氧丙烷
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环氧乙烷
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乙烯基二元胺共聚物，也没有特别的限定，例如可以是Tetronic 1307、Pluronic(泊洛沙姆)407或Pluronic188。
[0012]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述的样品垫通过含有烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐和环氧丙烷
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环氧乙烷
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乙烯基二元胺共聚物的处理液得到，其中，每100份所述处理液含有0.1份
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1份的烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐和1份
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1.5份的环氧丙烷
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环氧乙烷
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乙烯基二元胺共聚物。需要说明的是，这一比例范围是是通过对烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐和环氧丙烷
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环氧乙烷
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乙烯基二元胺共聚物的每百分溶液中加入的量的正交实验获得最佳范围。
[0013]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述胶体金的平均粒径为80
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120nm。
[0014]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述试剂盒还含有样本稀释液，每100份稀释液中含有0.5
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0.7份的磷酸二氢钠、6
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10份的氯化钠、0.1
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0.3份磷酸二氢钾和0.01
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0.03份Proclin 300进行溶液配制，pH调至7.5
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8.5。
[0015]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述试纸条为横向层析试纸条或竖向层析试纸条；优选为竖向层析试纸条，所述试剂盒为试剂杯。
[0016]本专利技术另一方面还涉及上述试剂盒在制备检测幽门螺旋杆菌的检测试剂中的应用。
[0017]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述检测试剂的检测样本是粪便和/或唾液。
[0018]本专利技术的有益效果在于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺旋杆菌抗原胶体金检测的试剂盒，所述试剂盒包括试纸条，试纸条包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体
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1，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线；所述样品垫上含有烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐和环氧丙烷环氧乙烷
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乙烯基二元胺共聚物。2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐选自乳化剂A103和/或乳化剂YC103。3.根据权利要求1所述的试剂盒，所述环氧丙烷
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环氧乙烷
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乙烯基二元胺共聚物选自Tetronic 1307、Pluronic(泊洛沙姆)407或Pluronic188中的一种或者多种的组合。4.根据权利要求1
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3任意一项所述的试剂盒，所述的样品垫通过含有烷基酚聚氧乙烯醚磺基琥珀酸单脂钠盐和环氧丙烷
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环氧乙烷
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乙烯基二元胺共聚物的处理液得到，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：卜令杰，李杨霞，吴苑，程金放，
申请(专利权)人：浙江默乐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：