一种快速测定苏氨酸含量的方法技术

本发明专利技术涉及生物发酵工程技术领域中检测生产过程样中苏氨酸含量的方法，尤其是涉及一种快速测定苏氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤：配置不同浓度的标准苏氨酸溶液，然后分别取一定量标准苏氨酸溶液和样品溶液，再分别加入缓冲液和显色液，在一定温度下水浴后，利用分光光度计进行比色测定吸光度，根据吸光度测定结果绘制标准曲线后，计算样品中苏氨酸含量；本发明专利技术快速、简便且误差值较小的优点，可将测量时间控制在一个小时之内，误差控制在２％以内。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物发酵工程
中检测生产过程样中苏氨酸含量的方法，尤其是涉及。
技术介绍
目前在检测溶液中苏氨酸含量时，实验室中可采用高效液相色谱或氨基酸分析 仪，但是由于此种方法中使用的仪器价格昂贵，很难进行普及。而实验室常用的方法为设备 要求不高的纸层析法，纸层析法使用设备较少，相对比较方便。但是纸层析法每次测量时间 大约在3-4h左右，并且准确率很低，误差值可达10%左右，并且由于测量时间较长，很难进 行复测，因此很难对工业化生产进行直接指导。
技术实现思路
本专利技术的目的主要是克服现有技术的不足，提供一种检测快、准确率高、操作简便的。本专利技术通过如下方式实现 —种快速测定苏氨酸含量的方法，其特征在于该方法包括如下步骤先配制不同浓度的标准苏氨酸溶液，然后分别取lml上述配置好的不同浓度的标准苏氨酸溶液和lml需要测定的样品溶液加入到不同试管中，再分别加入2ml缓冲液和lml茚三酮显色液到上述各个试管中，水浴一定时间后降温冷却至室温，然后再往上述各个试管中加入10ml蒸馏水，然后用分光光度计测定吸光值，将标准苏氨酸溶液的浓度与其对应的吸光值绘制标准曲线，根据样品反应后的吸光值以及稀释倍数便可计算出样品溶液中苏氨酸浓度； 所述配制的标准苏氨酸溶液浓度在0. lg/L到0. 5g/L之间； 所述样品溶液先进行稀释，使稀释后苏氨酸的浓度在0. 20g/L到0. 35g/L之间； 所述缓冲液为0. 2mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，其pH值为6. 00 ; 所述茚三酮显色液中，茚三酮浓度为10g/L，无水硫酸铜浓度为16g/L ; 所述水浴温度为95-100°C，水浴时间为8-10分钟；所述分光光度计的波长为500-570nm。 本专利技术具有如下效果 1)方法独特、准确度高本专利技术提供的测定利用 茚三酮在IO(TC左右可与氨基酸反应生成蓝紫色复合物，然后利用分光光度计进行测量吸 光值，利用该原理测定苏氨酸含量的方法中，怎样降低样品中杂质的影响，以及控制测量方 法的误差是决定该方法能否推广的主要因素。在工业化生产中，由于生产工艺较稳定，可 与茚三酮反应的杂质种类相对较少，且杂质含量比较稳定，因此可通过引入校正值和控制 反应条件来消除杂质的影响，茚三酮在IO(TC左右温度下可与苏氨酸反应生成蓝紫色物质， 利用分光光度计检测其在500-570nm下具有较大的吸收值，再通过加入缓冲液控制溶液pH 值，使杂质对测定的影响降到最小。最后通过与标准曲线进行比对进行苏氨酸含量计算。该方法相比纸层析法省去了层析及洗脱步骤，因此在测定时间上大幅度縮短，并且相对纸层 析法取样量的增加以及去除主要引起误差的分离介质，使该方法的准确度得到了较大的提 升。 2)测定方法快速本专利技术提供的方法一次测定时间大约在一个小时左右，可以迅 速的将苏氨酸含量进行反馈，本方法将标准曲线绘制和样品测量同时进行，在试管中分别 加入标准苏氨酸溶液、样品以及缓冲液和茚三酮显色剂进行水浴，反应冷却后加入蒸馏水 进行稀释摇匀，即可比色。样品的处理时间也较短，相对于氨基酸分析仪处理样品和仪器清 洗等要更简便；而纸层析法的层析和洗脱时间较长。后两种方法一次测定时间基本都在三 个小时左右。 3)步骤简便，对操作人员要求不高，可以使化验员快速掌握本专利技术提供的测定 方法涉及到的步骤较简单，容易掌握，即使操作者进行该项工作的时间较短，学历水平不 高，也可以较快掌握。该步骤中主要涉及到试剂配制，移液管取样以及水浴和分光光度计比 色等皆为实验室较常用的技术方法。 4)所需成本较低本专利技术提供的测定方法所需设备、仪器等皆为实验室常有设 备，试剂也为实验室较常用的试剂，在成本上也具有较大优势。 5)通过大量实验证明该方法的平行性较好，同一样品多次测量结果的差值在2% 以内，可以很好的指导生产。 6)控制杂质干扰效果较好，通过对大量试验结果的分析总结，在苏氨酸生产的过 程中，样品中可对该方法影响的杂质种类较少，影响也较小。 7)测定方法准确度较高，通过与氨基酸分析仪对比，该方法测定结果与氨基酸分 析仪测定结果基本一致，差值皆在操作误差之内。具体实施例方式实施例一 一种快速检测苏氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤根据需要分 别配制0. 20g/L、0. 25g/L、0. 30g/L、0. 35g/L的标准苏氨酸溶液，根据估计的样品中苏氨酸 浓度，对样品进行稀释，使稀释后的浓度在0. 20g/L到0. 35g/L之间。分别取1ml标准苏 氨酸溶液和稀释后的样品溶液加入到20X200的试管中，然后再分别加入2ml pH = 6. 00 的0. 2mol/L拧檬酸-拧檬酸钠缓冲液和1ml茚三酮显色液，放入四孔水浴锅中96。C加热 lOmin，取出冷却至室温后，加入10ml蒸馏水并摇匀，然后在分光光度计下用波长530nm测 定吸光度。根据标准苏氨酸溶液浓度和测定吸光度结果绘制标准曲线，然后根据样品吸光 度及稀释倍数计算样品中苏氨酸含量。 实施例二 一种快速检测苏氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤根据需要分 别配制0. 20g/L、0. 25g/L、0. 30g/L、0. 35g/L的标准苏氨酸溶液，根据估计的样品中苏氨酸 浓度，对样品进行稀释，使稀释后的浓度在0. 20g/L到0. 35g/L之间。分别取1ml标准苏 氨酸溶液和稀释后的样品溶液加入到20X200的试管中，然后再分别加入2ml pH = 6. 00 的O. 2mol/L拧檬酸-拧檬酸钠缓冲液和1ml茚三酮显色液，放入四孔水浴锅中96。C加热 8min，取出冷却至室温后，加入10ml蒸馏水并摇匀，然后在分光光度计下用波长540nm测定 吸光度。根据标准苏氨酸溶液浓度和测定吸光度结果绘制标准曲线，然后根据样品吸光度 及稀释倍数计算样品中苏氨酸含量。4 实施例三一种快速检测苏氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤根据需要分 别配制0. 10g/L、0. 20g/L、0. 30g/L、0. 40g/L的标准苏氨酸溶液，根据估计的样品中苏氨酸 浓度，对样品进行稀释，使稀释后的浓度在0. 10g/L到0. 40g/L之间。分别取1ml标准苏 氨酸溶液和稀释后的样品溶液加入到20X200的试管中，然后再分别加入2ml pH = 6. 00 的0. 2mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和1ml茚三酮显色液，放入四孔水浴锅中97。C加热 8min，取出冷却至室温后，加入10ml蒸馏水并摇匀，然后在分光光度计下用波长530nm测定 吸光度。根据标准苏氨酸溶液浓度和测定吸光度结果绘制标准曲线，然后根据样品吸光度 及稀释倍数计算样品中苏氨酸含量。 实施例四一种快速检测苏氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤根据需要分 别配制0. 10g/L、0. 20g/L、0. 30g/L、0. 40g/L的标准苏氨酸溶液，根据估计的样品中苏氨酸 浓度，对样品进行稀释，使稀释后的浓度在O. 10g/L到0.40g/L之间。分别取1ml标准苏 氨酸溶液和稀释后的样品溶液加入到20X200的试管中，然后再分别加入2ml pH = 6. 00 的0. 2mol/L拧檬酸-拧檬酸钠缓冲液和1ml茚三酮显色液，放入四孔水浴锅中98。C加热 lOmin，取出冷却至室温后，加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速测定苏氨酸含量的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：先配制不同浓度的标准苏氨酸溶液，然后分别取１ｍｌ上述配置好的不同浓度的标准苏氨酸溶液和１ｍｌ需要测定的样品溶液加入到不同试管中，再分别加入２ｍｌ缓冲液和１ｍｌ茚三酮显色液到上述各个试管中，水浴一定时间后降温冷却至室温，然后再往上述各个试管中加入１０ｍｌ蒸馏水，然后用分光光度计测定吸光值，将标准苏氨酸溶液的浓度与其对应的吸光值绘制标准曲线，根据样品反应后的吸光值以及稀释倍数便可计算出样品溶液中苏氨酸浓度。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马吉银，刘多涛，
申请(专利权)人：宁夏伊品生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：64[中国|宁夏]