一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒及方法。本发明专利技术的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒包括用于检测CD324和CD49d的试剂。本发明专利技术的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒可以准确鉴定体外分离培养后hAMSCs的纯度，这对羊膜体外分离培养hAMSCs具有重要意义。意义。意义。

【技术实现步骤摘要】
一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)，即多能基质细胞源于发育早期的中胚层和外胚层，是一种具有自我复制、归巢和多向分化潜能的成体干细胞。间充质干细胞广泛来源于脂肪、骨髓、脐带、牙髓、胎盘和羊膜等组织，同时涵盖了间质细胞、内皮细胞及上皮细胞等多类细胞的特征。
[0003]羊膜含有丰富的母体来源MSC，利用MSC贴壁特性，从羊膜体外分离间充质干细胞多使用胰蛋白酶和胶原酶Ⅳ消化羊膜组织使人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)和人羊膜上皮细胞(hAECs)分散，但是这种分离方法没办法完全除尽人羊膜上皮细胞，导致两种细胞互相掺杂，没办法获得高纯度的hAMSCs或hAECs。
[0004]正常情况下，hAMSCs可以通过间充质干细胞表面标志物(CD73、CD90、CD105阳性同时CD34、CD45、CD11b、CD19、HLA
‑
DR阴性)来鉴定，hAECs可通过免疫荧光染色检测细胞角蛋白
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19(CK
‑
19)阳性来鉴定。但是hAECs也有干细胞特性，可以表达间充质干细胞表面标志物，同时免疫荧光染色检测hAMSCs的细胞角蛋白
‑
19(CK
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19)也呈阳性，所以间充质干细胞表面标志物和CK
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19均无法区别hAMSCs和hAECs。因此，寻找高纯度的鉴定hAMSC的标志物，对鉴定体外分离培养的hAMSC细胞至关重要。
[0005]因此，需要提供一种针对上述现有技术不足的改进技术方案。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒及方法，以解决或改善体外分离培养过程中，分离得到的hAMSCs不易与hAECs区分，不易鉴定是否存在hAECs污染的问题。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测CD324和CD49d的试剂。
[0008]优选地，所述用于检测CD324的试剂为CD324荧光抗体；所述用于检测CD49d的试剂为CD49d荧光抗体。
[0009]优选地，所述用于检测CD324的试剂为FITCanti
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human CD324；所述用于检测CD49d的试剂为FITCanti
‑
human CD49d。
[0010]优选地，所述试剂盒还包括用于检测细胞生存状态的试剂。
[0011]优选地，所述用于检测细胞生存状态的试剂为7
‑
AAD。
[0012]本专利技术还提出了一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的方法，其采用下述技术方案：一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的方法，采用如上所述的试剂盒进行鉴定。
[0013]优选地，包括下述步骤：采用流式细胞仪对待鉴定细胞中活细胞的CD324和CD49d
的表达水平进行检测。
[0014]优选地，所述待鉴定细胞为传代细胞。
[0015]优选地，所述待鉴定细胞为P5代细胞。
[0016]有益效果：
[0017]专利技术人通过研究发现，CD49d的表达与hAMSCs的纯度呈正相关，CD324的表达与hAECs的纯度呈正相关，进一步确定了可以用于体外分离培养的hAMSCs是否有hAECs污染的细胞表面标志物CD324和CD49d，试验验证通过检测CD324和CD49d的相对表达水平可以鉴定体外分离培养的hAMSCs是否有hAECs污染。本专利技术的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒可以准确鉴定体外分离培养后hAMSCs的纯度，这对羊膜体外分离培养hAMSCs具有重要意义。
[0018]本专利技术的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的方法简单易行、成本低，通过开发和研制体外分离培养的hAMSCs是否有hAECs污染的鉴定产品(试剂盒)，可以方便快速、准确、大批量地鉴定体外分离培养的hAMSCs是否有hAECs污染，对临床治疗等应用具有重要意义，填补了现有技术中相关内容的空白。
附图说明
[0019]构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。其中：
[0020]图1为体外分离培养的P5代hAMSCs的细胞形态显微镜图；
[0021]图2为体外分离培养的P5代hAECs的细胞形态显微镜图；
[0022]图3为体外分离培养的P5代hAMSCs和hAECs的细胞形态显微镜图(hAECs的占比5％)；
[0023]图4为体外分离培养的P5代hAMSCs和hAECs的细胞形态显微镜图(hAECs的占比10％)；
[0024]图5为体外分离培养的P5代hAMSCs和hAECs的细胞形态显微镜图(hAECs的占比20％)；
[0025]图6为体外分离培养的P5代hAMSCs和hAECs的细胞形态显微镜图(hAECs的占比50％)。
具体实施方式
[0026]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]下面将结合实施例来详细说明本专利技术。需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0028]本专利技术针对目前体外分离培养hAMSCs过程中存在的体外分离培养得到的hAMSCs可能会被hAECs掺杂、不易实现hAMSCs和hAECs的区分的问题，提供一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒，试剂盒包括用于检测CD324和CD49d的试剂。
[0029]其中，CD324也称为E
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cadherin、cadherin
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1和UVO，属于钙粘蛋白超家族的成员，
是一种钙依赖性跨膜细胞粘附糖蛋白，由4个胞外钙粘素重复序列组成，胞内部分高度保守。CD324广泛表达于结肠、子宫、肝脏、角质细胞、大脑、心脏、肌肉、肾脏和胰腺的上皮细胞以及红系细胞中，其完整功能对于上皮组织极性和结构完整性的建立和维持至关重要。CD324在连接细胞时优先以亲同性方式与自身相互作用，因此可能有助于异质细胞类型的分类。
[0030]CD49d是一种膜糖蛋白，整合素α4链。CD49d在T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、胸腺细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、NK细胞、树突状细胞和超过95％的人羊膜间充质干细胞上广泛表达，但在正常红细胞、血小板或中性粒细胞上不表达。CD49d参与单核细胞向炎症内皮部位的转运，并在细胞间相互作用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测CD324和CD49d的试剂。2.根据权利要求1所述的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒，其特征在于，所述用于检测CD324的试剂为CD324荧光抗体；所述用于检测CD49d的试剂为CD49d荧光抗体。3.根据权利要求2所述的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒，其特征在于，所述用于检测CD324的试剂为FITCanti
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humanCD324；所述用于检测CD49d的试剂为FITCanti
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humanCD49d。4.根据权利要求1所述的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于检测细胞生存状态...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄莹之，孟菲，陈应炉，梅寒，
申请(专利权)人：宁波希诺赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：