一种扩增间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种扩增间充质干细胞的方法。所述方法包括：将间充质干细胞与含有聚N异丙基丙烯酰胺的共聚物纳米纤维支架共培养得到间充质干细胞。本发明专利技术通过将干细胞与含有聚N异丙基丙烯酰胺的共聚物纳米纤维支架共培养，能够高效、快捷、大量地获得间充质干细胞，不仅能大规模迅速扩增所需的细胞数量，同时也避免了胰酶在传统消化过程中对细胞的损伤作用，适用间充质干细胞或其他贴壁细胞的培养，极具推广价值。极具推广价值。极具推广价值。

【技术实现步骤摘要】
一种扩增间充质干细胞的方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种扩增间充质干细胞的方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞来源于中胚层，具有自我更新和多向分化成脂肪细胞，软骨细胞，成骨细胞等细胞的潜能。间充质干细胞可来源于骨髓、脐带、脂肪、胎盘、皮肤、毛囊、羊水、外周血、脐带血、尿和月经血等。因为间充质干细胞具有归巢能力、多能性潜力、分泌抗炎因子能力、免疫调节作用，使间充质干细胞在临床应用和科学研究方面都表现出诱人的前景。然而，由于细胞数量不足，一直制约着间充质干细胞的应用与发展。
[0003]间充质干细胞一般采用培养皿或培养瓶等传统方法培养，虽然该技术已经成熟，但是存在获取细胞数量较少，培养成本高，重复传代培养易导致干细胞衰老和丧失多能性的弱点。例如CN102876630A公开了一种高效分离和扩增人脐带血间充质干细胞的方法，所述方法包括：将单核细胞成分接种于包被蛋白基质成分的培养皿，细胞接种于上述包被的细胞培养板后，使用脐带血间充质干细胞培养基培养，除去未贴壁细胞并更换培养基，继续使用脐带血间充质干细胞培养基培养，直至细胞为80
‑
95％融合；细胞用胰酶进行消化，接种于一般培养板，实现间充质干细胞的扩增，但是这种方法在传统细胞传代过程中使用胰酶进行细胞消化，对细胞损伤很大，最终获取的细胞数量较少。
[0004]例如CN110484500A公开了一种分离和扩增人尿源间充质干细胞的方法，所述方法包括将尿液进行离心，得到细胞沉淀；向所述细胞沉淀中加入低血清分离培养基或无血清分离培养基，吹打混匀后进行培养，得到原代细胞，记作第0天；第12
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13天，对所述原代细胞进行消化，使用所述低血清分离培养基或无血清分离培养基对细胞进行重悬、接种，记为P1代，即完成人尿源间充质干细胞的分离；使用低血清扩增培养基或无血清扩增培养基对P1代细胞进行传代培养，即完成人尿源间充质干细胞的扩增。此方法在传代过程中仍需进行细胞消化，对细胞损伤大，最终获取的细胞数量较少，安全性低，成本较高。
[0005]因此，亟需开发一种高效，安全，适用于间充质干细胞大规模扩增的方法，以便获取足够数量的间充质干细胞。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种扩增间充质干细胞的方法，解决了采用传统方法扩增间充质干细胞存在的获取细胞数量较少，培养成本高，重复传代培养易导致间充质干细胞衰老和丧失多能性，胰酶进行细胞消化，对细胞损伤大等问题，能够高效、快捷、大量地获得间充质干细胞，不仅能大规模迅速扩增所需的细胞数量，同时也避免了胰酶在传统消化过程中对细胞的损伤作用。
[0007]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种扩增间充质干细胞的方法，所述方法包括：
[0009]将间充质干细胞与含有聚N异丙基丙烯酰胺的共聚物纳米纤维支架共培养得到间
充质干细胞。
[0010]本专利技术通过将间充质干细胞与含有聚N异丙基丙烯酰胺的共聚物纳米纤维支架共培养，能够高效、快捷、大量地获得间充质干细胞，不仅能大规模迅速扩增所需的细胞数量，同时也避免了胰酶在传统消化过程中对细胞的损伤作用，适用间充质干细胞或其他贴壁细胞的培养，极具推广价值。
[0011]所述聚N异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)为温度敏感型水凝胶，其能够感知外面环境微小变化以及具有良好的生物相容性，当环境温度高于最低临界温度(LCST)时，其体积会突然剧烈收缩，此时其表面是疏水的，细胞可以黏附生长，当细胞长到一定密度后，降低温度到LCST下，使水凝胶表面亲水，这样细胞就会脱离水凝胶，而不用传统的酶消化，很好的保持了细胞表面的结构与功能，避免了酶消化细胞的操作繁琐，大大减少了工作量。
[0012]聚N异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)的大分子链上同时具有亲水性的酰氨基和疏水性的异丙基，水溶液具有最低临界温度32℃，能够在37℃交联成水凝胶，在常温下则为线型的水溶液。利用PNIPAAm在LCST附近发生可逆相转变的特性，可以将PNIPAAm设计成分子开关，结合干细胞培养，用聚N
‑
异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)的温度敏感性，使细胞在临界温度之上时贴附在材料表面生长，温度在临界温度以下时细胞脱附，改变了传统的酶解脱附细胞的方法。且细胞在水凝胶三维空间里，细胞生长状态良好且状态培养效率升高。
[0013]优选地，所述共聚物纳米纤维支架中共聚物包括聚乳酸、聚乙交酯、聚苯乙烯或聚乳酸
‑
羟基乙酸中任意一种或至少两种的组合，所述共聚物分子量为50000
‑
500000。
[0014]上述50000
‑
500000中的具体点值可以选择50000、50001、50002、50003、60000、70000、80000、90000、100000、200000、300000、400000、490000、499996、499997、499998、499999、500000等。
[0015]优选地，所述共聚物纳米纤维支架的共聚物为聚乳酸
‑
羟基乙酸。
[0016]优选地，所述聚乳酸
‑
羟基乙酸中乳酸和羟基乙酸的质量比为(2
‑
8):1。
[0017]上述(2
‑
8)中的具体点值可以选择2、3、4、5、6、7、8等。
[0018]优选地，所述共聚物纳米纤维支架中聚N异丙基丙烯酰胺和共聚物的质量比为(15
‑
35):1。
[0019]上述(15
‑
35)中的具体点值可以选择15、16、17、18、20、25、29、30、31、32、33、34、35等。
[0020]优选地，所述聚N异丙基丙烯酰胺的数均分子量为30000
‑
300000。
[0021]上述30000
‑
300000中的具体点值可以选择30000、30001、30002、30003、60000、70000、80000、90000、100000、200000、220000、240000、260000、289996、299997、299998、299999、300000等。
[0022]优选地，所述共聚物为羧基封端。
[0023]优选地，所述共聚物纳米纤维支架的构建方法包括：静电纺丝。
[0024]优选地，所述静电纺丝的电压为5
‑
25KV，推液速度为3
‑
30mL/h，针头
‑
收集器距离为5
‑
20cm，收集器旋转速度为50
‑
2000rpm/min，纤维收集时间为9
‑
11h。
[0025]上述5
‑
25中的具体点值可以选择5、6、7、8、10、14、16、18、19、20、21、2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种扩增间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：将间充质干细胞与含有聚N异丙基丙烯酰胺的共聚物纳米纤维支架共培养以扩增间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述共聚物纳米纤维支架中共聚物包括聚乳酸、聚乙交酯、聚苯乙烯或聚乳酸
‑
羟基乙酸中任意一种或至少两种的组合，所述共聚物的数均分子量为50000
‑
500000；优选地，所述共聚物纳米纤维支架的共聚物为聚乳酸
‑
羟基乙酸；优选地，所述聚乳酸
‑
羟基乙酸中乳酸和羟基乙酸的质量比为(2
‑
8):1。优选地，所述共聚物纳米纤维支架中聚N异丙基丙烯酰胺和共聚物的质量比为(15
‑
35):1；优选地，所述聚N异丙基丙烯酰胺的数均分子量为30000
‑
300000。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述共聚物为羧基封端。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的方法，其特征在于，所述共聚物纳米纤维支架的构建方法包括：静电纺丝。5.根据权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志远，黄荣奇，
申请(专利权)人：广州启源生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：