一种金果榄多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种金果榄多糖及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。所述金果榄多糖是由α

【技术实现步骤摘要】
一种金果榄多糖及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种金果榄多糖及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]金果榄，为防己科植物青牛胆(Tinospora sagittata(Oliv.)Gagnep.)或金果榄(Tinospora Capillipes Gagnep.)的干燥块根，具有清热解毒、利咽止痛之功效，常用于治疗咽喉肿痛、痈疽疔毒、脘腹疼痛等，为多版《中国药典》所收录。临床上用其治疗慢性咽炎、输液性静脉炎、外感发热等，民间多用其来治疗急慢性扁桃体炎、急性咽喉炎、口腔炎等，是复方党参片、泻停封胶囊、羚羊清肺颗粒等常用中成药的主要原料之一。
[0003]金果榄主要分布在我国秦岭至南岭山脉，以及越南北部的热带和亚热带森林等地，分布范围广，各地植株形态存在较大差异。金果榄中的主要成分有萜类、生物碱、植物甾醇、木脂素等，其中二萜类和生物碱类是研究最广泛的化学成分。到目前为止，从中已分离得到33种二萜类化合物、26种生物碱、9种甾体、其他含氮化合物以及脂肪酸等物质。
[0004]金果榄作为一种清热解毒的中药，在民间得到了广泛的应用，具有非常高的药用价值和医疗保健功效。然而，当前对于金果榄的研究主要集中在二萜类和生物碱类化合物，而对其他如多糖等成分研究甚少，关于金果榄多糖的研究仅仅停留在提取工艺优化和体外抗氧化活性等方面，未见有关其结构和抗肿瘤免疫活性相关研究报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种金果榄多糖及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术从金果榄中提取得到了一种葡聚糖，该葡聚糖具有治疗肝癌的作用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种金果榄多糖，所述金果榄多糖是由α
‑
D
‑
葡萄糖组成的葡聚糖，具有1
→
连接的葡萄糖残基、1
→
4连接的葡萄糖残基和1
→
4，6连接葡萄糖残基的结构片段，其数量比为18∶72.3∶9.6；所述金果榄多糖的分子量为14.248kD。
[0008]本专利技术还提供一种上述的金果榄多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0009](1)利用水提醇沉法对金果榄进行提取后，再经过除蛋白操作，得到粗多糖；
[0010](2)所述粗多糖再经过阴离子交换柱层析纯化和凝胶柱层析纯化，得到所述金果榄多糖；
[0011]在步骤(1)中，所述水提醇沉法中的水提操作采用超声辅助提取。
[0012]进一步地，在步骤(1)中，所述水提操作的时间为30min，所述超声的频率为40KHz。
[0013]进一步地，在步骤(1)中，所述水提醇沉法使用乙醇溶液进行醇沉处理，所述乙醇溶液的体积分数为85％。
[0014]进一步地，在步骤(2)中，所述阴离子交换柱层析纯化采用DEAE
‑
52纤维素阴离子交换层析柱。
[0015]进一步地，在步骤(2)中，凝胶柱层析纯化采用葡聚糖凝胶G
‑
100。
[0016]本专利技术还提供上述的金果榄多糖在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0017]进一步地，所述药物具有以下(1)
‑
(4)中至少一项所述的作用：
[0018](1)延长肝癌患者的生存期；
[0019](2)延缓肝癌患者的体重下降；
[0020](3)抑制肝癌患者的肝脏肿瘤生长；
[0021](4)改善肝癌患者的肝脏功能损伤。
[0022]本专利技术还提供一种治疗肝癌的药物，活性成分包括上述的金果榄多糖。
[0023]进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
[0024]本专利技术公开了以下技术效果：
[0025]本专利技术采用超声辅助提取、水提醇沉的方法提取金果榄粗多糖，经Sevag法去除蛋白后，通过DEAE
‑
52纤维素树脂以及葡聚糖凝胶柱对粗多糖进行纯化，得到均一的α
‑
葡聚糖TSP
‑
W，采用现代分析技术对其结构进解析，并以Akt/N
‑
Ros基因诱导的原发性肝癌小鼠为模型，对金果榄多糖的抗肿瘤免疫活性进行评价，结果发现，HPGPC显示，TSP
‑
W分子量为14.248kD；HPLC柱前衍生化分析其单糖组成，TSP
‑
W中葡萄糖含量占比达99.99％；FT
‑
IR光谱分析表明TSP
‑
W中α
‑
D
‑
葡萄糖的存在，是一种新型葡聚糖；SEM观察其微观结构主要为光滑的碎屑和棒状；采用甲基化分析鉴定出1
→
)连接葡萄糖残基、(1
→
4)连接葡萄糖残基、(1
→
4，6)连接的葡萄糖残基，比例为18∶72.3∶9.6。动物实验结果表明，TSP
‑
W可减轻Akt/N
‑
Ros基因诱导的原发性肝癌小鼠肝脏损伤，抑制肿瘤生长，延长患瘤小鼠的生存期。
[0026]本专利技术为进一步开发抗肝肿瘤免疫制剂提供借鉴，同时也为金果榄资源开发和抗肝癌治疗提供新思路。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0028]图1为金果榄粗多糖粉末；
[0029]图2为TSP组分DEAE
‑
52阴离子层析洗脱图；
[0030]图3为TSP
‑
1组分葡聚糖凝胶层析洗脱图(Sephadex G
‑
100)；
[0031]图4为TSP
‑
2组分葡聚糖凝胶层析(Sephadex G
‑
100)；
[0032]图5为TSP
‑
W化学成分含量测定中硫酸苯酚法测葡萄糖含量的标准曲线(A)和BCA法测蛋白质含量的标准曲线(B)；
[0033]图6为TSP
‑
W紫外光谱扫描曲线；
[0034]图7为TSP
‑
W的高效凝胶渗透色谱图(A)和右旋糖酐标准品LogMp
‑
T校正曲线(B)；
[0035]图8为TSP
‑
W的单糖组成分析；其中A为混合单糖标准品的PMP衍生化HPLC色谱图，Man：甘露糖；GlcN：盐酸氨基葡萄糖；GlcA：葡萄糖醛酸；GalA：半乳糖醛酸；GlcNAc：N
‑
乙酰氨基葡萄糖；Glc：葡萄糖；Gal：半乳糖；Ara：阿拉伯糖；Fuc：岩藻糖；B为TSP
‑
W样品PMP衍生化HP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金果榄多糖，其特征在于，所述金果榄多糖是由α
‑
D
‑
葡萄糖组成的葡聚糖，具有1
→
连接的葡萄糖残基、1
→
4连接的葡萄糖残基和1
→
4，6连接的葡萄糖残基的结构片段，其数量比为18∶72.3∶9.6；所述金果榄多糖的分子量为14.248kD。2.一种如权利要求1所述的金果榄多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用水提醇沉法对金果榄进行提取后，再经过除蛋白操作，得到粗多糖；(2)所述粗多糖再经过阴离子交换柱层析纯化和凝胶柱层析纯化，得到所述金果榄多糖；在步骤(1)中，所述水提醇沉法中的水提操作采用超声辅助提取。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述水提操作的时间为30min，所述超声的频率为40KHz。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝新才，李平飞，胡娇，赵永恒，韩明清，程银水，宋梦楠，余宗兴，
申请(专利权)人：湖北金水源农业开发有限公司，
类型：发明
国别省市：