一种检测母牛自然周期成熟卵泡、诱导排卵配种的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测母牛自然周期成熟卵泡、诱导排卵配种的方法，包括：在母牛配种前5日、48小时、36小时、12小时采集牛血、分离出血清；将牛的促黄体生成素LH及卵泡刺激素FSH检测试纸插入血清后，试纸质控线C未显色、检测线T1、T2显色，检测无效；质控线C显色，检测线T1、T2未显色，要隔日检测；质控线C及检测线T1、T2都显色，表时母牛有卵泡，适时肌注促性腺激素释放激素或孕马血清后，配种，有效避免母牛空怀期，缩短产犊间隔，提高繁殖率，降低养殖成本，优选高繁殖力的母牛群体，高质量提升母牛产犊效率，纯化后代母牛基因，为增加养殖效益提供可靠的技术支持。提供可靠的技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种检测母牛自然周期成熟卵泡、诱导排卵配种的方法


[0001]本专利技术涉及一种检测母牛自然周期成熟卵泡、诱导排卵配种的方法，属于动物繁育


技术介绍

[0002]现有母牛的繁殖方法有：自然排卵交配、药物诱发排卵交配、同期发情定时输精、胚胎移植等。在规模化生产过程中，通常采用单一的同期发情定时输精的方案，用于对同期发情的多头母牛进行输精配种，这种方式因忽略了牛群中不同牛的生理状态，不完全相同的个体差异性，导致母牛同期发情定时输精后受胎率忽高（50%
‑‑
60%）忽低（20%
‑‑
30%），进而存在母牛空怀数量增多、母牛群体产犊间隔延长、繁殖率低下、养殖成本高、养殖场亏损严重等问题。因此有必要对现有技术加以改进。

技术实现思路

[0003]本专利技术旨在提供一种检测母牛自然周期成熟卵泡、诱导排卵配种的方法，避免母牛空怀期，缩短母牛产犊间隔，提高母牛群体繁殖率，降低养殖的成本，提升养殖的效益。
[0004]本专利技术通过下列技术方案完成：一种检测母牛自然周期成熟卵泡、诱导排卵配种的方法，其特征在于包括下列步骤：1）在母牛配种前5日、48小时、36小时或12小时，采集1
‑‑
10 ml母牛血，于阴凉处静置1
‑
2小时，分离出血清；2）将牛的促黄体生成素LH及卵泡刺激素FSH检测试纸插入步骤1）的血清中5
‑‑
10秒，取出，于15
‑
18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T1、T2是否显色：3）显色结果如下：试纸质控线C未显色、检测线T1或/和T2显色，表明检测结果无效，需要重新检测；试纸质控线C显色，检测线T1或/和T2未显色，表明母牛的LH及FSH水平低下，需要隔日进行检测；试纸质控线C及检测线T1与T2都显色，用该显色与LH及FSH比色卡进行下列对比；31）LH≥10
‑
100 mIU/ml, FSH≥30
‑
65mIU/ml，表明母牛卵泡≥20毫米，为成熟卵泡，肌注促性腺激素释放激素3毫升，12小时后配种；32）LH≥5
‑
10mIU/ml,FSH≥65
‑
100mIU/ml，表明母牛卵泡≥7
‑‑
15毫米，为优势卵泡，肌注孕马血清500
‑
700IU, 36小时后配种；33）LH<5mIU/ml, FSH<30mIU/ml，表明母牛在黄体期，于5日后，重复步骤1）
‑
3），当试纸质控线C及检测线T1与T2都显色，用该显色与LH及FSH比色卡进行对比后，按31）或者32）处理；34）步骤33）对比后依旧LH<5mIU/ml, FSH<30mIU/ml，表明母牛还是处于黄体期，肌注前列腺素F2a 1.5毫升，48小时后，再次重复步骤1）
‑
3），当试纸质控线C及检测线T1与T2都显色，用该显色与LH及FSH比色卡进行对比后，按31）或者32）处理；
35）步骤34）对比后依旧LH<5mIU/ml, FSH<30mIU/ml，表明母牛卵巢静止不育，该母牛不作为种牛，另行处理。
[0005]所述步骤2）牛的促黄体生成素LH及卵泡刺激素FSH检测试纸，经过下列方法制备：21）按下列制备各组分：金溶液：将质量浓度为2%的氯金酸溶液20ml、质量浓度为1%的柠檬酸钠加入纯化水至100ml，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入30ul 碳酸钾溶液，混合均匀，得330ul封闭液；样本垫处理液：将0.605g三羧甲氨基甲烷、1.5g氯化钠完全溶解在100ml纯化水中，得样本垫处理液；胶体金结合物稀释液：将0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化钠，0.5g牛血清白蛋白，3ml羊血清，0.15ml吐温20，与100ml纯化水混合均匀，得胶体金结合物稀释液；LH包被液：将100
‑
200mg牛的黄体生成素单克隆α亚级抗体LHmAbCoating、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01M PBS缓冲液100ml中，混合均匀，得LH包被液；FSH包被液：将100
‑
200mg牛的FSH单克隆α亚级抗体FSHmAbCoating、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01M PBS缓冲液100ml中，混合均匀，得FSH包被液；IgG包被液：将羊抗鼠IgG抗体100mg、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01M PBS缓冲液100ml中，混合均匀，得IgG包被液；22）在底板上划膜22A）将NC膜贴在PVC板上表面的中部，得底板；22B）用XYZ3010喷金划膜仪，并按0.8μl/cm的量，以500mm/s的速度，将IgG包被液均匀地划在步骤22A）底板上的NC膜的上端作为质控线C，将LH包被液均匀地划在NC膜的中部作为检测线T1，质控线C与检测线T1相距3mm
±
1mm；将FSH包被液均匀地划在NC膜的下端作为检测线T2，检测线T1与检测线T2相距3mm
±
1mm；质控线C距离NC膜上端8mm
±
1mm，检测线T2距离NC膜下端7mm
±
1mm，然后放入干燥箱内，于温度为25℃
±
2℃、湿度≤30％下干燥18h
±
2h，得划膜板；23）金垫制备23A）在100ml步骤21）的金溶液中加入1.2ml碳酸钾溶液、1.5
‑
2mgLHmb2与FSHmb4搅拌40min，滴加330ul封闭液，搅拌10min，于4℃、12000r/min的条件下离心40min，直至上清液变为水，弃上清液，取余液5.3 ml，加入40ml 胶体金结合物稀释液混匀，形成LHmb2及FSHmb4复合胶体金结合物稀释溶液；23B）将40ml LHmb2及FSHmb4复合胶体金结合物稀释液均匀铺在1080cm2玻璃纤维素膜RB65上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃
±
2℃、湿度≤30％下干燥18h
±
2h，得金垫；24）样本垫制备24A）按30ml/张的量，将步骤21）的样本垫处理液均匀铺在玻璃纤维素膜SB06上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃
±
2℃、湿度≤30％下干燥18h
±
2h，得样本垫；25）贴板25A）将步骤23）的金垫贴于步骤22B）划膜板的NC膜下端，并使1
‑
2mm的金垫后端搭
在NC膜上；25B）将步骤24）的样本垫贴于步骤25A）的金垫前端上面，并使样本垫后端完全搭在金垫上，样本垫前端贴于PVC板前端；25C）将吸水垫贴于25B）的PVC板后端，并使1
‑
2mm的吸水垫前端搭在NC膜后端；26）将步骤25C）贴板切本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测母牛自然周期成熟卵泡、诱导排卵配种的方法，其特征在于包括下列步骤：1）在母牛配种前5日、48小时、36小时或12小时，采集1
‑‑
10 ml母牛血，于阴凉处静置1
‑
2小时，分离出血清；2）将牛的促黄体生成素LH及卵泡刺激素FSH检测试纸插入步骤1）的血清中5
‑‑
10秒，取出，于15
‑
18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T1、T2是否显色：3）显色结果如下：试纸质控线C未显色、检测线T1或/和T2显色，表明检测结果无效，需要重新检测；试纸质控线C显色，检测线T1或/和T2未显色，表明母牛的LH及FSH水平低下，需要隔日进行检测；试纸质控线C及检测线T1与T2都显色，用该显色与LH及FSH比色卡进行下列对比；31）LH≥10
‑
100 mIU/ml, FSH≥30
‑
65mIU/ml，表明母牛卵泡≥20毫米，为成熟卵泡，肌注促性腺激素释放激素3毫升，12小时后配种；32）LH≥5
‑
10mIU/ml,FSH≥65
‑
100mIU/ml，表明母牛卵泡≥7
‑‑
15毫米，为优势卵泡，肌注孕马血清500
‑
700IU, 36小时后配种；33）LH<5mIU/ml, FSH<30mIU/ml，表明母牛在黄体期，于5日后，重复步骤1）
‑
3），当试纸质控线C及检测线T1与T2都显色，用该显色与LH及FSH比色卡进行对比后，按31）或者32）处理；34）步骤33）对比后依旧LH<5mIU/ml, FSH<30mIU/ml，表明母牛还是处于黄体期，肌注前列腺素F2a 1.5毫升，48小时后，再次重复步骤1）
‑
3），当试纸质控线C及检测线T1与T2都显色，用该显色与LH及FSH比色卡进行对比后，按31）或者32）处理；35）步骤34）对比后依旧LH<5mIU/ml, FSH<30mIU/ml，表明母牛卵巢静止不育，该母牛不作为种牛，另行处理。2.根据权利要求1所述的检测母牛自然周期成熟卵泡、诱导排卵配种的方法，其特征在于所述步骤2）牛的促黄体生成素LH及卵泡刺激素FSH检测试纸，经过下列方法制备：21）按下列制备各组分：金溶液：将质量浓度为2%的氯金酸溶液20ml、质量浓度为1%的柠檬酸钠加入纯化水至100ml，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入30ul 碳酸钾溶液，混合均匀，得330ul封闭液；样本垫处理液：将0.605g三羧甲氨基甲烷、1.5g氯化钠完全溶解在100ml纯化水中，得样本垫处理液；胶体金结合物稀释液：将0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化钠，0.5g牛血清白蛋白，3ml羊血清，0.15ml吐温20，与100ml纯化水混合均匀，得胶体金结合物稀释液；L...

【专利技术属性】
技术研发人员：金义达，马海鹏，
申请(专利权)人：昆明天沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：