一种检测降钙素原的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测降钙素原的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含缓冲液1、增敏剂、EDTA、盐、防腐剂1，所述第二试剂包含缓冲体系1、包被抗人降钙素原单克隆抗体Fab段的胶乳微球，涉及体外检测试剂医疗检测领域。本发明专利技术通过其第一试剂和第二试剂配套以3:1的比例使用，适用于全自动生化分析仪及特定蛋白仪，检测样本时，以加入第二试剂后的吸光度为A1，以结束反应时的吸光度为A2，取A2

【技术实现步骤摘要】
一种检测降钙素原的试剂盒


[0001]本专利技术涉及体外检测试剂医疗检测领域，具体为一种检测降钙素原的试剂盒。

技术介绍

[0002]降钙素原(procalcitionin)是一种由116个氨基酸组成、分子量为13kDa的糖蛋白，是降钙素(CT)的前体物，当严重细菌、真菌、寄生虫感染或脓毒症时，PCT在血浆中的水平快速升高，3～6h即可测得，6～12h达高峰，2～3天恢复正常。自身免疫、过敏和病毒感染时PCT不会升高。
[0003]PCT作为一种用于细菌感染早期诊断、鉴别诊断、治疗监控及预后判断的具有创新意义的诊断指标，PCT提高了临床诊断的准确性，广泛用于ICU病房、血液科、肿瘤科、儿科、早产儿及新生儿监护室、外科、内科、器官移植科、急诊科、介入诊断和治疗实验室等，为重症监护、放化疗、服用免疫抑制剂或器官移植等患者合并发热时提供了及其重要的诊断、进一步的检查和治疗的临床依据。
[0004]目前检测降钙素原的方法有很多，常用的检测方法是免疫学检测，主要有化学发光法、免疫层析法及免疫比浊法等。其都是基于抗原和抗体特异性结合的基本原理设计的检测方法，利用IgG抗体制备免疫检测试剂的一个限制是易于受到测试样品类风湿因子引起的干扰。类风湿因子(RF)是抗人IgG分子Fc片段抗原决定族的特异性抗体。大多动物来源的IgG类抗体Fc段与人IgG的Fc段具有较高的同源性，都能被RF识别并结合，所以在待测物质为阴性、RF阳性的检测样本中，免疫检测试剂有可能被RF捕获产生信号，从而导致假阳性结果。
[0005]专利号为CN106018816A的专利中为了去除掉临床样本中RF因子的干扰，其在检测试剂R1中预先加入抗人类风湿因子抗体，当开始检测临床样本时，试剂R1中的抗人类风湿因子抗体和样本中的RF因子发生免疫结合反应使其无法与包被抗人降钙素原抗体的试剂R2反应，以此来减弱样本中RF因子的影响，但该专利技术专利使用的方法中试剂R1中加入抗人类风湿因子抗体不仅大幅增加了试剂的成本，而且试剂R1中抗人类风湿因子抗体的加入量不足够多时又不能完全去除RF高值样本所带来的干扰。
[0006]专利CN107942065B及CN 111089965A均使用化学发光法检测样本中的抗原物质，其为了去除临床样本中RF因子的干扰，都将传统检测试剂制备方法中的一株抗人蛋白抗体替换为仅有Fab片段的抗人蛋白抗体，其专利技术有取巧之处，但并未对传统检测方法做出大的改变，也没有降低化学发光方法检测成本较高和仪器应用平台壁垒高柱的弊端。专利CN 105137089B使用的是检测成本低，适用平台光的免疫比浊方法，如前所述，其为了去除掉临床样本中RF因子的干扰，同样是将传统检测试剂制备方法中的一株抗人蛋白抗体替换为仅有Fab片段的抗人蛋白抗体，该专利使用的是化学偶联方法；而为了有效的发挥抗体特异性结合抗原的活性，化学偶联方法的原理及目的是将抗体的FC端经酰胺键偶联于胶乳微球的化学基团，该专利为了去除RF因子的干扰而直接使用仅有Fab片段的抗人蛋白抗体化学偶联于胶乳微球，其不仅会降低抗人蛋白抗体偶联于胶乳微球的成功率和效率，而且即使是
已经偶联于胶乳微球的抗体Fab片段也会因为空间位阻而无法全部发挥其生物活性。
[0007]针对现有胶乳比浊技术抗RF因子干扰能力不足及不适合偶联抗体Fab片段的弊端，本专利技术提供一种抗人降钙素原抗体Fab段的制备方法及使用所述抗人降钙素原抗体Fab段物理偶联于胶乳微球的制备方法，及使用该方法的胶乳比浊试剂盒。
[0008]胃蛋白酶能酶切IgG抗体连接两重链的二硫键靠C端处，使IgG抗体裂解成F(ab
’
)2片段和Fc片段。F(ab
’
)2片段由两个Fab
’
片段通过二硫键连接，保留了抗体的结合点。再经过protein L柱亲和纯化获得的F(ab
’
)2片段与IgG相比，F(ab
’
)2片段去掉了Fc段易被类风湿因子识别的位点，因此用F(ab
’
)2片段制备的免疫检测试剂就不会再受到类风湿因子的干扰，从而提高检测的准确度与特异性。Fab片段含部分铰链区，铰链区富含疏水性的脯氨酸，可以以较理想的姿态物理吸附于胶乳微球表面。
[0009]采用本专利技术提供的技术方法的试剂盒，可以有效去除临床样本中RF因子的干扰，而且对试剂盒制备方法做出创新改变使其操作更简单，批间差更低且生产周期更短，可以在较低成本的前提下以更简便的工艺实现大批量生产。

技术实现思路

[0010]基于此，本专利技术的目的是提供一种检测降钙素原的试剂盒，以解决上述
技术介绍
中提出的技术问题。
[0011]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种检测降钙素原的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂；
[0012]所述第一试剂包含缓冲液1、增敏剂、EDTA、盐、防腐剂1；
[0013]所述第二试剂包含缓冲体系1、包被抗人降钙素原单克隆抗体Fab段的胶乳微球。
[0014]其所述缓冲液1为甘氨酸缓冲液、Tris
‑
HcL缓冲液、Tris
‑
Gly缓冲液、磷酸盐缓冲液、N
‑2‑
羟乙基哌嗪
‑
N'
‑2‑
乙磺酸缓冲液HEPES、3
‑
吗啉
‑2‑
羟基丙磺酸缓冲液MOPSO、吗啉乙磺酸缓冲液MES、3
‑
吗啉丙磺酸缓冲液MOPS中的一种或多种；
[0015]优选的，所述缓冲液1为N
‑2‑
羟乙基哌嗪
‑
N'
‑2‑
乙磺酸缓冲液HEPES或3
‑
吗啉
‑2‑
羟基丙磺酸缓冲液MOPSO，其浓度为50
‑
200mM，pH为7.0
‑
8.0；
[0016]所述增敏剂为聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000中的一种或多种；
[0017]优选的，所述增敏剂优选为聚乙二醇6000或聚乙二醇8000，其浓度按w/v计为0.2％
‑
2％；
[0018]所述EDTA，其浓度按w/v计为0.1％
‑
1％；
[0019]所述缓冲体系1包含缓冲液2、牛血清白蛋白、蛋白保护剂、氨基酸、表面活性剂2、盐、防腐剂Ⅱ；
[0020]所述表面活性剂1或表面活性剂2为Triton X45、Triton X100、Brij 35、吐温20、司盘60中的一种或多种；
[0021]优选的，所述表面活性剂1或表面活性剂2为Triton X100，其浓度按w/v计为0.05％
‑
0.3％；
[0022]所述盐为NaCl，其浓度按v/v计为0.8％
‑
8％；
[0023]所述防腐剂1或防腐剂2为Proclin 300、Proclin 950、叠氮钠、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测降钙素原的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，其特征在于，第一试剂包含缓冲液1、增敏剂、EDTA、盐、表面活性剂1和防腐剂1；第二试剂包含缓冲体系1、包被抗人降钙素原单克隆抗体Fab段的胶乳微球。2.根据权利要求1所述的一种检测降钙素原的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液1为甘氨酸缓冲液、Tris
‑
HcL缓冲液、Tris
‑
Gly缓冲液、磷酸盐缓冲液、N
‑2‑
羟乙基哌嗪
‑
N'
‑2‑
乙磺酸缓冲液HEPES、3
‑
吗啉
‑2‑
羟基丙磺酸缓冲液MOPSO、吗啉乙磺酸缓冲液MES、3
‑
吗啉丙磺酸缓冲液MOPS中的一种或多种；所述增敏剂为聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000中的一种或多种；所述缓冲体系1包含缓冲液2、血清白蛋白、蛋白保护剂、氨基酸、表面活性剂2、盐、防腐剂2；所述EDTA，其浓度按w/v计为0.1％
‑
1％；所述盐为NaCl，其浓度按w/v计为0.8％
‑
8％；所述表面活性剂1或表面活性剂2为Triton X45、Triton X100、Brij 35、吐温20、司盘60中的一种或多种；所述防腐剂1或防腐剂2为Proclin 300、Proclin 950、叠氮钠、硫酸卡那霉素中的一种或多种；所述抗人降钙素原单克隆抗体Fab段为抗人降钙素原单克隆抗体经胃蛋白酶酶切后纯化得到的Fab段，其用量与胶乳微球的质量比为0.02
‑
0.09倍；所述胶乳微球为没有基团化的聚苯乙烯胶乳微球，其浓度按w/v计为0.12％
‑
0.4％，其粒径选自100
‑
200nm中的一种或多种粒径。3.根据权利要求2所述的一种检测降钙素原的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液1优选为N
‑2‑
羟乙基哌嗪
‑
N'
‑2‑
乙磺酸缓冲液HEPES或3
‑
吗啉
‑2‑
羟基丙磺酸缓冲液MOPSO，其浓度为50
‑
200mM，pH为7.0
‑
8.0；所述增...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴文科，陈闽燕，
申请(专利权)人：杭州博航瑞达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：