一种全病毒纳米疫苗及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种全病毒纳米疫苗及其制备方法和应用，所述全病毒纳米疫苗包括壳聚糖

【技术实现步骤摘要】
一种全病毒纳米疫苗及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及疫苗
，特别涉及一种全病毒纳米疫苗及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]黏膜免疫系统集中了整体免疫系统50％以上的淋巴组织和80％的免疫细胞，且95％以上的动物疫病是通过呼吸道和消化道黏膜感染的，黏膜局部产生分泌型IgA抗体(sIgA)可以有效阻止病原物的感染从而达到预防效果，是一种较为理想免疫途径。刺激黏膜免疫系统引发高效的局部和全身性系统免疫应答反应需大量抗原在黏膜处的有效富集并吸收，同时激活树突细胞从而有效启动下游免疫应答。研究表明小于500nm的抗原粒子可以很好的激发黏膜免疫系统的抗原呈递细胞对抗原的摄取并引起下游的免疫应答反应，故研发适应于黏膜免疫系统具有黏膜粘附性的纳米疫苗(<500nm)对疫病防控有重大价值和现实意义！
[0003]壳聚糖(chitosan)是甲壳素(Chitin)在碱性条件下脱乙酰基后的产物，同时也是一种天然多糖类高分子材料，带正电荷，具有良好的生物安全性和黏膜黏附性，广泛应用于生物、医疗等领域。但由于其在正常生理pH下低水溶性限制了其应用，研究发现壳聚糖经化学修饰后不仅显著提高了水溶性，还是疫苗或药物递送较为理想的载体之一。传统的制备方法所制备出的壳聚糖颗粒大多为壳聚糖微球(>1μm)且粒径不均一，另外壳聚糖微球使用交联剂包被或负载抗原容易降低抗原的活性，同时抗原进入细胞内部后无法有效释放，降低抗原生物利用度和免疫应答效应。因此，需要一种不使用交联剂保证抗原的有效释放，同时还具有生物安全性的壳聚糖衍生物修饰抗原获得纳米疫苗的制备方法，从而实现抗原高效递送。
[0004]猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是典型的通过呼吸道和消化道黏膜感染传播的病毒，目前并无特效治疗药物，疫苗接种是其主要的预防措施。利用黏膜免疫产生的IgA抗体可以有效预防PEDV的感染，如今市面上PED疫苗的种类主要为灭活与弱毒疫苗两大类型，接种途径为肌肉或后海穴注射，产生的PEDV特异性抗体主要存在血清中，无法阻止PEDV经黏膜入侵，因而免疫效果不佳，并且此类疫苗存在接种次数多，操作不便，花费较高等问题。
[0005]因此，急需一种新型的高效黏膜免疫系统适应性的PEDV纳米疫苗，该纳米疫苗粒径均匀，在黏膜局部具有长效黏附性，同时可激活抗原呈递细胞(树突细胞)从而有效启动下游免疫应答，提供免疫保护。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供一种全病毒纳米疫苗及其制备方法和应用。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0008]本专利技术的第一个方面，提供了一种全病毒纳米疫苗，包括壳聚糖
‑
苯二酚修饰的全病毒抗原。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述全病毒纳米疫苗包括壳聚糖
‑
苯二酚通过静电吸附和/或共价键结合修饰在全病毒抗原表面。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述共价键修饰通过迈克尔加成反应结合修饰。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述全病毒纳米疫苗为类球状；所述全病毒纳米疫苗的粒径小于500nm；优选为150nm～300nm。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述全病毒纳米疫苗表面带正电荷。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述壳聚糖
‑
苯二酚与所述全病毒抗原的质量比为(0.05～2):1。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述壳聚糖
‑
苯二酚为壳聚糖
‑
苯二酚共聚物；所述壳聚糖
‑
苯二酚包括低分子量壳聚糖
‑
苯二酚、中分子量壳聚糖
‑
苯二酚、高分子量壳聚糖
‑
苯二酚。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述低分子量壳聚糖
‑
苯二酚为10kDa～50kDa；所述中分子量壳聚糖
‑
苯二酚为50kDa～190kDa；所述高分子量壳聚糖
‑
苯二酚为190kDa～500kDa。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述壳聚糖
‑
苯二酚中，苯二酚的结合率为5％～40％。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述全病毒抗原包括活病毒和/或灭活病毒；所述活病毒包括减毒病毒。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述灭活病毒包括将活病毒灭活。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述全病毒抗原包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒、伪狂犬病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪圆环病毒。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述全病毒抗原包括灭活猪流行性腹泻病毒(PEDV)、减毒猪流行性腹泻病毒、灭活猪传染性胃肠炎病毒、减毒猪传染性胃肠炎病毒、灭活伪狂犬病毒、减毒伪狂犬病毒、灭活猪德尔塔冠状病毒、减毒猪德尔塔冠状病毒、灭活猪圆环病毒、减毒猪圆环病毒。
[0021]本专利技术的第二个方面，提供了一种所述的全病毒纳米疫苗的制备方法，包括以下步骤：向全病毒抗原溶液搅拌加入壳聚糖
‑
苯二酚溶液进行反应，透析后制得所述全病毒纳米疫苗。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述全病毒抗原溶液的浓度为0.1mg/mL～2.0mg/mL。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述壳聚糖
‑
苯二酚溶液的浓度为0.05mg/mL～2.0mg/mL。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述壳聚糖
‑
苯二酚溶液的制备方法包括将壳聚糖与苯二酚类化合物进行催化反应制得。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述苯二酚类化合物包括3,4
‑
二羟基苯基丙酸(HCA)、3,4
‑
二羟基杏仁酸的至少一种。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述全病毒抗原溶液或所述壳聚糖
‑
苯二酚溶液的
溶剂包括水、缓冲液的至少一种。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、弱碱性缓冲液。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中，所述搅拌的转速为300rpm～1500rpm。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述反应的温度为15℃～40℃。
[0030]在本专利技术的一些实施方式中，所述反应的时间为12h～48h。
[0031]在本专利技术的一些实施方式中，所述透析的分子截流量为10kDa～100kDa。
[0032]本专利技术的第三个方面，提供了一种免疫佐剂，包括所述的全病毒纳米疫苗和药学上可接受的辅料。
[0033]在本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种全病毒纳米疫苗，其特征在于：包括壳聚糖
‑
苯二酚修饰的全病毒抗原。2.根据权利要求1所述的全病毒纳米疫苗，其特征在于：所述全病毒纳米疫苗包括壳聚糖
‑
苯二酚通过静电吸附和/或共价键结合修饰在全病毒抗原表面。3.根据权利要求1所述的全病毒纳米疫苗，其特征在于：所述全病毒纳米疫苗为类球状；所述全病毒纳米疫苗的粒径小于500nm。4.根据权利要求1所述的全病毒纳米疫苗，其特征在于：所述壳聚糖
‑
苯二酚与所述全病毒抗原的质量比为(0.05～2):1。5.根据权利要求1所述的全病毒纳米疫苗，其特征在于：所述全病毒抗原包括活病毒和/或灭活病毒。6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：万红平，邓锴，赵兴洪，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：