用于提取核酸的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供一种用于提取核酸的组合物及其用途，所述组合物包含：聚赖氨酸、十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠和水；其中，所述组合物的pH值大于聚赖氨酸的等电点。与现有的核酸提取方法相比，使用本发明专利技术的用于提取核酸的组合物进行核酸提取无需复杂的前处理过程，且可在常温下一步提取到所需核酸，所提核酸样本不需要进一步的处理，可直接用于下游的核酸扩增检测。测。测。

【技术实现步骤摘要】
用于提取核酸的组合物及其用途


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种用于提取核酸的组合物及其用途。

技术介绍

[0002]随着分子生物学技术的迅速发展，核酸已经成为生物学研究中的重要生物标志物，并且已建立起大量基于核酸检测的分析方法。核酸提取是核酸分析中的一个重要环节，是灵敏度、特异性等重要技术参数指标的保证。
[0003]早期的核酸提取方法包括酚抽提法、碱裂解法、CTAB抽提法以及煮沸法等。这些方法均存在明显的缺点，例如使用了苯酚、氯仿等有毒挥发性试剂，核酸的回收率较低，损失量大以及操作步骤复杂等，所以逐渐被新技术所取代。
[0004]目前主流的核酸提取方法为磁珠法。磁珠法具有其特有的优点，如在核酸检测过程中可以实现全自动化应用，提取的核酸纯度高、浓度大等。但是，使用磁珠法提取核酸样本时，为了使样本充分裂解，大都采用高浓度的异硫氰酸胍、十二烷基硫酸钠等试剂。这些高浓度的裂解试剂会使蛋白变性，对聚合酶的活性产生较大的影响，故需对裂解后的样本核酸进行提纯以避免上述影响。磁珠法提取核酸一般要分为四步：裂解、结合、洗涤、洗脱，这使得该方法具有操作过程复杂、用时长等缺点。而且全自动核酸提取设备价格昂贵，而手动操作的磁珠法则需要投入大量的时间，其复杂的提取步骤也容易造成交叉污染，不易于在基层和实验条件差的情况下应用。
[0005]公开号为CN107119039A的专利申请提供了一种组织不研磨直接提取核酸的方法，通过针对不同的样本加入不同的裂解试剂，实现了使用磁珠法快速提取核酸的目的，但该方法需要96通道核酸提取仪配套使用。
[0006]公开号为CN104962553A的专利申请提供了一种“一步法”提取血清或血浆样本中核酸的方法，通过在94℃的条件下加入核酸释放剂裂解10min可得到核酸，但该方法需要借助恒温孵育设备才能实现。
[0007]公开号为CN111808847A的专利申请提供了一种一步法快速提取核酸的释放剂及其制备和使用方法，通过在56℃的条件下向灭活30min的样品中加入核酸释放剂，然后静置30min得到核酸，虽然操作简便且无需特殊仪器，但整个提取过程所需时间较长。
[0008]因此，为了解决现有核酸提取方法的缺点，更快、更准地提取到所需要的核酸，研发一种低成本、操作过程简便的核酸提取方法，对核酸提取乃至分子检测技术的推广普及具有重要意义。

技术实现思路

[0009]针对以上问题，本专利技术的目的是提供一种用于提取核酸的组合物及其用途。使用该组合物可在常温下一步快速提取核酸，且所提取的核酸在后续扩增反应中不会对聚合酶的活性产生不利影响。
[0010]本专利技术的上述目的是通过提供以下技术方案实现的：
[0011]第一方面，本专利技术提供一种用于提取核酸的组合物，其包含：聚赖氨酸、十二烷基硫酸钠(SDS)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA
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2Na)和水；其中，所述组合物的pH值大于聚赖氨酸的等电点。
[0012]本专利技术的专利技术人出乎意料地发现，当本专利技术的用于提取核酸的组合物的pH值大于聚赖氨酸的等电点时，可在常温下对样品进行裂解，释放核酸，然后可在后续的扩增和检测中，利用聚赖氨酸的两性特点通过调节pH对裂解液中的十二烷基硫酸钠进行中和，使得在反应时不会对聚合酶的活性产生影响。具体地，聚赖氨酸作为两性高分子，其等电点为9.04，当用于提取核酸的组合物的pH值大于聚赖氨酸的等电点时，聚赖氨酸带负电荷，在提取过程中起到与SDS类似的裂解作用。而且，带负电的聚赖氨酸与SDS之间还存在静电排斥，不会影响SDS的裂解作用。
[0013]在之后的常规的核酸扩增反应中，所加样品量与反应液的体积比使得反应液的缓冲能力可以保持在扩增过程中的pH值低于聚赖氨酸的等电点，例如，当核酸扩增反应所加样本量与反应液的体积比为1：4时，通过反应液的缓冲能力可以保持在扩增过程中的pH值在8.0～8.8范围。由此，当在扩增反应体系的pH小于聚赖氨酸等电点时，聚赖氨酸带正电荷，将通过疏水和静电吸引与SDS相互作用，屏蔽SDS对聚合酶的作用，起到保护聚合酶活性的作用。
[0014]就本专利技术用于提取核酸的组合物而言，其在聚赖氨酸、SDS对细菌和/或病毒的外层蛋白脂类结构进行破坏，促进核酸释放的同时，不影响核酸的活性，也不会影响后续核酸扩增的扩增效率和酶活性。
[0015]优选地，所述组合物还包含碱性助剂。进一步优选地，所述碱性助剂选自NaOH、KOH或Na2CO3中的一种或多种。更优选地，所述碱性助剂为NaOH。
[0016]在本专利技术的用于提取核酸的组合物中，一方面，碱性助剂所提供的碱性环境可用于调控两性高分子聚赖氨酸所带电荷的类型。另一方面，碱性助剂提供碱性环境，促进核酸的释放，发挥释放剂的作用，同时可以加速蛋白等杂质的裂解变性。
[0017]优选地，所述组合物还包含一种或多种选自海藻糖、葡萄糖和牛血清白蛋白的细胞裂解促进剂。进一步优选地，所述细胞裂解促进剂为海藻糖和/或牛血清白蛋白。
[0018]在本专利技术的用于提取核酸的组合物中，细胞裂解促进成分，例如海藻糖和牛血清白蛋白可形成高渗环境，促进细胞的裂解和核酸释放，同时也可以起到保护核酸和后续扩增反应体系中酶活性的作用。
[0019]优选地，所述组合物还包含表面活性剂。进一步优选地，所述表面活性剂选自Triton
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X
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100、NP
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40或TWEEN
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80中的一种或多种。更优选地，所述表面活性剂为Triton
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X
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100。
[0020]在本专利技术的用于提取核酸的组合物中，表面活性剂，例如Triton
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X
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100是细胞裂解液成分之一，在核酸提取方面有一定作用。
[0021]优选地，所述组合物的pH值为10～14。
[0022]优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的聚赖氨酸的浓度为0.1～5重量％，优选为0.5～1重量％。
[0023]优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的十二烷基硫酸钠的浓度为0.1～5重量％，优选为0.5～1重量％。
[0024]优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的乙二胺四乙酸二钠的浓度为1～20毫摩尔/升，优选为12～14毫摩尔/升。
[0025]优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的碱性助剂的浓度为0.5～5摩尔/升，优选为1～1.2摩尔/升。
[0026]优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的牛血清白蛋白的浓度为1～20重量％，优选为15～17重量％。
[0027]优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中海藻糖的浓度为1～20重量％，优选为10～12重量％。
[0028]优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的表面活性剂的浓度为1～10重量％，优选为1～3重量％。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于提取核酸的组合物，其包含：聚赖氨酸、十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠和水；其中，所述组合物的pH值大于聚赖氨酸的等电点。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物还包含碱性助剂；优选地，所述碱性助剂选自NaOH、KOH或Na2CO3中的一种或多种；更优选地，所述碱性助剂为NaOH；优选地，所述组合物还包含一种或多种选自海藻糖、葡萄糖和牛血清白蛋白的细胞裂解促进剂；优选地，所述细胞裂解促进剂为海藻糖和/或牛血清白蛋白；优选地，所述组合物还包含表面活性剂；优选地，所述表面活性剂选自Triton
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X
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100、NP
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40或TWEEN
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80中的一种或多种；更优选地，所述表面活性剂为Triton
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X
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100。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述组合物的pH值为10～14。4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的聚赖氨酸的浓度为0.1～5重量％，优选为0.5～1重量％；优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的十二烷基硫酸钠的浓度为0.1～5重量％，优选为0.5～1重量％；优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的乙二胺四乙酸二钠的浓度为1～20毫摩尔/升，优选为12～14毫摩尔/升；优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的碱性助剂的浓度为0.5～5摩尔/升，优选为1～1.2摩尔/升；优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中的牛血清白蛋白的浓度为1～20重量％，优选为15～17重量％；优选地，基于所述组合物的总重量计，所述组合物中海藻糖的浓度为1～20重量％，优选为10～1...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋健晖，唐昊，黄志梅，
申请(专利权)人：湖南融健生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：