工程化半乳糖氧化酶变体酶制造技术

本发明专利技术提供了工程化半乳糖氧化酶(GO酶)、具有GO酶活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸，以及载体和包含这些多核苷酸和多肽的宿主细胞。还提供了用于产生GO酶的方法。本发明专利技术还提供了包含所述GO酶的组合物和使用所述工程化GO酶的方法。本发明专利技术在药物化合物和其他化合物的产生中特别有用。的产生中特别有用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化半乳糖氧化酶变体酶
[0001]本申请要求2020年10月6日提交的美国临时专利申请序列第63/087,971号的优先权，该美国临时专利申请出于所有目的通过引用以其整体并入。
专利

[0002]本专利技术提供了工程化半乳糖氧化酶(GO酶)、具有GO酶活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸，以及载体和包含这些多核苷酸和多肽的宿主细胞。还提供了用于产生GO酶的方法。本专利技术还提供了包含所述GO酶的组合物和使用所述工程化GO酶的方法。本专利技术在药物化合物和其他化合物的产生中特别有用。
[0003]对序列表、表格或计算机程序的引用
[0004]序列表的正式副本作为ASCII格式的文本文件经由EFS
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Web与说明书同时提交，文件名为“CX2
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208WO1_ST25.txt”，创建日期为2021年9月30日，且大小为1.26MB。经由EFS
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Web提交的序列表为说明书的一部分并且通过引用以其整体并入本文。
[0005]专利技术背景
[0006]将醇氧化成醛是合成有机化学中所需的关键转化。有几种化学试剂能够进行这种类型的反应；然而，使用这些方法有若干缺点。化学氧化途径是非化学选择性的方法，当使用时，需要对非靶向反应性基团进行保护。这些氧化方法中的氧化状态很难控制，因为一些化学试剂能够使靶醇过氧化。另外，在氧化条件下进行的反应提供了可能导致爆炸和对人员和财产造成严重的物理伤害的危险条件。氧化试剂及其副产物是对环境有害的反应性物质。因此，本领域对产生能够进行选择性氧化化学同时减少或消除这些严重缺点的受控剂(controlled agents)仍然存在需要。
[0007]专利技术概述
[0008]本专利技术提供了对伯醇具有温和氧化活性以对映选择性方式产生相应的醛的工程化半乳糖氧化酶(GO酶)、多肽、和编码这些酶的多核苷酸、以及载体和包含这些多核苷酸和多肽的宿主细胞。还提供了用于产生GO酶的方法。本专利技术还提供了包含所述GO酶的组合物和使用所述工程化GO酶的方法。本专利技术在药物化合物和其他化合物的产生中特别有用。
[0009]本专利技术提供了工程化半乳糖氧化酶，所述工程化半乳糖氧化酶包含与SEQ ID NO:4、6、38、50、114、226和/或262具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列或其功能片段。在一些实施方案中，工程化半乳糖氧化酶在多肽序列中包含至少一个取代或取代集，并且其中多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:4、6、38、50、114、226和/或262编号。在工程化半乳糖氧化酶的一些另外的实施方案中，多肽序列与SEQ ID NO:4具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性。在一些实施方案中，工程化半乳糖氧化酶在多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：19/547/564、47、111、196、196/327、196/408/462、196/442、196/442/462/583、218、292、329、407、408和442，其中多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:4编号。在一些实施方案中，工程化半乳糖氧化酶包含选自以下的至少一个取代或取代集：
19F/547N/564G、47T、111E、196Q、196R、196R/327L、196R/408N/462A、196R/442Y、196R/442Y/462A/583S、218T、218V、292R、329W、407G、408N和442Y，其中多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:4编号。在一些另外的实施方案中，工程化半乳糖氧化酶包含选自以下的至少一个取代或取代集：C19F/I547N/W564G、N47T、T111E、E196Q、E196R、E196R/R327L、E196R/D408N/G462A、E196R/F442Y、E196R/F442Y/G462A/T583S、R218T、R218V、S292R、L329W、Q407G、D408N和F442Y，其中多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:4编号。
[0010]在一些另外的实施方案中，工程化半乳糖氧化酶包含与SEQ ID NO:6具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列，并且其中工程化半乳糖氧化酶在多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：291、407、437和437/486，其中多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:6编号。在一些实施方案中，工程化半乳糖氧化酶包含选自以下的至少一个取代或取代集：291F、407E、407S、437N和437N/486V，其中多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:6编号。在一些实施方案中，工程化半乳糖氧化酶包含选自以下的至少一个取代或取代集：Y291F、Q407E、Q407S、L437N和L437N/K486V，其中多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:6编号。
[0011]在一些此外的实施方案中，工程化半乳糖氧化酶包含与SEQ ID NO:38具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列，并且其中工程化半乳糖氧化酶在多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：8/29/192/196/274/295、8/63/224/274/291/295/296、8/173/192/224/291/295/296、8/274/291/295、29/56/192/197/219/224/291/295/296、43/192/274/291/296、56/274/291、56/274/295、63/173/192/274、63/192/295、63/291/295、111/462、173/291、197/220/426、220/295、220/375/426、220/426/567、243/274/291/295/637、291、291/408/437、291/408/462、291/429、291/437、291/437/462、291/462、297/462、408/462、437/462、438和462，其中多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:38编号。在一些实施方案中，工程化半乳糖氧化酶包含选自以下的至少一个取代或取代集：8S/29N/192N/196E/274Q/295V、8S/63T/224K/274Q/291F/295V/296F、8S/173A/192N/224K/291F/295V/296F、8S/274Q/291F/295V、29N/56Y/192N/197R/219本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种工程化半乳糖氧化酶，所述工程化半乳糖氧化酶包含与SEQ ID NO:114、4、6、38、50、226和/或262具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列或其功能片段，其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中包含至少一个取代或取代集，并且其中所述多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:114、4、6、38、50、226和/或262编号。2.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:4具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：196/158、19/547/564、47、111、196、196/327、196/408/462、196/442、196/442/462/583、218、292、329、407、408和442，其中所述多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:4编号。3.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:6具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：291、407、437和437/486，其中所述多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:6编号。4.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:38具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：8/29/192/196/274/295、8/63/224/274/291/295/296、8/173/192/224/291/295/296、8/274/291/295、29/56/192/197/219/224/291/295/296、43/192/274/291/296、56/274/291、56/274/295、63/173/192/274、63/192/295、63/291/295、111/462、173/291、197/220/426、220/295、220/375/426、220/426/567、243/274/291/295/637、291、291/408/437、291/408/462、291/429、291/437、291/437/462、291/462、297/462、408/462、437/462、438和462，其中所述多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:38编号。5.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:50具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：24/52/311/550、46/158/192/217/297/556、46/158/192/367/375/556、46/192、46/192/217/274/556、46/192/274/304/367/637、46/192/274/437/556、46/192/304/367、46/192/367/408、46/192/367/556、46/192/375/437、46/274/367/375/437/637、46/297/304/367/437/637、158/192/217/556、158/192/274/304、158/192/274/437/556、158/192/274/556、158/192/304/408/556/637、158/192/367/375、158/192/367/556、158/192/408/556、158/637、192、192/217/295/297/367/556、192/217/367/375/556、192/217/556、192/274、192/274/304/426、192/274/367/556、192/274/367/637、192/274/375、192/295、192/295/304、192/295/367/375、192/297/367/644、192/297/437、192/304、192/304/365/437、192/304/367、192/304/637、192/367、192/367/375/556、192/367/408/426/437/556、192/437/556、192/637、217/304/437、274/304/367/
426/556、304/426/556、311/343/550、367、367/556、375、426、437和550，其中所述多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:50编号。6.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:114具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：161/564、221、263、296、308、361、373、481/597、518、537、553、564、570和596，其中所述多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID NO:114编号。7.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:226具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：24/47/382/408/570、24/79/308/367、24/250/308/596、24/250/408/568/570、24/308/309、24/309/408/570、24/367/408/596、24/367/570、24/596、69、250、250/570、309、443和570，其中所述多肽序列的氨基酸位置参考SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛吉，
申请(专利权)人：科德克希思公司，
类型：发明
国别省市：