靶向CD20抗体偶联药物的制备方法、抗体偶联药物及其用途技术

本发明专利技术涉及一种靶向CD20抗体偶联药物的制备方法、抗体偶联药物及其用途。具体地，本发明专利技术公开了一种如通式I所示的靶向CD20的抗体偶联药物。所述抗体偶联药物具有显著的抗肿瘤效果。果。

【技术实现步骤摘要】
靶向CD20抗体偶联药物的制备方法、抗体偶联药物及其用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及一种靶向CD20的抗体偶联药物及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]淋巴瘤是一组起源于淋巴结和结外其他淋网状组织的恶性肿瘤，其种类繁多且发病率高，每年我国有数万人因此失去生命。CD20是一种特异性表达于B淋巴细胞表面的非糖基化四重跨膜磷蛋白，对B淋巴细胞的分化和增殖具有重要的调节作用。CD20在B细胞表面的稳定和特异性表达，使得其成为治疗B细胞淋巴瘤理想的靶点。目前，经FDA批准上市用于治疗B细胞淋巴瘤的抗CD20单抗有Rituximab、Zevalin、Bexxar等。
[0003]单抗
‑
毒素偶联药物(antibody
‑
drug conjugate，ADC)属于近年来发展起来的新型抗癌药物，是将抗体和细胞毒性药物通过偶联子连接起来，抗体的靶向作用将细胞毒性药物靶向到肿瘤部位，通过内吞作用，ADC药物进入肿瘤细胞后释放毒素，杀死靶细胞，从而降低化疗中常见的药物非特异性的全身毒性。
[0004]因此，本领域技术人员致力于开发新的、更有效的靶向CD20的抗体偶联药物。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种靶向CD20的抗体偶联药物。
[0006]本专利技术的另一目的是提供上述抗体偶联药物的制备方法和用途。
[0007]本专利技术的第一方面，提供了一种抗体偶联药物或其药学上可接受的盐，所述抗体偶联药物结构如式I所示：
[0008]mAb
‑
(L
‑
D)n I
[0009]其中，
[0010]mAb表示重组抗CD20单抗，且所述重组抗CD20单抗为利妥昔单抗或其生物类似药；
[0011]D表示小分子毒素，且D为一种或多种单甲基澳瑞他汀(monomethyl auristatin)；
[0012]L为连接抗体和小分子毒素的接头；
[0013]n为偶联于所述抗体的所述小分子毒素的平均偶联数量，且n为4.2
±
1的整数或非整数；和
[0014]“‑”
为键。
[0015]在另一优选例中，n为4.2
±
0.5的整数或非整数。
[0016]在另一优选例中，n为4.2
±
0.3的整数或非整数。
[0017]在另一优选例中，所述小分子毒素通过接头与抗体的链间的二硫键还原后形成的巯基连接。
[0018]在另一优选例中，D为单甲基澳瑞他汀
‑
E(MMAE)、单甲基澳瑞他汀
‑
D(MMAD)、单甲基澳瑞他汀
‑
F(MMAF)，或其组合。
[0019]在另一优选例中，所述L为马来酰亚胺己酰基
‑
缬氨酸
‑
瓜氨酸
–
对氨基苄氧羰基。
[0020]在另一优选例中，所述抗体偶联药物的结构如下式所示：
[0021][0022]本专利技术的第二方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本专利技术第一方面所述的抗体偶联药物，以及药学上可接受的载体。
[0023]本专利技术的第三方面，提供了如本专利技术第一方面所述的抗体偶联药物或如本专利技术第二方面所述的药物组合物的用途，用于制备抗肿瘤的药物。
[0024]在另一优选例中，所述肿瘤为淋巴瘤或白血病。
[0025]在另一优选例中，所述肿瘤为B细胞非霍奇金淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病。
[0026]本专利技术的第四方面，提供了一种制备本专利技术第一方面所述的抗体偶联药物的方法，所述方法包括步骤：
[0027](1)将重组抗CD20单抗和还原剂进行还原反应，从而含有经还原的重组抗CD20单抗的反应体系；且所述单抗和还原剂的摩尔比为1:2.9～1:3.1；和
[0028](2)将步骤(1)的反应体系和小分子毒素在乙腈和水中的溶液进行偶联反应，从而形成所述的抗体偶联药物；且步骤(1)中的单抗与小分子毒素的摩尔比为1:7.0～1:8.0。
[0029]在另一优选例中，步骤(1)中，在缓冲液中进行还原反应。
[0030]在另一优选例中，步骤(1)中，所述经还原的重组抗CD20单抗为链间二硫键被还原为巯基的重组抗CD20单抗。
[0031]在另一优选例中，步骤(1)中，所述还原剂为三(2
‑
羧乙基)膦。
[0032]在另一优选例中，步骤(1)中，所述缓冲液为PB反应缓冲液(pH7.6)。
[0033]在另一优选例中，步骤(1)中，所述单抗和还原剂的摩尔比为1:2.95～1:3.05；较佳地，为1:2.99～1:3.01。
[0034]在另一优选例中，步骤(1)中，所述还原反应在25
±
1℃下进行。
[0035]在另一优选例中，步骤(1)中，所述还原反应进行90
±
10分钟。
[0036]在另一优选例中，步骤(2)中，所述步骤(1)中的单抗与小分子毒素的摩尔比为1:7.2～1:7.7；较佳地，1:7.4～1:7.6。
[0037]在另一优选例中，步骤(2)中，所述乙腈和水的体积比例为1:1。
[0038]在另一优选例中，步骤(2)中，所述偶联反应在4
±
0.5℃下进行。
[0039]在另一优选例中，步骤(2)中，所述偶联反应进行60
±
10分钟。
[0040]在另一优选例中，步骤(2)中，所述混合是将小分子毒素在乙腈和水中的溶液滴加至步骤(1)的反应体系中。
[0041]本专利技术的第五方面，提供了一种非治疗性的抑制肿瘤细胞的方法，所述方法包括步骤：在含有肿瘤细胞的体系中加入本专利技术第一方面所述的抗体偶联药物或本专利技术第二方面所述的药物组合物。
[0042]在另一优选例中，所述肿瘤细胞为CD20阳性肿瘤细胞，例如，Raji、Ramos、Daudi细
胞等。
[0043]本专利技术还提供了一种治疗或预防肿瘤的方法，所述方法包括步骤：给需要的对象施用本专利技术第一方面所述的抗体偶联药物或本专利技术第二方面所述的药物组合物。
[0044]应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
[0045]图1为鉴定抗体偶联药物TRS005载药量的疏水作用色谱。
[0046]图2为鉴定抗体偶联药物TRS005载药量的疏水作用色谱。
[0047]图3为鉴定抗体偶联药物TRS005载药量的疏水作用色谱。
[0048]图4为三批次TRS005的C4
‑
RPLC色谱图比较。
[0049]图5为三批次TRS005的疏水作用色谱图比较。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备靶向CD20的抗体偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将重组抗CD20单抗和还原剂在pH7.6的PB反应缓冲液中25
±
1℃下进行还原反应90
±
10分钟，从而得到含有经还原的重组抗CD20单抗的反应体系；其中所述重组抗CD20单抗为利妥昔单抗或其生物类似药，所述还原剂为三(2
‑
羧乙基)膦，并且所述重组抗CD20单抗与还原剂的摩尔比为1:2.9～1:3.1；(2)将vcMMAE在乙腈和水中的溶液滴加至步骤(1)的反应体系中，使所述经还原的重组抗CD20单抗和vcMMAE在4
±
0.5℃下进行偶联反应60
±
10分钟；其中所述乙腈和水的体积比例为1:1，所述重组抗CD20单抗与vcMMAE的摩尔比为1:7.0～1:8.0；(3)向步骤(2)反应体系中加入L
‑
半胱氨酸终止缓冲液终止偶联反应，所述L
‑
半胱氨酸终止缓冲液由DTPA溶液溶解L
‑
半胱氨酸制备得到；和(4)步骤(3)偶联反应终止后，进行缓冲液置换，转移偶联溶液至TFF系统，将原PB反应缓冲液更改为制剂缓冲液，然后用0.22微米Rapid
‑
Flow装置过滤。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述重组抗CD20单抗与还原剂的摩尔比为1:2.95～1:3.05。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述重组抗CD20单抗与还原剂的摩尔比为1:2.99～1:3.01。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述重组抗CD20单抗与还原剂的摩尔比为1:3。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述重组抗CD20单抗与vcMMAE的摩尔比为1:7.2～1:7.7。6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述重组抗CD20单抗与vcMMAE的摩尔比为1:7.4～1:7.6。7.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴幼玲，张玉杰，卢佳丽，王蕙文，秦民民，
申请(专利权)人：浙江特瑞思药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：