本发明专利技术提供一种刺五加皂苷系列对照品及其制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)将刺五加叶进行提取、萃取、过滤，得到刺五加澄清液；(2)将所述刺五加澄清液进行富集，收集皂苷富集段；(3)将所述皂苷富集段进行分段，获得皂苷段样品；(4)将所述皂苷段样品分别进行纯化，得到所述刺五加皂苷系列对照品。本发明专利技术极大的简化了刺五加中皂苷系列对照品的制备流程，具有效率高，收率高等优势，能够快速获得克级刺五加皂苷系列对照品。本发明专利技术采用反相和亲水色谱正交分离模式，能够高效获得纯度达到98％以上的刺五加皂苷系列对照品。上的刺五加皂苷系列对照品。上的刺五加皂苷系列对照品。
【技术实现步骤摘要】
一种刺五加皂苷系列对照品及其制备方法
[0001]本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种刺五加皂苷系列对照品及其制备方法。
技术介绍
[0002]刺五加(拉丁学名：Acanthopanax senticosus(Rupr.Maxim.)Harms)，别名：坎拐棒子、老虎潦、一百针，为五加科五加属植物刺五加的干燥根及根茎。刺五加的药用历史悠久，明代《本草纲目》中记载刺五加具有“补中益气，强意志”之功效。刺五加有促性腺、抗疲劳和防止记忆衰退等活性，医学上被称之为“适应原”样药物。临床上五加参、刺五加片及刺五加注射液等制剂对心血管疾病具有独特疗效，近年来，各国学者对刺五加化学成分、药理活性做了许多研究。
[0003]随着近年对刺五加综合利用研究的不断深入，发现刺五加叶中的主要活性成分为齐墩果烷型的三萜皂苷。相关报道中，邵春杰等人在刺五加叶中发现了13种新的化合物，命名为Ciwujianoside(刺五加皂苷)A1、A2、A3、A4、B、C1、C2、C3、C4、D1、D2、D3和E均为三萜皂苷。Suprunov(Suprunov，NI：Chemical Abstract73:127741e，1970)从刺五加叶中分离得到了六种单体皂苷，分别鉴定为齐墩果酸皂苷A、B、C、D、E和F。
[0004]CN1468860A公开了以刺五加茎或叶为原料，制备刺五加总皂苷提取物，主要是通过碱提，大孔树脂吸附洗脱，再弱酸型离子交换树脂进行脱色获得刺五加总皂苷提取物。CN1113785A公开了以刺五加根、茎或叶为原料，采用醇提水沉，再用大孔树脂吸附脱色获得刺五加提取物。CN113440546A公开了利用刺五加根、茎水提、膜浓缩醇沉、大孔树脂吸附、氧化镁脱色获得刺五加总皂苷提取物的方法。CN110540554A公开了一种通过大孔树脂获得刺五加皂苷提取物的方法。这些专利均是以刺五加总皂苷提取物为主，未有专利报道对刺五加叶中皂苷系列对照品进行研究，且这类皂苷具有结构相似，分离难度大的特点，传统的工艺路线还是通过正相色谱过硅胶柱和反相色谱结合反复制备获得对照品，也存在工艺路线较长且收率低的问题，很难制备得到纯度大于98％以上的对照品。
[0005]CN110063961A公开了刺五加皂苷B的新用途，其有效成分皂苷类物质能够穿过动物的血脑屏障直接作用于抵抗冷应激的神经中枢，提高了畜禽抵抗冷应激相关激素的分泌。刺五加作为天然植物成分不仅对环境没有污染，动物也不会对其产生依赖性，是保证畜禽健康、提高经济效益的有效手段，在养殖领域具有十分重要的意义。说明分离刺五加系列皂苷对照品有其价值和必要性。
[0006]因此，开发一种快速简便、提取率高、纯度高的刺五加皂苷系列对照品是本领域的研究重点。
技术实现思路
[0007]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种刺五加皂苷系列对照品及其制备方法，该方法快速简便、提取率高，制备得到的刺五加系列对照品的纯度较高。
[0008]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供一种刺五加皂苷系列对照品的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0010](1)将刺五加叶进行提取、萃取、过滤，得到刺五加澄清液；
[0011](2)将所述刺五加澄清液进行富集、洗脱a、液质联用检测，收集皂苷富集段；
[0012](3)将所述皂苷富集段进行分段、洗脱b、高效液相色谱检测b，获得皂苷段样品；
[0013](4)将所述皂苷段样品分别进行纯化、洗脱c、高效液相色谱检测c，得到所述刺五加皂苷系列对照品。
[0014]本专利技术提供的刺五加皂苷系列对照品的制备工艺包括皂苷富集、皂苷切段、皂苷对照品纯化等步骤，极大的简化了现有技术中刺五加皂苷的制备工艺，且能够快速获得刺五加中皂苷系列的对照品，具有效率高，收率高等优势，能够快速获得克级别量的对照品。
[0015]优选地，所述提取前包括将刺五加叶粉碎成碎叶的步骤。
[0016]优选地，所述提取的料液比为1:(8
‑
15)，例如可以为1:9、1:10、1:11、1:12、1:13或1:14等，以刺五加叶为1kg计，提取剂为8
‑
15L。
[0017]优选地，所述提取采用的提取剂包括甲醇水溶液或乙醇水溶液。
[0018]优选地，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分含量为50
‑
80％，例如可以为55％、60％、70％或75％等。
[0019]优选地，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为60
‑
90％，例如可以为65％、70％、80％或85％等。
[0020]优选地，所述提取重复进行3
‑
5次，例如可以为3次、4次或5次。
[0021]优选地，所述提取之后还包括过滤、浓缩的步骤。
[0022]优选地，所述过滤依次进行200目纱布过滤、滤纸过滤。
[0023]优选地，所述浓缩的温度为50
‑
60℃，例如可以为52℃、55℃或58℃等。
[0024]本专利技术中浓缩的方式没有特别限制，主要以减压浓缩的方式进行，过滤的方式也没有限制，常规的过滤装置、抽滤装置均可。
[0025]优选地，所述萃取的萃取剂包括石油醚或二氯甲烷，优选为石油醚。
[0026]优选地，所述萃取剂与浓缩液的体积比为(0.5
‑
2):1，例如可以为0.8:1、1:1或1.5:1等。
[0027]优选地，所述萃取重复进行2
‑
3次。
[0028]优选地，所述过滤的陶瓷膜孔径为30
‑
500nm，例如可以为50nm、100nm、200nm、300nm或400nm等。
[0029]上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0030]优选地，所述富集采用反相C18填料的高压制备柱。
[0031]优选地，所述反相C18填料为耐纯水系填料。
[0032]优选地，所述反相C18填料的粒径为10
‑
30μm，例如可以为10μm、15μm、20μm、30μm等。
[0033]优选地，所述富集的上样质量占填料质量的百分比为4
‑
10％，例如可以为5％、6％、7％、8％或9％等。
[0034]优选地，所述洗脱a采用台阶等度洗脱。
[0035]优选地，所述洗脱a采用的洗脱剂为水
‑
乙醇体系。
[0036]优选地，所述洗脱剂的流速为250
‑
350mL/min，例如可以为280mL/min、300mL/min或320mL/min等。
[0037]优选地，所述洗脱a的台阶等度洗脱程序为：先2体积纯水洗脱，再10％乙醇水溶液洗脱10min，20％乙醇水溶液洗脱15min，30％乙醇水溶液洗脱15min，40％乙醇水溶液洗脱15min，80％乙醇水本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种刺五加皂苷系列对照品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：(1)将刺五加叶进行提取、萃取、过滤，得到刺五加澄清液；(2)将所述刺五加澄清液进行富集、洗脱a、液质联用检测，收集皂苷富集段；(3)将所述皂苷富集段进行分段、洗脱b、高效液相色谱检测b，获得皂苷段样品；(4)将所述皂苷段样品分别进行纯化、洗脱c、高效液相色谱检测c，得到所述刺五加皂苷系列对照品。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取的料液比为1:(8
‑
15)；优选地，所述提取采用的提取剂包括甲醇水溶液或乙醇水溶液；优选地，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分含量为50
‑
80％；优选地，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为60
‑
90％；优选地，所述提取之后还包括过滤、浓缩的步骤。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述萃取的萃取剂包括石油醚或二氯甲烷；优选地，所述过滤的陶瓷膜孔径为30
‑
500nm。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述富集采用反相C18填料的高压制备柱；优选地，所述富集的上样质量占填料质量的百分比为4
‑
10％；优选地，所述洗脱a采用台阶等度洗脱；优选地，所述洗脱a采用的洗脱剂为水
‑
乙醇体系。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述分段采用反相C18填料的高压制备柱；优选地，所述洗脱b采用台阶等度洗脱；优选地，所述洗脱b采用的洗脱剂为乙腈水溶液。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述纯化采用的是反相制备柱和亲水色谱柱；优选地，所述洗脱c采用的洗脱剂为甲醇水溶液。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，上样所述反相制备柱时，洗脱剂甲醇水溶液中甲醇的体积百分含量为60
‑
75％；优选地，上样所述亲水色谱柱时，洗脱剂甲醇水溶液中甲醇的体积百分含量为70
‑
【专利技术属性】
技术研发人员：王小宇，张洁，韩宝翠，
申请(专利权)人：黑龙江乌苏里江制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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