shRNA靶向抑制CD38的抗CD38CAR分子及其药物制造技术

本发明专利技术提供shRNA靶向抑制CD38的抗CD38CAR分子，包括shRNA靶向抑制CD38的抗CD38CAR分子，其特征在于，包括依次串联的U6启动子、靶向抑制CD38的shRNA、EF1α启动子、上游的信号肽和用于检测的myc标签；CD38CAR抗原结合区域CD38scfv；CD8铰链

【技术实现步骤摘要】
ScFv、CD8铰链区和跨膜区、CD28胞内区和CD3ζ胞内区依次串联，所述靶向抑制CD38的shRNA序列是SEQ ID NO.1：CCGGCTGAGGATTCATCTTGCACATCTCGAGATGTGCAAGATGAATCCTCAGTTTTTG。
[0005]在一种实施方式中，所述CD38 CAR抗原结合区域CD38scfv的氨基酸序列是SEQ ID NO.2：SQVQLVQSGGGLVQPGRSLRLPCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYYNPFYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGGNTVAWYQQLPGTAPKLLIYNYSQRPSGVPDRFSGSKSGTSSSLAIGGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGVVFGGGTKLTVLG。
[0006]在一种实施方式中，所述U6启动子序列是SEQ ID NO.3：GAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGAC。
[0007]在一种实施方式中，所述EF1α启动子序列是SEQ ID NO.4：GGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGA。
[0008]在一种实施方式中，所述上游的信号肽序列是SEQ ID NO.5：EWSWVFLFFLSVTTGVHSDI。
[0009]在一种实施方式中，所述Myc氨基酸序列是SEQ ID NO.6：EQKLISEEDL。
[0010]在一种实施方式中，所述CD8氨基酸序列是SEQ ID NO.7：AKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFA。
[0011]在一种实施方式中，所述CD28氨基酸序列是SEQ ID NO.8：：PRKIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS。
[0012]在一种实施方式中，所述CD3ζ氨基酸序列是SEQ ID NO.9：RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。
[0013]在一种实施方式中，本专利技术提供一种治疗肿瘤的药物，其含有上述的shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR分子。
[0014]本专利技术在构建的抗CD38 CAR
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T细胞的基础上，通过RNA干扰技术，构建了shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR分子，通过逆转录病毒载体进行包装并成功转导人原代T细胞，成功构建shRNA CD38
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anti CD38 CAR
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T细胞。实验中发现，shRNA2
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CD38 CAR
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T组细胞CD38 mRNA的表达水平显著低于CD38 CAR
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T组细胞，而shRNA1
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CD38 CAR
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T细胞组与CD38 CAR
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T组CD38 mRNA表达水平差异无统计学意义，结果表明shRNA2序列靶向性更强，RNA干扰成功，shRNA2
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CD38 CAR
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T组的细胞CD38表达被抑制。同时在体外培养的条件下，shRNA2
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CD38 CAR
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR分子，其特征在于，包括依次串联的U6启动子、靶向抑制CD38的shRNA、EF1α启动子、上游的信号肽和用于检测的myc标签；CD38 CAR抗原结合区域CD38scfv；CD8铰链
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跨膜结构域；CD28协同激活结构域和CD3ζ胞内信号传导结构域，CD38 ScFv、CD8铰链区和跨膜区、CD28胞内区和CD3ζ胞内区依次串联，所述靶向抑制CD38的shRNA序列是SEQ ID NO.1：CCGGCTGAGGATTCATCTTGCACATCTCGAGATGTGCAAGATGAATCCTCAGTTTT TG。2.根据权利要求1所述的抗CD38 CAR分子，其特征在于，所述CD38 CAR抗原结合区域CD38scfv的氨基酸序列是SEQ ID NO.2：SQVQLVQSGGGLVQPGRSLRLPCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIAYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYYNPFYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGGNTVAWYQQLPGTAPKLLIYNYSQRPSGVPDRFSGSKSGTSSSLAIGGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGVVFGGGTKLTVLG。3.根据权利要求1所述的抗CD38 CAR分子，其特征在于，所述U6启动子序列是SEQ ID NO.3：GAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGAC。4.根据权利要求1所述的抗CD38 CAR分子，其特征在于，所述EF1α启动子序列是SEQ ID NO.4：GGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建勋，刘秀盈，冯娅茹，周雅婷，张静，朱晶晶，
申请(专利权)人：深圳北京中医药大学研究院，
类型：发明
国别省市：