一种柠檬苦素类物质的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质的方法。它是将柠檬籽作为原料，按下列步骤进行提取：原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附层析分离出浸提液中的柠檬苦素类物质，经干燥制得。本发明专利技术充分利用柠檬产品废弃物－－柠檬籽作为原料，这样不仅将生产过程中产生的废弃物进行充分利用，降低了对原材料的浪费，减少了环境污染；且得到的柠檬苦素类物质含量高，其含量达到９５％；其提取率达９０％，比之现有提取技术提取率高３０％；采用乙醇浸提、采用大孔树脂柱层析分离和硅胶色谱柱纯化，降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及柠檬苦素类物质的提取方法，特别是涉及一种从柠檬籽中提取柠檬苦素类 物质的方法。
技术介绍
柠檬苦素类物质是指柠檬苦素及其类似物所组成的混合物，混合物中主要由柠檬苦 素、诺米林两种物质构成，它们都属三萜类的物质，是植物次生代谢的产物，主要存在于多种 芸香科和楝科植物中，也是引起柑橘类果汁苦味的主要物质,具有广泛的生物活性，如杀 虫、抗病毒、抗肿瘤形成和抑菌等作用。柠檬苦素类物质在抗癌、镇痛、调节体内胆固醇 水平,防止动脉粥样化和除虫等方面的作用，越来越受到人们的重视，但有关研究在国内刚刚 起步。由于柠檬苦素、诺米林结构相似，药理作用相同，所以统称为柠檬苦素类物质，通常 两者不用分离使用。现在市场上的柠檬苦素类物质主要是从甜橙籽或柚子籽中提取，提取 得到的柠檬苦素类物质价格昂贵，每千克近两万元。大家知道，在柠檬的加工过程中会产生众多的柠檬籽，它含有较多的柠檬苦素类物质， 但是目前却未对它加以合理利用，浪费严重且污染环境。目前对柠檬苦素类物质进行提取，常采用有机溶剂从甜橙籽或柚子籽中提取，所用机 溶剂为大量的石油醚。这种提取方法的成本高，有危险性，环境污染严重，且得到的拧檬 苦素类物质含量低,一般为80%。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质的方法。这种方法制备成 本低、提取含量高。本专利技术的目的是这样实现的 ，其特征在于它是将拧 檬籽作为原料，按下列步骤进行提取原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去酶解 液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再釆用吸附层析分离出浸提液中的拧檬苦素类物质，经干 燥制得。为了便于粉碎，上述原料最好先干燥，再将其粉碎至过60 100目筛。如果过细，细粉 容易结块，粘在一起，不易和酶制剂混合均匀,如果太粗,则酶解时间长，拧檬苦素类物质释放 也不充分。3上述酶解是指粉碎后的柠檬籽中加入柠檬籽3 5倍重量的水，再加入酶制剂纤维素 酶和果胶酶，它们在水中的量分别0.3% 0.6%和0.5 1.0%,以重量百分比计。加入酶制 剂,一方面是造成柠檬籽的细胞壁、果胶、纤维素的分解，而使柠檬苦素类物质释放；同时 柠檬籽中有约30%的柠檬苦素类物质，都是糖苷的形式存在，如柠檬苦素糖苷，诺米林糖苷 等，糖苷易溶于水,在现有提取过程中，因没有经酶制剂将糖苷水解为苷元形式，由于糖苷和 苷元的溶解性差异而没能提取,造成提取率低下,而在本专利技术加入的酶制剂可促使柠檬苦素 糖苷，诺米林糖苷等糖苷的糖苷键发生酶解而断裂,形成不溶于水的柠檬苦素、诺米林等苷 元，从而提高提取率。酶解充分后，静置2 4h，弃去酶解液,将沉淀物加入95。/。乙醇搅拌混匀浸提l小时；收 集滤液浓縮至6(TC相对密度为1.20 1.30,再将浓縮滤液进行吸附层析分离提取柠檬苦素 类物质。吸附层析选用大孔树脂柱层析。为了进一步提高柠檬苦素类物质的纯度，上述浓縮液进行大孔树脂柱层析后，还通过 硅胶色谱柱层析进行分离纯化。具体地说，它是将柠檬籽作为原料，包括原料干燥，粉碎至60 100目，加水和酶制 剂进行酶解提取得酶解液；酶解充分后，静置2 411,弃去酶解液,在沉淀物中加入95%乙醇 搅拌混匀浸提l小时，收集滤液；将滤液浓縮至60'C的相对密度为1.20 1.30;再将浓縮 的滤液进行大孔树脂柱层析，用水洗脱去除具有一定极性水溶性物质，再加入乙醇进行梯 度洗脱，收集洗脱液并浓縮；得到的浓縮洗脱液进行硅胶色谱柱层析，用水洗至平衡，用 乙醇洗脱，分段收集洗脱液并混合，最后浓縮、干燥得柠檬苦素类物质。上述酶解温度为35 45'C，时间5 7小时；上述大孔树脂柱为AB-8树脂，采用含量 20%、 40%、 70%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70%洗脱液并减压浓縮；浓縮洗脱液进 行硅胶色谱柱层析，用70%乙醇洗脱。本专利技术的有益效果为1、 专利技术人充分利用柠檬产品废弃物——柠檬籽作为原料，这样不仅将生产过程中产 生的废弃物进行充分利用，降低了对原材料的浪费，减少了环境污染；同时，还提高了拧 檬的附加值及工业生产的产值。专利技术人首创从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质，且得到的拧 檬苦素类物质含量高，采用反相高效液相色谱法，使用C18色谱柱，以甲醇和水的混合液作 流动相，紫外检测器检测测定柠檬苦素类物质，其总含量达到95%(其中柠檬苦素50%以上、 诺米林达30%以上)。2、 本专利技术采用的酶解提取方式，不同于现有技术常用的普通有机溶剂浸提工艺。采用酶解技术可提高柠檬苦素类物质的释放，同时有利于将糖苷分解为统一的苷元，提高收 率；提取率达90%，比之现有提取技术提取率高30%。3、采用乙醇浸提、采用大孔树脂柱层析分离和硅胶色谱柱纯化，避免目前常用有机 溶剂提取法中使用大量有机溶剂而带来的高成本、危险性、以及环境污染问题。 具体实施例方式下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术方法，但是本专利技术方法并不因此而限制在所 述实施例的范围内。实施例1: ，其特征在于它是将柠檬籽作为原料，原料先干燥再粉碎至过60目筛；加入原料4倍量的水、0.4%纤维素酶和0.8%果胶酶在35°(:，酶解时间7小时，提取 得酶解液，这样可以分解细胞壁中的纤维素和果胶，使柠檬籽中的柠檬苦素类物质充分释 放出来，同时有利于将能溶于水的柠檬苦素类物质糖苷水解为柠檬苦素苷元，以利于后处 理；酶解充分后，静置2 4h,弃去酶解液，在沉淀物中加入4-6倍重量的95%乙醇搅拌混匀 浸提1小时，收集滤液；将滤液浓縮至6(TC的相对密度为1.20 1.30;再将浓縮的滤液用 AB-8树脂柱层析，用水洗脱去除具有极性的水溶性物质，再加入含量分别为20%、 40%、 70%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70%洗脱液并减压浓縮；得到的浓縮洗脱液进行硅胶 色谱柱层析，用水洗至平衡，用乙醇洗脱，分段收集含有柠檬苦素类物质的洗脱液并混合， 最后浓縮、干燥得拧檬苦素类物质。所得的拧檬苦素类物质经检测，其总含量为96%。实施例2: —种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于将拧檬籽清洗，干燥，粉碎至过60 100目筛，用3倍原料量的水,加入0.5。/。纤维素酶(15u/mg)和0.9%果胶酶 (1.8u/mg)进行酶解，温度4(TC，时间6h;酶解充分后，静置2 4h,弃去上层酶解液，在沉淀 物中加入5倍重量95%乙醇搅拌混匀浸提1小时，收集滤液；将滤液浓縮至60'C时相对密 度为1.20 1.30;将浓縮滤液上大孔树脂柱(AB-8树脂)层析，用水洗脱，初步洗去水溶性 物质，加入乙醇至含醇量20%、 40%、 70%并收集70%的洗脱液,将收集的70%洗脱液减压浓 縮，将浓縮的洗脱液再上硅胶色谱柱层析，用水洗至平衡，用70%乙醇洗脱，分段收集洗脱 液，对各段收集洗脱液进行检测，将含有拧檬苦素类物质的洗脱液混合并减压浓縮,最后进 行喷雾干燥而制得柠檬苦素类物质。所得的柠檬苦素类物质经检测，其总含量为94%。权利要求1、，其特征在于它是将柠檬籽作为原料，按下列步骤进行提取原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附层析分离出浸提液中的柠檬苦素类物质，经干燥制得。2、 如权利要求1所述的柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于原料先干燥，再将其 粉碎至过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于：它是将柠檬籽作为原料，按下列步骤进行提取：原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附层析分离出浸提液中的柠檬苦素类物质，经干燥制得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谈宗华，刘群，李天泉，张承荣，
申请(专利权)人：重庆长龙实业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]