本发明专利技术公开了一种嗜热毁丝霉菌株及其在产角蛋白酶方面的应用，嗜热毁丝霉菌株ＧＺＵＩＦＲ－Ｈ９４．１（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ？ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ？ＧＺＵＩＦＲ－Ｈ９４．１），其菌株保藏号为ＣＣＴＣＣ？ＮＯ：Ｍ？２０９１４０。嗜热毁丝霉ＧＺＵＩＦＲ－Ｈ９４．１菌株产角蛋白酶的方法，是以鸡毛粉２０．１０ｇ／Ｌ为碳、氮源和诱导物、尿素０．９８ｇ／Ｌ为补充氮源、ＮａＣｌ？５ｇ／Ｌ，Ｋ２ＨＰＯ４？６ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４？１ｇ／Ｌ为产酶培养基，产酶温度为３８℃初始ｐＨ为７．９，连续培养６天。本菌株是一个生长快速、嗜热的菌株，且具有较强的产角蛋白酶能力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及嗜热毁丝霉菌株及其应用。
技术介绍
角蛋白酶(keratinase)是一种专一性很强的蛋白酶，能特异性地分解角蛋白，而 角蛋白广泛存在于自然界中，主要来源于动物的外胚层细胞，包括皮肤以及皮肤的衍生物， 是其结构蛋白，可分为a和|3两种类型。该类蛋白质化学结构稳定，是一种抗性很强的硬 性蛋白，它的结构通过二硫键、氢键、盐键和其它交键作用使得非常稳定，不溶于水，难以被 胰蛋白酶、胃蛋白酶等常见蛋白酶降解，但能被角蛋白酶所降解。角蛋白酶具有降解天然角 蛋白的特性，属于碱性丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶族，被认为是一类诱导酶。由于角蛋白酶 具有能特异性地分解角蛋白的特性，使其在饲料工业、肥料工业、医学领域、皮革工业、洗涤 用品、美容产品、食品工业、环境治理及纺织工业等方面均有广泛的应用。因此，研究与开发 产角蛋白酶意义重大。 嗜热菌具有在发酵中利用其嗜热特性可以提高反应温度，以增大反应速度，提高 单位时间内的产率，节约成本；减少中温型杂菌的污染几率等优势。而嗜热真菌产角蛋白酶 的研究尚未见报道。毁丝霉属的其他真菌也尚未见报道可以产生角蛋白酶。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供嗜热的、产角蛋白酶能力强且生长快速的嗜热毁丝霉菌 株。 本专利技术的另一 目的是提供该嗜热毁丝霉菌株在产角蛋白酶方面的应用。 本专利技术的再一目的是提供该嗜热毁丝霉菌株产角蛋白酶的方法。 嗜热毁丝霉菌株从四川平武的土样中分离而获得，已于2009年7月15日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址中国武汉武汉大学)，名称为嗜热毁丝霉GZUIFR-H94. l(Myceliophthora thermophila GZUIFR-H94. 1)， 保藏号CCTCC NO :M209140。 本专利技术的嗜热毁丝霉GZUIFR-H94. 1，具有以下形态学特征 在PDA培养基上，38t:培养2. 5天，菌落直径85mm，平展，褐色，边缘白色，延长培 养全部变为褐色，绒状至粉状，表面有菌丝呈网状分布；正反面颜色一致。菌丝具隔膜，半 透明，表面光滑，气生菌丝明显分为粗细两种类型，均可育，细菌丝宽O. 9-1.8ym，粗菌丝宽 3.6-6.3(8. 1) ym。无球拍状菌丝。顶生和侧生分生孢子，无柄，或生在短柄或短突或侧枝 上，单生或双生或3个成链，半透明，光滑或具瘤，大多椭圆形，大小4. 5-7. 2X2. 3-4. 5iim， 单孢，双孢极少，基痕宽O. 5-2iim，产孢丰富。无间生孢子。厚垣孢子未见。有性型未知。 此菌为嗜热真菌，在2(TC时几乎不生长，25t:培养7天菌落直径为15mm，最适生长温度为 35-40。C，53。C培养7天，直径达45mm。 60。C下未见生长。本专利技术嗜热毁丝霉GZUIFR-H94. 1菌株产角蛋白酶的方法，是以鸡毛粉20. 10g/L3为碳、氮源和诱导物、尿素0.98g/L为补充氮源、NaCl 5g/L， K2HP04 6g/L， KH2P04 lg/L为产 酶培养基，产酶温度为3『C初始pH为7. 9，连续培养6天，酶活测定时间为培养的第6天。 本专利技术与现有技术相比，具有如下优点和有益效果本菌株从四川平武的土样中 分离而获得，为中国本土的菌株，并非从国外引进。该菌株的产角蛋白酶能力强。由于是一 个嗜热菌株，因而在发酵中可以提高反应温度，以增大反应速度，提高单位时间内的产率， 节约成本；而且有减少中温型杂菌的污染几率等优势。同时，由于本菌株生长快速，可以縮 短发酵周期，也有提高单位时间产率，减少污染机会，节约生产成本等优势。 以下通过具体实施方式来进一步说明本专利技术的有益效果。具体实施例方式实施例1 : (1)材料来源 采自四川平武的土样。 马丁氏培养基KH2P04 lg，MgS04. 7H20 0. 5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，琼脂18g，孟加 拉红1/300mL。灭菌条件12rC，30min。用前待温度冷却在4(TC左右，加青霉素20/mg，链 霉素40 ii g/mg。PDA培养基马铃薯200g切块，加水约500mL，煮沸30min，过滤，加葡萄糖20g，琼 脂20g，水补足1000mL， pH自然。灭菌条件121°C ， 30min。 (2)菌株的分离纯化 称取2g土样加入盛有20mL无菌水和玻璃珠的三角瓶中，振荡10min左右，使土样 均匀地分散在稀释液中成为土壤悬液。 吸取lmL 土壤悬液到9mL无菌水中，依次按10倍法稀释，通常稀释在10—1 10一3。 采用混菌法接种，吸取lmL悬液于直径为9cm的灭菌培养皿中，然后倾注已熔化并 冷却到45t:的双抗马丁氏培养基，充分混匀，待凝固后倒置，4(rC保温培养。待菌落长出后 转移到新的培养皿进行纯化，获得GZUIFR-H94. 1菌株。 (3)分离株的鉴定 把待鉴定菌株移入PDA培养基中，采用点中法接种，倒置放于38t:温箱中培养7 天。采用胶带粘帖法进行标本片的制作并采用Motic数码显微镜进行显微摄影，描述记载 待定菌株的菌落特征和微观形态特征。 通过经典形态学鉴定，该分离株为嗜热毁丝霉，具体描述如下 在PDA培养基上，38t:培养3天，菌落直径85mm，平展，褐色，边缘白色，延长培养 全部变为褐色，绒状至粉状，表面有菌丝呈网状分布；正反面颜色一致。菌丝具隔膜，半透 明，表面光滑，气生菌丝明显分为粗细两种类型，均可育，细菌丝宽0. 9-1. 8 ii m粗菌丝宽 3.6-6.3(8. 1) ym。无球拍状菌丝。顶生和侧生分生孢子，无柄，或生在短柄或短突或侧枝 上，单生或双生或3个成链，半透明，光滑或具瘤，大多椭圆形，大小4. 5-7. 2X2. 3-4. 5iim， 单孢，双孢极少，基痕宽O. 5-2iim，产孢丰富。无间生孢子。厚垣孢子未见。有性型未知。 此菌为嗜热真菌，在2(TC时几乎不生长，25t:培养7天菌落直径为15mm，最适生长温度为 35-40。C，53。C培养7天，直径达45mm。 60。C下未见生长。 实施例2 : 嗜热毁丝霉GZUIFR-H94. 1菌株产角蛋白酶的方法，包括以下步骤 (1)培养基 摇瓶发酵培养基鸡毛粉20. 10g，尿素0. 98g， NaCl 5g， K2HP04 6g， KH2P04 lg，水 1000m，初始pH为7.9。 (2)液体发酵培养将本专利技术的菌株接种在含固体PDA培养基的培养皿中，38t:培养3天，用直径7mm 的打孔器打空，然后将菌丝块接种到装有50mL复筛液体培养基的250mL三角瓶中，每瓶接 3孔菌丝块，每组作3个重复，放入3『C摇床中，140rpm保温静止培养，测定酶活力。 (3)粗酶液的制备 孢子液的制备取4t:冰箱保存的菌种，用接种环挑取少量菌丝，用划线法将其接 种于PDA培养基上，38t:培养。长好后，用灭菌的0. 05 %的Tween-80轻轻洗出平板表面的 分生孢子，并在无菌条件下用16层纱布过滤，所得孢子悬液以血球计数板计数后置于4t: 保存备用。 粗酶液的提取取适量的孢子液加入250mL的三角瓶中(内装50mL发酵液)，于38t:，120rpm摇床上培养。6天后取发酵液，4000rpm离心5min，然后再用快速定性滤纸过滤，取滤液既得粗酶液。 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种嗜热毁丝霉菌株ＧＺＵＩＦＲ－Ｈ９４．１（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａＧＺＵＩＦＲ－Ｈ９４．１），其特征在于所属菌株保藏号为ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ ２０９１４０。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁建东，韩燕峰，梁宗琦，张继伟，杜文，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：52[中国|贵州]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。