一种高产表面活性素的复合发酵工艺制造技术

本发明专利技术提供了一种高产表面活性素菌株的发酵工艺，所述复合发酵工艺包括如下步骤：(1)热带芽孢杆菌10

【技术实现步骤摘要】
一种高产表面活性素的复合发酵工艺


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种高产表面活性素的复合发酵工艺。

技术介绍

[0002]表面活性素由四种氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸)和脂肪酸链构成，表面活性素具有高表面活性，与化学表面活性素相比，具有无毒或低毒、可生物降解，不污染环境的特点。它还具有很好的抗菌、抗病毒、抗肿瘤以及抗支原体活性，应用潜能巨大。
[0003]目前发现的野生菌株的表面活性素产量几乎都为毫克级，生产、分离和纯化成本极高。共培养发酵可以提高微生物产物的产量，得到的产物质量更高，但是通过微生物复合发酵改善表面活性素产量的研究尚未报道。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的问题，本专利技术创新性地采用热带芽孢杆菌10
‑1‑
1和内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6复合发酵制备表面活性素，发酵液不仅具有良好的乳化性和很强的抑菌性，而且表面活性素的产量显著提高。
[0005]为实现以上技术目的，本专利技术的技术方案是：
[0006]本专利技术提供了一种高产表面活性素的复合发酵工艺，所述复合发酵工艺包括如下步骤：
[0007](1)热带芽孢杆菌10
‑1‑
1菌种活化：将甘油管内的热带芽孢杆菌10
‑1‑
1菌株划线至YPD平板上，37℃培养24h；
[0008](2)热带芽孢杆菌10
‑1‑
1种子液培养：将热带芽孢杆菌10
‑1‑
1单菌落接种至一级发酵种子培养基中，37℃培养24h；
[0009](3)热带芽孢杆菌10
‑1‑
1单菌发酵：将热带芽孢杆菌10
‑1‑
1一级种子液以1％～10％添加量接种至热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵培养基中进行发酵，温度30℃～40℃，溶氧20％以上，pH5
‑
8，转速300rpm，发酵24h
‑
48h，得到热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液；
[0010](4)热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液处理：将热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液过陶瓷膜，除去菌体及杂质；
[0011](5)内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6菌种活化：内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6划线至YPD平板上，37℃培养24h；
[0012](6)内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6种子液培养：将内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6单菌落接种至一级发酵种子培养基中，37℃培养24h；
[0013](7)内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6与热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液复合发酵：内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6一级种子液以1％～10％添加量接种至复合发酵培养基中进行发酵，所述复合发酵培养基含有经步骤(4)处理的热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液，设置发酵温度30℃～40℃，溶氧20％以上％，pH5
‑
8，转速320rpm，发酵24h
‑
48h，得到复合发酵液；
[0014](8)复合发酵液处理：复合发酵液陶瓷膜去菌体及杂质，旋蒸浓缩，酸沉离心提取
得到表面活性素。
[0015]本专利技术所述热带芽孢杆菌10
‑1‑
1保藏编号为MCCC 1A01406。该菌种购自中国海洋微生物菌种保藏中心。
[0016]本专利技术所述内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6保藏编号为CGMCC 1.15674。该菌种购自中国微生物菌种保藏中心。
[0017]本专利技术所述YPD平板配方：葡萄糖(1.0％)、酵母膏(1.0％)、蛋白胨(2.0％)、琼脂(2.0％)。
[0018]本专利技术所述一级发酵培养基配方：葡萄糖(1.0％)、酵母膏(1.0％)、蛋白胨(2.0％)。
[0019]本专利技术所述热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵培养基配方：大豆油脂体1％～5％，豆渣1％～5％，玉米渣1％～5％，PTM10.1％～0.5％。
[0020]本专利技术所述复合发酵培养基配方：5
×
M9盐溶液200mL，1M MgSO4溶液2mL，20％葡萄糖溶液20mL，1M CaCl2溶液0.1mL，补加陶瓷膜过滤后的热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液，定容至1000mL。
[0021]本专利技术所述1M MgSO4溶液为MgSO4·
7H2O 2.46g，双蒸水定容至10mL；所述1M CaCl2溶液为CaCl2·
6H2O 2.191g，双蒸水定容至10mL；所述5
×
M9盐溶液为NaHPO4·
7H2O 12.8g，KH2PO43.0g，NaCl0.5g，NH4Cl 1.0g，200mL双蒸水溶解；所述20％葡萄糖溶液为4g葡萄糖以双蒸水定容至20ml；以上溶液均121℃灭菌20min。
[0022]从以上描述可以看出，本专利技术具备以下优点：
[0023]本专利技术创新性地采用热带芽孢杆菌10
‑1‑
1和内生解淀粉芽孢杆菌13
‑
6复合发酵制备表面活性素，发酵液不仅具有良好的乳化性和很强的抑菌性，而且表面活性素的产量显著提高。
具体实施方式
[0024]下面通过实施例，进一步阐述本专利技术的特点，但不对本专利技术的权利要求做任何限定。
[0025]实施例1热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵培养基的选择
[0026]热带芽孢杆菌10
‑1‑
1分别发酵不同的培养基，将培养基处理后，取20ml的试管，加入5mL的发酵液及5mL的菜籽油，用摇床150rpm摇晃10min，以水做对照，比较泡沫高度。
[0027]表1
[0028][0029]由表可以看出，大豆油脂体为底物的培养基发酵液具有更好的乳化性，是最优选择。
[0030]实施例2热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵条件优化
[0031]采用单因素实验，分别对培养基的接种量，温度，pH，发酵时间进行优化，比较排油圈大小及表面活性素的产量。
[0032]表2
[0033]接种量1％3％5％7％10％排油圈cm4.255.64.44.254.0产量g/L4.32515.56434.36224.30064.2961
[0034]表3
[0035][0036][0037]表4
[0038]pH5678排油圈cm4.654.905.755.20产量g/L4.54894.78655.81375.1462
[0039]表5
[0040]时间24h36h48h排油圈cm5.106.305.75产量g/L5.3120本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高产表面活性素的复合发酵工艺，其特征在于，所述复合发酵工艺包括如下步骤：(1)热带芽孢杆菌10
‑1‑
1菌种活化：将甘油管内的热带芽孢杆菌10
‑1‑
1菌株划线至YPD平板上，37℃培养24h；(2)热带芽孢杆菌10
‑1‑
1种子液培养：将热带芽孢杆菌10
‑1‑
1单菌落接种至一级发酵种子培养基中，37℃培养24h；(3)热带芽孢杆菌10
‑1‑
1单菌发酵：将热带芽孢杆菌10
‑1‑
1一级种子液以1％～10％添加量接种至热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵培养基中进行发酵，温度30℃～40℃，溶氧20％以上，pH5
‑
8，转速300rpm，发酵24h
‑
48h，得到热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液；(4)热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液处理：将热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液过陶瓷膜，除去菌体及杂质；(5)内生解淀粉芽孢杆菌13
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6菌种活化：内生解淀粉芽孢杆菌13
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6划线至YPD平板上，37℃培养24h；(6)内生解淀粉芽孢杆菌13
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6种子液培养：将内生解淀粉芽孢杆菌13
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6单菌落接种至一级发酵种子培养基中，37℃培养24h；(7)内生解淀粉芽孢杆菌13
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6与热带芽孢杆菌10
‑1‑
1发酵液复合发酵：内生解淀粉芽孢杆菌13
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6一级种子液以1％～10％添加量接种至复合发酵培养基中进行发酵，所述复合发酵培养基含有经步骤(4)处理的热带芽孢杆菌10
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1发酵液，设置发酵温度30℃～40℃，溶氧20％以上％，pH5
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【专利技术属性】
技术研发人员：钱婷婷，张嘉恒，焦松，孔叶凯，卢贝贝，郑晓宇，王振元，龚晨辉，吴称玉，
申请(专利权)人：杭州佳嘉乐生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：