一种木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法技术

本发明专利技术属于石蜡切片技术领域，具体涉及一种木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法。本发明专利技术提供的木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法，依次包括以下步骤：固定、取样、脱水与预染色、二级透明、浸蜡、包埋、修块、粘固、切片、展片与粘片、脱蜡、复水、染色、脱水、透明。本发明专利技术的制备方法各步骤紧密配合，前后衔接，缩短制片时间的同时，还能够显著提高根系组织制片成功率，制作的切片完整、清晰、易于观察，能够有效解决现有技术中植物根系不同发育程度，且区域结构差异较大难以制片的技术难题。区域结构差异较大难以制片的技术难题。区域结构差异较大难以制片的技术难题。

【技术实现步骤摘要】
一种木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法


[0001]本专利技术属于石蜡切片
，具体涉及一种木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法。

技术介绍

[0002]根系是植物吸收水分、养分的重要器官，也是营养的合成器官，具有响应非生物信号和生物信号的能力。植物根系的结构与其生理功能密切相关，根系结构的改变会引起菌根共生、根系形态、根系力学、根系呼吸与分泌、固氮共生、资源吸收等一系列生理生化过程的变化，最终对植物的生长产生一定程度的影响。因此，植物根系细胞组织结构对于研究植物的适应性机制具有重要意义，同时能够为植物的种植和管理提供理论基础和实践指导。
[0003]一直以来，石蜡切片技术是研究植物细胞组织形态变化的常用技术。而植物根系不同发育程度区域结构差异较大，幼嫩组织含水量较高，结构脆弱，在进行制片时细胞结构易变形；成熟组织木质部发育相对发达，结构较紧密，在进行制片时容易浸蜡不足，导致制片失败，均不利于观察根系组织的微观结构。基于上述问题，本专利技术对传统石蜡切片技术进行改进，建立细胞结构完整的木本双子叶植物根系石蜡切片制作方法，能够有效解决植物根系不同发育程度，区域结构差异较大难以制片的问题，对于植物根系细胞结构的研究具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法，该方法对常规石蜡切片技术中的脱水、透明、浸蜡、切片、包埋等步骤进行综合改进。本专利技术的技术方案更容易操作、能够节省试验时间，显著提高根系组织制片成功率，制作的切片细胞组织完整清晰，便于开展不同发育程度植物根系细胞结构的深度研究。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一种木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法，依次包括以下步骤：固定、取样、脱水与预染色、二级透明、浸蜡、包埋、修块、粘固、切片、展片与粘片、脱蜡、复水、染色、脱水、透明；
[0007]所述固定、取样为：将木本双子叶植物根系置于甲醛
‑
冰醋酸
‑
乙醇溶液中进行固定，完成之后进行取样；
[0008]所述脱水与预染色为：对取样后的根系样品依次进行70％乙醇处理、85％乙醇+番红处理、90％乙醇处理、95％乙醇处理、100％乙醇处理、100％乙醇处理，完成脱水与预染色处理；所述85％乙醇+番红处理的时间为2h；所述番红在85％乙醇中的浓度为1g/100mL；
[0009]所述二级透明为：将脱水与预染色后的根系样品先用无水乙醇与二甲苯的混合液浸泡预处理，然后采用二甲苯浸泡，完成二级透明处理；混合液浸泡的时间为1h，采用二甲苯浸泡的次数为2次，每次浸泡的时间为1h；
[0010]所述浸蜡为：将二级透明后的根系样品先于混合蜡液中进行浸蜡处理，然后将混
合蜡液置换为蜂蜡
‑
石蜡混合液继续进行浸蜡处理；所述混合蜡液由二甲苯和石蜡屑组成；
[0011]所述包埋为：于包埋盒中先加入部分浸蜡过程中的蜂蜡
‑
石蜡混合液，在包埋盒表层的蜂蜡
‑
石蜡混合液未凝固时，加入包含根系样品在内的剩余的蜂蜡
‑
石蜡混合液，完成包埋处理；所述包埋盒的长、宽、高分别为3.8
‑
4.2cm、2.6
‑
3cm、0.3
‑
0.7cm，材质为硫酸纸；
[0012]所述粘固为：将修块好的根系样品黏附于切片底座上；所述切片底座具有空心圆柱的立体结构，空心圆柱的底面内径为1.8
‑
2.2cm，高度为0.5
‑
1.5cm；
[0013]所述切片为：对粘固后的根系样品进行切片处理，控制切片厚度与根系样品的根系发育程度相匹配；其中，根系样品为根尖组织区时，切片厚度为11
‑
13μm；根系样品为发育程度高的非根尖组织区时，切片厚度为15
‑
17μm；
[0014]所述脱蜡为：将展片与粘片后的根系样品浸泡于二甲苯中25min，然后再更换新的二甲苯继续浸泡10min；
[0015]所述复水为：对脱蜡后的根系样品采用不同浓度梯度的乙醇逐级进行复水处理；所述乙醇的梯度依次为100％、90％、80％、70％、50％。
[0016]进一步地，所述取样的长度为0.8
‑
1.2cm根段。
[0017]进一步地，所述脱水与预染色中，进行70％乙醇处理、90％乙醇处理、95％乙醇处理、100％乙醇处理、100％乙醇处理的时间均为40min。
[0018]进一步地，所述浸蜡的具体过程为，第一步将透明后的根系样品与体积比为1：1的二甲苯与石蜡屑的混合蜡液组成的混合物置于63
‑
65℃处理12h；第二步将混合蜡液置换为蜂蜡
‑
石蜡混合液，继续浸蜡60h；将混合蜡液置换为蜂蜡
‑
石蜡混合液进行浸蜡处理后，再采用蜂蜡
‑
石蜡混合液置换5次；所述蜂蜡
‑
石蜡混合液中，蜂蜡的含量为8wt％。
[0019]进一步地，所述包埋中，先加入的蜂蜡
‑
石蜡混合液的用量为完全覆盖包埋盒底部。
[0020]进一步地，所述复水中，采用不同浓度梯度的乙醇逐级进行复水处理，每级复水处理的时间为3min。
[0021]进一步地，所述展片与粘片为，将切片后所得根系样品的蜡带放在载玻片上，将载玻片置于展片台完成展片与粘片；所述展片与粘片的时间为50
‑
70min。
[0022]进一步地，所述染色，是将复水后的根系样品置于1％甲苯胺蓝水溶液进行染色；所述染色时间为3min。
[0023]进一步地，所述脱水为，将染色后的根系样品依次用50％乙醇处理、70％乙醇处理、80％乙醇处理、90％乙醇处理、100％乙醇处理、100％乙醇处理，每次处理的时间为3min；所述透明是将脱水后的根系样品浸泡于二甲苯中；所述二甲苯浸泡的时间为1min。
[0024]进一步地，制作的切片无需封片，直接进行显微观察。
[0025]本专利技术与现有技术相比，其有益效果为：
[0026]本专利技术提供的一种木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法，显著提高了制片的成功率，主要体现在以下几个方面：
[0027](1)增加了浸蜡时间，能够保证木质化程度较高的根系样品浸蜡时间充分，有效避免木质化程度较高的根系样品在切片时中柱组织从蜡带上脱离；
[0028](2)浸蜡采用蜂蜡
‑
石蜡混合液，其中蜂蜡能够有效降低蜡块硬度，有利于在修块、切片过程中得到相对平整的样品；
[0029](3)浸蜡后的样品，分两次加入包埋盒中，既可以避免出现蜡块分层现象，也能够有效增强根系细胞组织的硬度，利于后续切片操作；
[0030](4)增加预染色，能够使包埋阶段的样品在不透明的蜡块中显示出来，便于观察样品位置，有效避免修块过程中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种木本双子叶植物根系石蜡切片的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：固定、取样、脱水与预染色、二级透明、浸蜡、包埋、修块、粘固、切片、展片与粘片、脱蜡、复水、染色、脱水、透明；所述固定、取样为：将木本双子叶植物根系置于甲醛
‑
冰醋酸
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乙醇溶液中进行固定，完成之后进行取样；所述脱水与预染色为：对取样后的根系样品依次进行70％乙醇处理、85％乙醇+番红处理、90％乙醇处理、95％乙醇处理、100％乙醇处理、100％乙醇处理，完成脱水与预染色处理；所述85％乙醇+番红处理的时间为2h；所述番红在85％乙醇中的浓度为1g/100mL；所述二级透明为：将脱水与预染色后的根系样品先用无水乙醇与二甲苯的混合液浸泡预处理，然后采用二甲苯浸泡，完成二级透明处理；混合液浸泡的时间为1h，采用二甲苯浸泡的次数为2次，每次浸泡的时间为1h；所述浸蜡为：将二级透明后的根系样品先于混合蜡液中进行浸蜡处理，然后将混合蜡液置换为蜂蜡
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石蜡混合液继续进行浸蜡处理；所述混合蜡液由二甲苯和石蜡屑组成；所述包埋为：于包埋盒中先加入部分浸蜡过程中的蜂蜡
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石蜡混合液，在包埋盒表层的蜂蜡
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石蜡混合液未凝固时，加入包含根系样品在内的剩余的蜂蜡
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石蜡混合液，完成包埋处理；所述包埋盒的长、宽、高分别为3.8
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4.2cm、2.6
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3cm、0.3
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0.7cm，材质为硫酸纸；所述粘固为：将修块好的根系样品黏附于切片底座上；所述切片底座具有空心圆柱的立体结构，空心圆柱的底面内径为1.8
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2.2cm，高度为0.5
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1.5cm；所述切片为：对粘固后的根系样品进行切片处理，控制切片厚度与根系样品的根系发育程度相匹配；其中，根系样品为根尖组织区时，切片厚度为11
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13μm；根系样品为发育程度高的非根尖组织区时，切片厚度为15
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17μm；所述脱蜡为：将展片与粘片后的根系样品浸泡于二甲苯中25min，然后再更换新的二甲苯继续浸泡10min；所述复水为：对脱蜡后的根系样品采用不同浓度梯度的乙醇逐级进行复水处理；所述乙醇的梯度依次为100％、90％、80％、70％、50％...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文娆，贺梦月，惠雪，钱舒凡，王路伟，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：