腺苷、次黄嘌呤、亚精胺联合在制备诊断区分前列腺癌和前列腺增生的试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了腺苷、次黄嘌呤、亚精胺联合在制备诊断区分前列腺癌和前列腺增生的试剂盒中的应用。本发明专利技术发现，腺苷、次黄嘌呤和亚精胺中两个或三个联合对前列腺癌和前列腺增生具有较为优异的诊断区分效果，且明显优于单个对前列腺癌和前列腺增生的诊断区分效果。因此，腺苷、次黄嘌呤和亚精胺中两个或三个联合具有开发制备成诊断区分前列腺癌和前列腺增生的尿液检测试剂、试剂盒的前景。试剂盒的前景。试剂盒的前景。

【技术实现步骤摘要】
腺苷、次黄嘌呤、亚精胺联合在制备诊断区分前列腺癌和前列腺增生的试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于疾病检测诊断领域，具体涉及腺苷、次黄嘌呤、亚精胺联合在制备诊断区分前列腺癌和前列腺增生的试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌(Prostate cancer,PCa)是男性最常见的恶性肿瘤。近年来，随着人口老龄化和生活方式的改变，全球前列腺癌的发病率呈持续增长趋势。由于前列腺癌发病早期症状不明显，多数前列腺癌患者确诊时已发生局部进展或远处转移，导致预后较差。因此，依从性高的筛查手段对前列腺癌的早期诊断发现具有重要意义。
[0003]尿液富含多种代谢物，许多疾病可导致尿液内源代谢物含量水平的改变，该变化对于疾病的诊断具有重要的意义。近年来，随着代谢组学的迅速发展，揭示了多个尿液代谢物可作为肿瘤诊断的潜在标志物，成为寻找疾病诊断标志物的重要途径。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供腺苷、次黄嘌呤和亚精胺中两个或三个联合在制备诊断区分前列腺癌和前列腺增生的试剂、试剂盒中的应用。
[0005]本专利技术上述目的通过如下技术方案实现：
[0006]腺苷、次黄嘌呤和亚精胺中两个或三个联合在制备诊断区分前列腺癌和前列腺增生的尿液检测试剂、试剂盒中的应用。
[0007]一种诊断区分前列腺癌和前列腺增生的尿液检测试剂、试剂盒，含有检测腺苷、次黄嘌呤和亚精胺中两个或三个的试剂。
[0008]有益效果：
[0009]本专利技术发现，腺苷、次黄嘌呤和亚精胺中两个或三个联合对前列腺癌和前列腺增生具有较为优异的诊断区分效果，且明显优于单个对前列腺癌和前列腺增生的诊断区分效果。因此，腺苷、次黄嘌呤和亚精胺中两个或三个联合具有开发制备成诊断区分前列腺癌和前列腺增生的尿液检测试剂、试剂盒的前景。
附图说明
[0010]图1为训练集的前列腺癌与良性前列腺增生患者尿液中三种代谢物的含量差异；
[0011]图2为训练集中腺苷(adenosine)单独诊断区分前列腺癌与良性前列腺增生患者的ROC曲线和诊断阈值(cutoff)；
[0012]图3为训练集中次黄嘌呤(hypoxanthine)单独诊断区分前列腺癌与良性前列腺增生患者的ROC曲线和诊断阈值(cutoff)；
[0013]图4为训练集中亚精胺(spermidine)单独诊断区分前列腺癌与良性前列腺增生患者的ROC曲线和诊断阈值(cutoff)；
[0014]图5为训练集中腺苷和次黄嘌呤联合诊断区分前列腺癌与良性前列腺增生患者的ROC曲线和诊断阈值(cutoff)；
[0015]图6为训练集中次黄嘌呤和亚精胺联合诊断区分前列腺癌与良性前列腺增生患者的ROC曲线和诊断阈值(cutoff)；
[0016]图7为训练集中腺苷和亚精胺联合诊断区分前列腺癌与良性前列腺增生患者的ROC曲线和诊断阈值(cutoff)；
[0017]图8为训练集中三种代谢物联合诊断区分前列腺癌与良性前列腺增生患者的ROC曲线和诊断阈值(cutoff)；
具体实施方式
[0018]下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。
[0019]实施例1：对前列腺癌和良性前列腺增生的诊断区分效能
[0020]一、实验样本
[0021]临床样本来自江苏省中医院、东南大学附属中大医院两个中心共计36名患者(21例前列腺癌患者与15例前列腺增生患者)。随机分为训练集19名患者，验证集17名患者。
[0022]入组标准：前列腺癌患者为经病理组织确诊且未经放疗或化疗的前列腺癌病例；前列腺增生患者为经穿刺活检证实为良性病变的前列腺增生病例。
[0023]排除标准：
①
不符合前列腺癌与良性前列腺增生的相关诊断标准；
②
伴有其他前列腺疾病，如前列腺炎；
③
患者合并有其他严重肝、肾、心肺以及造血系统等疾病者。
[0024]二、实验方法
[0025]1、标准品、内标溶液及混合标准品溶液的配制
[0026]用十万分之一天平称取腺苷、次黄嘌呤、亚精胺、2
‑
氯腺苷、L
‑
亮氨酸
‑
13C6、D
‑
赖氨酸
‑
d4单盐酸盐、肌酐标准品各1mg，分别加入1ml超纯水溶液，涡旋混匀2min，配制成1mg/ml的母液。分别取三种尿液代谢物(腺苷、次黄嘌呤、亚精胺)标准品母液各100ul加入900ul超纯水，稀释10倍后得到100ug/ml稀释液，再稀释100倍得到1ug/ml单标溶液并精密吸取单标溶液上清70μL加入至进样小瓶中。内标溶液(2
‑
氯腺苷、D
‑
赖氨酸
‑
d4单盐酸盐、L
‑
亮氨酸
‑
13C6)则分别稀释10倍后配成100μg/mL的工作液。利用肌酐1mg/ml标准品母液配置一系列梯度浓度的标准品溶液。以上溶液均用于后续质谱分析使用。
[0027]分别吸取1mg/ml内标母液250ul、500ul、250ul，然后加入24ml超纯水配制成25ml内标
‑
超纯水混合液，供尿液样本处理时使用。
[0028]根据样品中待测成分的浓度范围配制混合标准品溶液，精确吸取腺苷100ug/ul的母液、10ul、次黄嘌呤1mg/ul的母液50ul、亚精胺100ug/ul的母液25ul、肌酐20mg/ml的母液100ul，加入超纯水815ul，得到1ml混合标准品储液。分别吸取混合标准品储备液500ul、250ul、125ul、62.5ul、31.25ul、15.625ul、7.8125ul、3.90625ul，和超纯水混合，配制成500ug/ml、250ug/ml、125ug/ml、62ug/ml、31.25ug/ml、15.625ug/ml、7.8125ug/ml、3.90625ug/ml的标准溶液，分别吸取70ul到进样小瓶中，形成一系列浓度梯度的混合标准品溶液。测定条件与样品的检测条件完全相同，均加入内标物，采用内标法定量。
[0029]2、尿液靶向代谢组学样品前处理
[0030]取尿液样品在4℃下解冻，融化后需要在4℃、13000rpm条件下离心10min，从每个待测样品中提取20uL合并成QC样品，用于质检和仪器平衡。离心后从各样品上清液取150ul到1.5ml离心管中，加入内标
‑
超纯水混合液150ul稀释，涡旋混匀，13000rpm和4℃离心10min，经0.22um滤膜过滤后，精密吸取70ul到进样小瓶中待检测。
[0031]3、腺苷、次黄嘌呤、亚精胺的高效液相色谱含量测定
[0032]经处理的样本采用安捷伦超高效液相色谱串联安捷伦三重四极杆飞行时间质谱联用仪(Agilent,USA)，分别检测腺苷、次黄本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.腺苷、次黄嘌呤和亚精胺中两个或三个联合在制备诊断区分前列腺癌和前列腺增生的尿液检测试剂、试剂盒中的应用。2.一种诊断区...

【专利技术属性】
技术研发人员：马高祥，吕浩，宫航，范袁铭，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：