一种玫瑰精油含量分子标记B38在预测高精油含量的玫瑰品种中的应用制造技术

本发明专利技术涉及玫瑰精油含量分子标记B38在预测高精油含量的玫瑰品种中的应用，玫瑰精油含量分子标记B38，该标记的引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种玫瑰精油含量分子标记B38在预测高精油含量的玫瑰品种中的应用


[0001]本专利技术涉及玫瑰精油含量分子标记B38在预测高精油含量的玫瑰品种中的应用，属于植物分子育种领域。

技术介绍

[0002]玫瑰(Rosa rugosa)是一种多年生落叶灌木，属于蔷薇科蔷薇属，是一种重要的观赏和经济植物，由其杂交产生的芳香玫瑰谱系，其鲜花可提取精油具有很高的经济和保健价值，被称为“液体黄金”。精油用玫瑰主要种植在中国、法国、俄罗斯、保加利亚目等国家，中国主要种植地区是山东、甘肃和云南。
[0003]目前，油用玫瑰主栽品种仅仅四五个品种，出油率较低，仅0.3％，而新品种玫瑰随着杂交育种和自然突变，已经积累了约50个品种，这些品种尚未进行种植推广，难以按照传统方式就行精油提取进而测定含油率，导致缺乏出油率鉴定，限制了高精油含量的玫瑰良种开发。
[0004]山东平阴县被誉为玫瑰之乡，平阴玫瑰列为精油玫瑰的“中国地理标志品种”。对平阴玫瑰19个不同品种、变种进行的B38标记分析发现，其重复次数和精油出油率显著正相关，B38分型能够鉴区分高精油含量的玫瑰品种。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对精油用玫瑰分子育种工具的不足，提供一种玫瑰精油含量分子标记B38在预测高精油含量的玫瑰品种中的应用。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]一种玫瑰精油含量分子标记B38在预测高精油含量的玫瑰品种中的应用。
[0008]应用具体方法为：
[0009]步骤1)、待预测的玫瑰品种的DNA提取；
[0010]步骤2)、PCR扩增：以DNA为模板和标记引物进行B38标记扩增；
[0011]步骤3)、B38标记分型：通过DNA测序或聚丙烯凝胶电泳方式，检测B38元件重复数；
[0012]步骤4)、高精油含量玫瑰预测：B38元件重复数大于5的玫瑰品种预测为高精油含量玫瑰，特别地，优选重复数最大的品种为最高精油含量玫瑰。
[0013]步骤2)中，PCR扩增所用的引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示；
[0014]SEQ ID NO.1：5
’‑
TTTGCAAGAAACTAATGC
‑3’
[0015]SEQ ID NO.2：5
’‑
CAGTTACGAATTATTACAA
‑3’
。
[0016]通过本专利技术，开发了用于鉴定出油率高低的分子标记B38，不依赖玫瑰大面积种植(3年童期后开花)，直接对苗期DNA进行良种选育，省时省力，且在蔷薇属保守，可以在更大范围(整个芳香玫瑰谱系)用于高精油品种选育，具有重要的育种应用价值。
[0017]本专利技术中，B38重复次数和玫瑰精油含量正相关，B38的引物序列的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1所示，通过该引物对未知玫瑰品种的DNA进行扩增，测定B38重复次数，能够预测该品种是否为高精油产量的品种，在精油玫瑰早期新选育方面有重要应用价值。
[0018]有益效果：本专利技术提供的分子标记B38，直接对玫瑰苗期DNA进行良种选育，不依赖玫瑰大面积种植和精油提取，省时省力，是一种早期选育的分子工具。
附图说明
[0019]图1是19个玫瑰精油产量统计图；
[0020]图2是精油产量和B38标记分型相关性分析散点图。
具体实施方式
[0021]以下结合附图以及附图说明对本专利技术作进一步详细说明。
[0022]1、水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油；
[0023](1)提取原料：玫瑰品种种植于山东省平阴玫瑰研究所玫瑰种质资源苗圃(116.457676
°
E，36.288978
°
N)，露天栽培，定植后3年开始开花，可用于取样。在5月
‑
7月的清晨6点前(日出前)采摘鲜花500g。用于精油提取的19个玫瑰品种如下表。
[0024]表1玫瑰品种列表
[0025][0026][0027](2)提取步骤：
[0028]鲜花和去离子水(花水比为1:4)240℃蒸馏0.5h，180℃蒸馏1.5h后得到玫瑰精油：将采摘来的花瓣称重至500g，加入2L去离子水混合放入烧瓶，并放置于电热套上，再将蒸馏装置安装完成后，在挥发性油测定器中提前加入其三分之二体积的水，以便于观察精油。在水花混合物沸腾之前(约0.5h)温度设置为240℃，加热至挥发性油测定器的冷凝管有水滴滴下时，直待水沸腾后温度调为180℃，蒸馏过程持续2
‑
3h，停止加热，冷却至室温后，通过油水分离器，采集沉降在水层上的挥发油层，测定重量。
[0029]2、精油成分测定和出油率计算；
[0030]精油是由于上百种芳香物质组成的复杂混合物，且不同品种来源的精油间成分组成差异较大，笼统计算出油率不适合直接比较。故选择精油的主要芳香成分香叶醇、橙花醇和香茅醇(所有精油都含有)的总和为统一标志物，计算出油率。
[0031](1)GC
‑
MS测定精油芳香成分；
[0032]吸取2μL玫瑰精油溶解到498μL正己烷中，添加过量无水硫酸钠(至少0.7g)除去水分，取50μL加入到进样瓶中，同时取50μL的0.0625
‰3‑
壬酮内标液到进样瓶。利用trace ISQ气相色谱
‑
质谱联用仪器进行自动进样，使用色谱柱型号为(ECONO
‑
CAP，EC
‑
1000，Alltech Corporation，Lexington，KY，USA)，氦流速为1.00mL/min，程序如下：50℃ 1min(初始温度)，以10℃/min的速度增加到140℃，持续5min，最后以4℃/min的速度增加到210℃，持续15min。然后以100:1的分离比和240℃的进样温度注入1μL样品。质谱电离温度，200℃；自动扫描50
‑
550amu。电子能是70eV。基于NIST17 MS数据库的定性分析和基于内标归一化峰面积的定量分析。利用Xcalibur软件在NIST 17MS数据库和Wiley library两个质谱库的定性分析。每个样品进行3次测定。
[0033](2)出油率计算；
[0034]基于内标归一化峰面积的定量分析计算出香叶醇、橙花醇和香茅醇的相对含量，出油率计算公式如下：出油率＝精油质量(μg)*三种标志物相对含量(％)/鲜花重(g)。
[0035]结果如图1，在19个品种玫瑰中，平阴重瓣白玫瑰、香水玫瑰、丰花玫瑰、平阴重瓣红玫瑰出油率超过了0.3μg/g，出油率最高的平阴重瓣白玫瑰0.4162μg/g，出油率最低的玫瑰品种是荼薇玫瑰，仅有0.0346μg/g，其他品种如大马士革玫瑰、大马士革白玫瑰、保加利亚玫瑰、西胡1号、西胡2号、西胡3号、平阴11号、粉色半重瓣玫瑰等玫瑰品种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种玫瑰精油含量分子标记B38在预测高精油含量的玫瑰品种中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征是，应用具体方法为：步骤1）、待预测的玫瑰品种的DNA提取；步骤2）、PCR扩增：以DNA为模板和标记引物进行B38标记扩增；步骤3）、B38标记分型：通过DNA测序或聚丙烯凝胶电泳方式，检测B38元件重复数；步骤4）、高精油含量玫瑰预测：B38元件重复数大于5的玫瑰品种预测为高精油含量玫瑰，特别地，优选重复数最大的品种为最高...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建文，冯立国，徐勇，魏国，梁悦，王楠，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：