一株成都肠杆菌D3及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株成都肠杆菌D3及其应用，涉及微生物技术领域。所述成都肠杆菌D3，于2023年3月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.26871，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Enterobacter chengduensis。本发明专利技术成都肠杆菌D3对对香豆酸、阿魏酸、香草酸、对羟基苯甲酸均有很好的降解效果，以对香豆酸、阿魏酸更为显著，可以消减由上述物质引起的植物连作障碍。由上述物质引起的植物连作障碍。由上述物质引起的植物连作障碍。

【技术实现步骤摘要】
一株成都肠杆菌D3及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，更具体的说是涉及一株成都肠杆菌D3及其应用。

技术介绍

[0002]紫花苜蓿是多年生豆科、苜蓿属植物，主要作为牲畜的口粮及蛋白饲料。但随着苜蓿种植面积的不断扩大，连作4年以上的地块苜蓿生产能力逐年下降、根系活力渐渐衰退、种子发芽率严重降低、根腐病发生严重、补播或重播难以成活。本研究前期研究发现对香豆酸是苜蓿连作障碍产生的最重要的自毒物质之一，在生理水平上，当对香豆酸积累到一定程度，幼苗体内超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性以及可溶性糖和α
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淀粉酶含量降低，丙二醛含量升高，促进类激素与脱落酸的比值以及叶绿素含量均降低；转录组学和代谢组学联合分析表明，胁迫初期，植物主要通过调节ABC转运蛋白和黄酮类物质的生物合成来响应对香豆酸胁迫；此外，对香豆酸积累还会使中苜1号根际土壤的主要养分碱解氮、速效磷、速效钾的含量、主要酶多酚氧化酶、蔗糖酶、中性磷酸酶的活性以及有益微生物中慢生根瘤菌的相对丰度降低。进一步研究发现，对香豆酸对玉米、大豆和水稻的化感作用比对紫花苜蓿的强；同时，对香豆酸对玉米茎基腐病的病原菌禾谷镰孢的菌丝生长、孢子萌发和产生，对大豆根腐病和水稻立枯病的病原菌尖镰孢的孢子萌发和产生均表现出了一定程度的促进作用，且随着浓度的增加促进作用加强，同时对香豆酸还能促进病原菌定殖，进而危害作物生长。因此，在北方寒地不适宜采用苜蓿
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玉米/大豆/水稻轮作模式缓解因自毒作用而引起的连作障碍。
[0003]因此，如何消减对香豆酸造成的紫花苜蓿连作障碍是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了一种成都肠杆菌D3及其应用，以缓解作物连作障碍。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一株成都肠杆菌D3，所述成都肠杆菌D3，于2023年3月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26871，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Enterobacter chengduensis。
[0007]本专利技术的又一目的是，提供上述成都肠杆菌D3的应用。
[0008]作为优选的技术方案，所述成都肠杆菌D3的降解条件为pH7，温度25℃。
[0009]作为优选的技术方案，所述应用为降解对香豆酸、阿魏酸、香草酸和对羟基苯甲酸中的一种或多种。
[0010]更优选的，所述应用为降解对香豆酸和阿魏酸中的一种或多种。
[0011]作为优选的技术方案，所述应用为缓解由对香豆酸、阿魏酸、香草酸和对羟基苯甲酸中的一种或多种物质引起的植物连作障碍。
[0012]作为优选的技术方案，所述植物为紫花苜蓿、玉米、大豆、水稻。
[0013]更优选的，所述植物为紫花苜蓿。
[0014]本专利技术的又一目的是，提供一种消减对香豆酸和/或阿魏酸和/或香草酸和/或对羟基苯甲酸的菌剂，包含上述成都肠杆菌D3。
[0015]本专利技术的又一目的是，提供一种缓解对香豆酸和/或阿魏酸和/或香草酸和/或对羟基苯甲酸引起的连作障碍的菌剂，包含上述成都肠杆菌D3。
[0016]经由上述的技术方案可知，本专利技术公开提供了一株成都肠杆菌D3及其应用。成都肠杆菌D3对对香豆酸、阿魏酸、香草酸、对羟基苯甲酸均有很好的降解效果，以对香豆酸、阿魏酸更为显著，可以消减由上述物质引起的植物连作障碍。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0018]图1为本专利技术成都肠杆菌D3的菌落图片。
[0019]图2为利用邻接法基于gyrB基因构建成都肠杆菌D3的系统发育树。
[0020]图3为成都肠杆菌D3在液体培养基中的生长曲线和降解曲线。
[0021]图4为成都肠杆菌D3在土壤中的生长曲线和降解曲线。
[0022]图5为不同培养条件下成都肠杆菌D3的生长曲线和对对香豆酸的降解速率。
[0023]图6为成都肠杆菌D3降解对香豆酸的降解产物的成分分析。
[0024]图7为成都肠杆菌D3及其降解产物对中苜1号的影响，其中A为对照，B为对香豆酸，C为D3，D为对香豆酸+D3。
[0025]图8为外源接种对香豆酸、成都肠杆菌D3及(对香豆酸+D3)对中苜1号幼苗生理的影响。
[0026]图9为外源接种对香豆酸、成都肠杆菌D3及(对香豆酸+D3)对中苜1号根际土壤酶活力的影响。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实施例1成都肠杆菌D3的分离筛选、鉴定及保藏
[0029](1)分离
[0030]称取10g连作14年的苜蓿根际土壤放入装有100mL无菌水的锥形瓶(250mL)中，30℃、180rpm下振荡培养30min，静置，所得上清液即为土壤浸出液。在装有45mL LB培养基的锥形瓶(100mL)中加入5mL土壤浸出液，且这50mL溶液中对香豆酸浓度为100mg/L，30℃、180rpm振荡培养72h。取5mL LB培养的菌液转移至装有45mL LB培养基的新锥形瓶中(含对香豆酸100mg/L)，30℃，180rpm振荡培养，每隔72h重复一次，重复三次后将菌液用无菌的
NaCl溶液(0.85％)稀释105‑
106倍，然后在含有100mg/L对香豆酸的固体LB培养基上用涂布法涂布，30℃培养。取单菌落纯化3次，转移至试管中，4℃保存。
[0031](2)鉴定
[0032]A生理生化鉴定：
[0033]形态特征：将分离所得D3菌株接种于LB培养基中，振荡培养24h，将所得菌悬液稀释105‑
106倍，取15μl用涂布器均匀的涂于PDA平板上，培养条件为恒温30℃，培养时间为2
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3d，观察其单个菌落的形态特征。D3单菌落呈乳白色、不透明黏稠状且其边缘光滑(参见附图1)
[0034]革兰氏染色：将D3菌株分别用结晶紫染液和番红复染液染色，经过水洗干燥后，观察颜色变化。结果显示D3为革兰氏阴性菌。
[0035]生理生化指标：接触酶试验，需氧性测定，V
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P测定，甲基红(M.R.)试验，明胶液化试验，硝酸盐还原试验，H2S试验，肌醇、纤维二糖、5％乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、木糖、麦芽糖、鼠李糖和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株成都肠杆菌D3，其特征在于，所述成都肠杆菌D3，于2023年3月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.26871，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Enterobacterchengduensis。2.权利要求1所述成都肠杆菌D3的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述成都肠杆菌D3的降解条件为pH7，温度25℃。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用为降解对香豆酸、阿魏酸、香草酸和对羟基苯甲酸中的一种或多种。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用为降解对...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永刚，刘金鑫，姜婉怡，张雪，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：