虹彩病毒DNA疫苗制造技术

本发明专利技术提供虹彩病毒DNA疫苗。本发明专利技术以溶酶体相关膜蛋白LAMP1基因为基础，利用虹彩病毒粒子的主要衣壳蛋白MCP基因对LAMP1基因进行改造，得到核苷酸序列如SEQ ID：1或SEQ ID：2所示的DNA分子，这两种DNA分子能够高效转录并表达相关抗原，并且具有免疫原性，能够诱导特定的体液免疫和/或细胞免疫应答，能够应用于虹彩病毒DNA疫苗的制备中，所制得的疫苗对虹彩病毒具有良好的防治效果，从而实现对感染虹彩病毒的机体的有效保护。彩病毒的机体的有效保护。彩病毒的机体的有效保护。

【技术实现步骤摘要】
虹彩病毒DNA疫苗


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及虹彩病毒DNA疫苗。

技术介绍

[0002]随着水产养殖品种的增多和养殖规模的扩大，养殖环境日益恶化，各种传染性疾病也不断暴发和流行，给水产养殖造成了巨大的经济损失，已成为制约水产养殖业健康持续发展的主要瓶颈。
[0003]虹彩病毒(Iridovirus)是一类能够在宿主细胞质形成包涵体的正二十面体双链DNA病毒，直径为125～380nm，基因组大小为140～303kb，因其病毒粒子在病毒感染的宿主体内或在纯化浓缩的病毒沉淀物中呈周期性间隔的异常整齐排列，形成晶格平面并互相重叠，当有斜射光线照射时呈现蓝色或紫色虹彩，故命名为虹彩病毒。虹彩病毒分为2个亚科5个属，即感染鱼类、两栖类和爬行动物的虹彩病毒α亚科，包括蛙病毒属、肿大细胞病毒属、淋巴囊肿病毒属，以及感染无脊椎动物的虹彩病毒β亚科，包括虹彩病毒属和绿虹彩病毒属。虹彩病毒是目前海水和淡水养殖鱼类最严重的病毒性病原之一，不仅严重威胁鱼类的多样性和生态安全，而且给水产养殖业造成重大经济损失。因此，如何防治虹彩病毒已成为当今水产养殖业急需解决的问题。
[0004]疫苗作为化学药品和抗生素的替代品，是防治病毒蔓延的有效手段。疫苗主要包括灭活疫苗、DNA疫苗和减毒疫苗三大类。DNA疫苗因其具有许多优于传统抗原疫苗的优点而受到了广泛关注。DNA疫苗是指将编码目的基因的片段连接在质粒载体上以得到重组DNA质粒，该重组DNA质粒能够在宿主体内进行表达产生抗原蛋白并诱导机体产生免疫应答进而达到保护机体免受病原侵害的目的。
[0005]针对虹彩病毒，目前已经开发出全病毒灭活疫苗和DNA疫苗。全病毒灭活疫苗的制备过程中需要进行细胞培养、病毒扩增，对细胞培养技术、设备使用及培养基、材料如血清等消耗要求增加，并且在制备全病毒灭活疫苗过程中可能存在病毒抗原丢失、抗原结构被破坏而造成免疫效果不稳定的情况，进而导致全病毒灭活疫苗的免疫效果有所下降。而现有的虹彩病毒DNA疫苗则主要是利用虹彩病毒粒子的主要结构蛋白——主要衣壳蛋白(Major Capsid Protein，MCP)基因与质粒进行连接后得到重组表达质粒，将该重组表达质粒导入到机体中能够高效转录并表达相关抗原，能够诱导特定的体液免疫和/或细胞免疫应答，从而使得机体对虹彩病毒具有一定的免疫效果，但是，这种虹彩病毒DNA疫苗的防治效果不佳，无法满足水产养殖业对虹彩病毒防治的需求。因此，急需研发一种对虹彩病毒具有优异的防治效果的疫苗。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供虹彩病毒DNA疫苗，本专利技术以溶酶体相关膜蛋白LAMP1基因为基础，利用虹彩病毒粒子的主要衣壳蛋白MCP基因对LAMP1基因进行改造，得到核苷酸序列如SEQ ID：1或SEQ ID：2所示的DNA分子，这两种DNA分子能够高效转录并表达相关抗原，并且具有
免疫原性，应用于虹彩病毒DNA疫苗的制备中，对虹彩病毒具有良好的防治效果。
[0007]根据本专利技术提供的第一个方面，提供一种DNA分子，该DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID：1或SEQ ID：2所示。
[0008]溶酶体相关膜蛋白LAMP1包括信号肽、Luminal结构域、跨膜区域+胞内区域，本专利技术以LAMP1基因为基础，利用虹彩病毒粒子的主要衣壳蛋白MCP基因对LAMP1基因进行改造，得到核苷酸序列如SEQ ID：1或SEQ ID：2所示的DNA分子，其中，核苷酸序列如SEQ ID：1所示的DNA分子是在LAMP1基因的跨膜区域和胞内区域后面连接MCP基因后得到的，核苷酸序列如SEQID：2所示的DNA分子则是利用MCP基因替换编码LAMP1的Luminal结构域的基因得到的，上述这两种DNA分子能够高效转录并表达相关抗原，并且具有免疫原性，能够诱导特定的体液免疫和/或细胞免疫应答，并可应用于虹彩病毒DNA疫苗的制备中，对虹彩病毒具有良好的防治效果。
[0009]根据本专利技术的第二个方面，提供一种重组表达载体，该重组表达载体含有上述DNA分子。
[0010]将本专利技术提供的核苷酸序列如SEQ ID：1或SEQ ID：2所示的DNA分子应用于重组表达载体的构建中，含有该DNA分子的重组表达载体能够直接接种至机体中，可诱导机体产生特定的体液免疫和/或细胞免疫应答，对虹彩病毒具有良好的防治效果，提高机体对虹彩病毒的免疫保护效果，从而实现对机体的有效保护。
[0011]优选地，上述重组表达载体为含有上述DNA分子的质粒。
[0012]优选地，质粒为pcDNA3.1
‑
3HA。
[0013]优选地，上述重组表达载体的核苷酸序列如SEQ ID：3或SEQ ID：4所示。
[0014]利用本专利技术提供的核苷酸序列如SEQ ID：1或SEQ ID：2所示的DNA分子与质粒pcDNA3.1
‑
3HA构建得到的重组表达载体能够直接接种到机体中，这两种DNA分子均能够在机体体内高效转录并表达相关抗原，并且具有免疫原性，能够诱导特定的体液免疫和/或细胞免疫应答，能够大大提高机体对虹彩病毒的抵抗力，从而达到对感染虹彩病毒的机体进行有效保护的目的。
[0015]根据本专利技术的第三个方面，提供上述重组表达载体在制备虹彩病毒疫苗中的应用。
[0016]将本专利技术提供的含有SEQ ID：1或SEQ ID：2所示的DNA分子的重组表达载体应用于虹彩病毒疫苗的制备中，将制得的疫苗对机体进行接种免疫后能够大大降低感染虹彩病毒的机体的死亡率，从而实现对感染虹彩病毒的机体的有效保护。
[0017]优选地，虹彩病毒为石斑鱼虹彩病毒。
[0018]根据本专利技术的第四个方面，提供一种虹彩病毒疫苗，该虹彩病毒疫苗包括上述重组表达载体。
[0019]优选地，上述虹彩病毒疫苗还包括药学上可接受的佐剂。
[0020]优选地，虹彩病毒疫苗为石斑鱼虹彩病毒疫苗。
附图说明
[0021]图1为实施例1通过PCR技术扩增得到的SGIV
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MCP、Ec
‑
LAMP1、LAMCP和MLAMP的结构示意图。
[0022]S表示信号肽，L表示Luminal结构域，T+C表示跨膜区域+胞内区域。
[0023]图2为实施例1提供的重组表达载体的构建示意图。
[0024]图3为实施例2采用琼脂糖凝胶核酸电泳对重组表达载体进行验证的实验结果图。
[0025]图4为实施例3采用Western blot对重组表达载体的表达情况进行验证的实验结果图。
[0026]图5为实施例4提供的接种不同的DNA疫苗(重组表达载体)的石斑鱼对SGIV的免疫效果图。
具体实施方式
[0027]下面结合具体实施方式对本专利技术提供的技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA分子，其特征在于：所述DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID：1或SEQ ID：2所示。2.一种重组表达载体，其特征在于：含有如权利要求1所述DNA分子。3.如权利要求2所述重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为含有所述DNA分子的质粒。4.如权利要求3所述重组表达载体，其特征在于：所述质粒为pcDNA3.1
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3HA。5.如权利要求4所述重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体的核苷酸序列如SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏世娜，徐穗锋，秦启伟，魏京广，王钥萱，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：