一种桦褐孔菌粗、纯多糖及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种桦褐孔菌粗、纯多糖及其制备方法与应用，属于桦褐孔菌多糖技术领域。本发明专利技术以桦褐孔菌为原料，针对性的设计了该原料液态发酵的培养基和培养条件，能够显著提高桦褐孔菌发酵过程中多糖含量的积累，直接以含有培养基的液态发酵产物作为多糖提取原料，提高了提取效率，而且针对性的设计了提取纯化方法，进一步提高了桦褐孔菌多糖物质的得率。经本发明专利技术方法制备所得的桦褐孔菌粗多糖和纯多糖具有强抗氧化性和降血糖作用，具有显著抑制癌细胞增殖的作用。癌细胞增殖的作用。癌细胞增殖的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种桦褐孔菌粗、纯多糖及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于桦褐孔菌多糖
，尤其涉及一种桦褐孔菌粗、纯多糖及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]桦褐孔菌属担子菌亚门、层菌纲、锈革孔菌目、锈革菌科、褐卧孔菌属，又名斜纤孔菌、斜生纤孔菌、桦癌孔菌、白桦茸、茶卡和蔷甘等。桦褐孔菌作为一种珍贵药用真菌，因具有调节血糖血脂、抗肿瘤、抗氧化、调节、抗炎、保肝、调节免疫等作用，逐渐引起越来越多国内学者的关注。桦褐孔菌主要分布在北半球北纬40
°
～50
°
的地区，如北美(北部)、芬兰、波兰、俄罗斯、日本等国家和地区。在我国，桦褐孔菌主要分布在位于黑龙江、吉林和内蒙古自治区的大兴安岭、小兴安岭和长白山地区。根据戴玉成和范宇光的调查，桦褐孔菌在我国属于稀有和濒危类型。桦褐孔菌的野生资源匮乏，人工栽培虽有成功报道，但尚未实现规模化生产。
[0003]桦褐孔菌多糖具有抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂、抗病毒、抗炎等多重药理作用。桦褐孔菌野生型子实体主要生长于高寒地区桦树的树皮上，生长周期缓慢，导致子实体产量受限。但通过液体发酵技术获得的桦褐孔菌菌丝体与子实体相比，在生产周期、产量及成本方面具有显著优势。但目前已有的文献中进行食药用菌发酵产物多糖提取时，均需将发酵产物中的菌丝分离出来，然后进行干燥粉碎，再加入一定量的水进行提取，提取效率较低，而若直接采用发酵产物进行多糖提取，则由于发酵产物中所存在的物质种类复杂，如同时含有培养基、食用菌等，无疑会增加多糖产物纯化的难度。本领域目前尚未有关于如何快速获得高得率桦褐孔菌多糖的相关报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种提取效率高且多糖物质得率高的桦褐孔菌粗、纯多糖的制备方法。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种桦褐孔菌粗多糖的制备方法，包括如下步骤：将桦褐孔菌进行液态发酵，得发酵液；将发酵液均质后，200W
‑
300W超声波提取10min
‑
25min，醇沉，得桦褐孔菌粗多糖。
[0007]优选的，所述液态发酵所用的培养基包括麦芽糖15g/L、葡萄糖15g/L、豆粉0.6g/L
‑
1.5g/L、酵母膏1.5g/L
‑
2.0g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.25g/L、维生素B110mg/L，初始pH值为6
‑
9。
[0008]优选的，所述液态发酵的温度为20℃
‑
35℃，所述液态发酵的时间为9d
‑
15d。
[0009]优选的，进行液态发酵时，桦褐孔菌的接种量以液态发酵培养基的重量计为10％
‑
40％。
[0010]本专利技术还提供了一种上述任意一项所述制备方法制备所得的桦褐孔菌粗多糖。
[0011]本专利技术还提供了一种桦褐孔菌纯多糖的制备方法，包括如下步骤：采用蛋白酶酶解上述桦褐孔菌粗多糖，然后将粗多糖溶液与Sevage试剂混合，收集上层水相，加入石油醚，收集下层水相，采用大孔树脂层析，收集液体，截留3000Da以上的组分，得桦褐孔菌纯多糖。
[0012]优选的，所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶中的一种或两种。
[0013]优选的，所述粗多糖溶液与Sevage试剂的体积比为3:1。
[0014]本专利技术还提供了一种上述任意一项所述制备方法制备所得的桦褐孔菌纯多糖。
[0015]本专利技术还提供了上述桦褐孔菌粗多糖或上述桦褐孔菌纯多糖在制备抗氧化、降血糖或抑制癌细胞增殖产品中的应用。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]本专利技术以采自山西吕梁山脉的关帝山(北纬37.5
°
，东经111.2
°
)的桦褐孔菌为原料，针对性的设计了该原料液态发酵的培养基和培养条件，能够显著提高桦褐孔菌发酵过程中多糖含量的积累，直接以含有培养基的液态发酵产物作为多糖提取原料，提高了提取效率，而且针对性的设计了提取纯化方法，进一步提高了桦褐孔菌多糖物质的得率。
[0018]经本专利技术方法制备所得的桦褐孔菌粗多糖和纯多糖具有强抗氧化性和降血糖作用，具有显著抑制癌细胞增殖的作用。
附图说明
[0019]图1为液态发酵不同接种量对多糖含量的影响；
[0020]图2为液态发酵培养基不同碳源对多糖含量的影响；
[0021]图3为液态发酵培养基不同氮源对多糖含量的影响；
[0022]图4为不同液态发酵温度对多糖含量的影响；
[0023]图5为不同液态发酵初始pH值对多糖含量的影响；
[0024]图6为不同液态发酵时间对多糖含量的影响；
[0025]图7为不同提取物质所得的多糖含量；
[0026]图8为不同提取方式对多糖含量的影响；
[0027]图9为超声波提取功率对多糖含量的影响；
[0028]图10为超声波提取时间对多糖含量的影响；
[0029]图11为不同蛋白酶酶解的水解度结果；
[0030]图12为不同浓度桦褐孔菌粗多糖和桦褐孔菌纯多糖对DPPH自由基的清除能力；
[0031]图13为不同浓度桦褐孔菌粗多糖和桦褐孔菌纯多糖对α
‑
葡萄糖苷酶的抑制效果；
[0032]图14为不同组别体内降血糖效果。
具体实施方式
[0033]本专利技术提供了一种桦褐孔菌粗多糖的制备方法，包括如下步骤：将桦褐孔菌进行液态发酵，得发酵液；将发酵液均质后，200W
‑
300W超声波提取10min
‑
25min，醇沉，得桦褐孔菌粗多糖。
[0034]本专利技术所述桦褐孔菌优选的为采自山西吕梁山脉关帝山(北纬37.5
°
，东经
111.2
°
)的桦褐孔菌(后续称之为山西桦褐孔菌)，标本编号IOSF373816，现保存在山西农业大学山西功能食品研究院。在本专利技术中，进行液态发酵前，优选的需进行菌种活化，所述菌种活化的方法优选的为将山西桦褐孔菌菌种转接至含有固体培养基的培养皿中，在24℃下暗培养20天，固体培养基的配方优选的为马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂粉20g/L，磷酸二氢钾1g/L，维生素B110mg/L。固体培养基培养结束后，挑取已培养好的带培养基的菌丝置于液体培养基中，25℃、摇床转速120r/min、避光培养12天，作为菌种备用，所述液体培养基优选的为葡萄糖30g/L，蛋白胨6g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.25g/L，维生素B110mg/L。
[0035]菌种活化后，进行液态发酵，在本专利技术中，所述液态发酵所用的培养基优选的包括麦芽糖15g/L、葡萄糖15g/L、豆粉0.6g/L
‑
1.5g/L、酵母膏1.5g/L
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种桦褐孔菌粗多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将桦褐孔菌进行液态发酵，得发酵液；将发酵液均质后，200W
‑
300W超声波提取10min
‑
25min，醇沉，得桦褐孔菌粗多糖。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述液态发酵所用的培养基包括麦芽糖15g/L、葡萄糖15g/L、豆粉0.6g/L
‑
1.5g/L、酵母膏1.5g/L
‑
2.0g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.25g/L、维生素B110mg/L，初始pH值为6
‑
9。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述液态发酵的温度为20℃
‑
35℃，所述液态发酵的时间为9d
‑
15d。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，进行液态发酵时，桦褐孔菌的接种量以液态发...

【专利技术属性】
技术研发人员：李艳婷，郭尚，徐莉娜，郭霄飞，郭伟伟，
申请(专利权)人：山西农业大学山西功能食品研究院，
类型：发明
国别省市：