一种抗胃蛋白酶原II的单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种抗胃蛋白酶原II的单克隆抗体及其制备方法和应用，其中，抗胃蛋白酶原II的单克隆抗体为抗体3G10；抗体3G10的氨基酸序列为：VH CDR1

【技术实现步骤摘要】
一种抗胃蛋白酶原II的单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及抗体及体外检测领域。具体而言，本专利技术涉及一种抗胃蛋白酶原II的抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胃蛋白酶原(pepsinogen)是由泌酸腺的主细胞合成，在胃腔内经盐酸(HCl)或已有活性的胃蛋白酶(pepsin)作用变成胃蛋白酶，将蛋白质分解成膘、胨及少量多肽。该酶作用的最适pH为2，进入小肠后，酶活性丧失。
[0003]胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体，根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群，1
‑
5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I(PGI)，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原II(PGII)，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原II。
[0004]血清胃蛋白酶原水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能：PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多PGI升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低；PGII与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此，联合测定PGI和PGII比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。
[0005]PGI和PGII血清浓度在各胃部疾病中均有不同程度的改变，但是目前国内对于PGII抗体的研究中，单克隆抗体的数量较少，可用于检测人血清中PGII浓度的抗体适配性较差。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供高亲和力和高特异性的抗人胃蛋白酶原II的单克隆抗体，为具有优良性质的鼠源抗体，其能够特异性识别和结合人血清中的胃蛋白酶原II。
[0007]一方面，本专利技术提供一种抗胃蛋白酶原II单克隆抗体，包括：抗体1A7和/或抗体3G10；
[0008]其中，抗体1A7的氨基酸序列为：VH CDR1如SEQ ID NO.2所示；VH CDR2如SEQ ID NO.3所示；VH CDR3如SEQ ID NO.4所示；VL CDR1如SEQ ID NO.5所示；VL CDR2如SEQ ID NO.6所示；VL CDR3如SEQ ID NO.7所示；
[0009]抗体3G10的氨基酸序列为：VH CDR1如SEQ ID NO.10所示；VH CDR2如SEQ ID NO.11所示；VH CDR3如SEQ ID NO.12所示；VL CDR1如SEQ ID NO.13所示；VL CDR2如SEQ ID NO.14所示；VL CDR3如SEQ ID NO.15所示。
[0010]进一步地，抗体1A7的可变区氨基酸序列为：重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。
[0011]进一步地，抗体3G10的可变区氨基酸序列为：重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。
[0012]在优选的实施方案中，重链可变区中含有的3个CDR和/或轻链可变区中含有的3个CDR由Chothia编号系统定义。
[0013]进一步地，单克隆抗体为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体或多特异性抗体；所述抗原结合片段选自Fab、Fab
’
、(Fab
’
)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、双抗体(diabody)或单域抗体(sdAb)。
[0014]进一步地，单克隆抗体还包括：哺乳动物免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体1，所述变体1与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加；以及，哺乳动物免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体2，所述变体2与其所源自的序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换。
[0015]在本专利技术中，单克隆抗体可以包括这样的变体3，变体3与其所源自的抗体相比差异仅在于一个或多个氨基酸残基的保守置换；例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；或者与其所源自的抗体具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，且基本保留了其所源自的抗体的上述生物学功能。
[0016]进一步地，单克隆抗体的重链恒定区是IgG重链恒定区；单克隆抗体的轻链恒定区是κ轻链恒定区。
[0017]进一步地，单克隆抗体带有标记。
[0018]抗体标记的目的在于将标记物链接到抗体上，与待检测物特异性反应形成多元复合物，并借助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器对试验结果直接镜检观察或进行自动化测定。本方案中的标记并不特指某一种标记方式，具体的，可以是酶标记、生物素化标记、荧光标记、胶体金标记等；在此不做限定。
[0019]另一方面，本专利技术还提供一种所述抗胃蛋白酶原II的抗体的制备方法，包括：在允许单克隆抗体表达的条件下，培养宿主细胞；从培养的宿主细胞培养物中回收单克隆抗体。
[0020]本专利技术提供的单克隆抗体可以采用本领域已知的各种方法来制备，例如通过基因工程重组技术来获得。例如，通过化学合成或PCR扩增获得编码本专利技术抗体的重链和轻链基因的DNA分子。将所得DNA分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞。然后，在特定条件下培养转染后的宿主细胞，并表达本专利技术的抗体。
[0021]本专利技术的抗原结合片段可以通过水解完整的抗体分子获得。另外，这些抗原结合片段也可以直接由重组宿主细胞产生。比如，Fab
’
片段可以直接从宿主细胞中获得；可以将Fab
’
片段化学偶联形成F(ab
’
)2片段。另外，Fv、Fab或F(ab
’
)2片段也可以直接从重组宿主细胞培养液中直接分离得到。一般而言，本领域的普通技术人员知晓制备这些抗原结合片段的其它技术。
[0022]另一方面，本专利技术还提供一种分离的核酸分子，分离的核酸分子用于编码单克隆抗体。
[0023]另一方面，本专利技术还提供一种载体，包括上述分离的核酸分子。
[0024]进一步地，载体为克隆载体或表达载体。在优选的实施方案中，本专利技术的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体等。在优选的实施方案中，所述载体能够在受试者，例如哺乳动物，体内表达所述抗体。
[0025]另一方面，本专利技术还提供一种宿主细胞，包括分离的核酸分子或载体。所述宿主细
胞包括但不限于：原核细胞例如大肠杆菌细胞，真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞，动物细胞例如哺乳动物细胞等。在优选的实施方案中，本专利技术的宿主细胞是哺乳动物细胞，例如CHO，具体包括CHO
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K1、CHO
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S和CHO DG44。
[0026]另一方面，本专利技术还提供一种检测胃蛋白酶原II的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗胃蛋白酶原II单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为抗体3G10；所述抗体3G10的氨基酸序列为：VH CDR1如SEQ ID NO.10所示；VH CDR2如SEQ ID NO.11所示；VH CDR3如SEQ ID NO.12所示；VL CDR1如SEQ ID NO.13所示；VL CDR2如SEQ ID NO.14所示；VL CDR3如SEQ ID NO.15所示。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体3G10的可变区氨基酸序列为：重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链恒定区是IgG...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴振兴，马敏娜，赖思慧，赵晶磊，
申请(专利权)人：宁波赛珀生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：