本发明专利技术提供一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法。本发明专利技术提供的检测方法是基于不同浓度测试溶液液滴蒸发后的面积不同来检测目标物(表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂)的含量。测试溶液中，表面活性剂(待测样品表面活性剂或者脂肪酶酶解三油酸甘油酯产生的表面活性剂)含量高，对应的液滴干燥后的面积大；测试溶液中，表面活性剂含量低，对应的液滴干燥后的面积小；从而将测试溶液中表面活性剂浓度和液滴干燥面积联系起来，进而检测目标物。本发明专利技术方法在无需复杂的仪器和操作程序的情况下，实现对表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂的高通量、快速、有效检测。有效检测。
【技术实现步骤摘要】
一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法
[0001]本专利技术涉及一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，属于检测分析
技术介绍
[0002]表面活性剂是具有亲水头基和疏水尾链的两亲物质，可以使目标溶液的表面张力明显下降。由于表面活性剂分子允许定制设计官能团、电荷特性和链长，它们在传感方面有广泛的应用，包括电化学、荧光、比色和基于液晶的方法，通常将表面活性剂介导的化学和生物事件转换成可检测的信号。这些方法为生物医学诊断、食品安全、环境监测和药物筛选方面的应用提供了极为广阔的前景。在此，开发新型的表面活性剂介导的传感方法是非常有吸引力的。
[0003]液滴蒸发是一种广泛的现象，涉及许多行业和技术，如喷墨打印，DNA提取，以及生物材料的生产。溶液的表面张力随表面活性剂的链长和浓度而变化，从而导致液滴接触面积和接触角的不同。然而，这种现象很少被应用于监测生物化学相互作用，这限制了它在生物传感中的应用。因此，开发一个基于表面活性剂液滴蒸发的传感平台对于以简单、方便、经济的方式检测各种分析物是很有吸引力的。
[0004]以检测脂肪酶(Lipase)为例，脂肪酶是一种羧酸酯水解酶，可以逐渐将三油酸甘油酯水解成甘油和脂肪酸，对脂肪的分解至关重要。在正常情况下，胰腺分泌的脂肪酶主要进入肠道，用于分解甘油三酯，而进入血液中的量很少。在急性胰腺炎发生时，由于胰腺细胞坏死或细胞通透性增高，此时胰腺分泌的脂肪酶进入血液中增多，因此，在临床诊断中，测定血清脂肪酶对诊断急性胰腺炎极具参考价值。同时，脂肪酶抑制剂常用于治疗肥胖症，奥利司他是唯一被美国食品和药物管理局批准作为减肥药物的脂肪酶抑制剂。因此需要能检测脂肪酶活性抑制率的技术手段。
[0005]到目前为止，已经开发了几种检测脂肪酶及其抑制剂的分析方法，包括比色法，荧光法和酶谱法。然而，这些方法中的大多数通常需要复杂的操作程序，冗长的检测时间，或专业设备。因此，开发一个简单、方便、经济的检测脂肪酶及其抑制剂的方法是非常必要的。
技术实现思路
[0006]针对现有技术的不足，本专利技术提供一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法。本专利技术方法在无需复杂的仪器和操作程序的情况下，实现对表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂的高通量、快速、有效检测。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，包括步骤：
[0009](1)标准溶液的配制：将表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的标准品溶解于PBS
缓冲溶液中，制得不同浓度的表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的标准溶液；
[0010](2)标准曲线的测定：将不同浓度的表面活性剂的标准液、脂肪酶酶解液或脂肪酶抑制剂酶解液分别滴加至底板上，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上液滴印记的面积；根据液滴印记的面积和对应溶液浓度的对数值，绘制标准曲线；
[0011](3)待测样品含量的测定：制备待测样品的测试溶液，滴加至底板上，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上液滴印记的面积；然后根据步骤(2)中的标准曲线计算得到待测样品中表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的含量。
[0012]根据本专利技术优选的，步骤(1)中，表面活性剂为十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)、十二烷基硫酸钠(SDS)或十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；表面活性剂的标准溶液的浓度取值范围为0.01～1mmol/L。
[0013]根据本专利技术优选的，步骤(1)中，脂肪酶抑制剂为奥利司他；脂肪酶抑制剂的标准溶液的浓度取值范围为0.001～100μmol/L。
[0014]根据本专利技术优选的，步骤(1)中，脂肪酶的标准溶液的浓度取值范围为5～50000ng/mL。
[0015]根据本专利技术优选的，步骤(1)中，PBS缓冲溶液的pH为7
‑
8，优选为7.4。
[0016]根据本专利技术优选的，步骤(2)中，不同浓度的脂肪酶酶解液的制备方法包括步骤：分别向步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶的标准溶液中加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到不同浓度的脂肪酶酶解液。
[0017]优选的，三油酸甘油酯的体积为脂肪酶的标准溶液的体积的0.01～0.20％。本专利技术三油酸甘油酯为过量，以使在本专利技术脂肪酶浓度和孵育条件下不能完全反应。
[0018]根据本专利技术优选的，步骤(2)中，不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液的制备方法包括步骤：分别向步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶抑制剂的标准溶液中加入脂肪酶，溶解后得到混合液；混合液在20～60℃下孵育25～55min，得到孵育液；然后加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液。
[0019]优选的，混合液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL。
[0020]优选的，三油酸甘油酯的体积为孵育液体积的0.01～0.20％。
[0021]根据本专利技术优选的，步骤(2)中，每种浓度下的表面活性剂的标准液、脂肪酶酶解液或脂肪酶抑制剂酶解液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均值；然后根据液滴印记的平均面积和对应溶液浓度的对数值，绘制标准曲线。
[0022]根据本专利技术优选的，步骤(2)中，根据液滴印记的面积计算脂肪酶活性，然后根据脂肪酶活性和对应溶液浓度的对数值绘制脂肪酶抑制剂的标准曲线。
[0023]根据本专利技术，步骤(3)中，待测样品为表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的固体样品或液体样品。
[0024]根据本专利技术优选的，步骤(3)中，待测样品为表面活性剂时，测试溶液的制备方法包括步骤：将固体待测样品使用PBS缓冲溶液溶解即得；或者，液体待测样品经PBS缓冲溶液稀释即得；或者，液体待测样品直接作为测试溶液；所述PBS缓冲溶液的pH为7
‑
8，优选为7.4。
[0025]根据本专利技术优选的，步骤(3)中，待测样品为脂肪酶时，测试溶液的制备方法包括
步骤：将固体待测样品使用PBS缓冲溶液溶解得待测样品溶液；或者，液体待测样品经PBS缓冲溶液稀释得待测样品溶液；或者，液体待测样品直接作为待测样品溶液；然后，加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到测试溶液。
[0026]优选的，三油酸甘油酯的体积为待测样品溶液体积的0.01～0.20％。
[0027]根据本专利技术优选的，步骤(3)中，待测样品为脂肪酶抑制剂时，测试溶液的制备方法包括步骤：将固体待测样品溶于二甲基亚砜(DMSO)中，随后用PBS缓冲溶液稀释得到待测样品溶液；或者，将液体待测样品用PBS缓冲溶液稀释得到待测样品溶液；或者，将液体待测样品直接作为待测样品溶液；加入脂肪酶，溶解后得到混合液；混合液在20～60℃下孵育25～55min，得到孵育液；然后加本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，包括步骤：(1)标准溶液的配制：将表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的标准品溶解于PBS缓冲溶液中，制得不同浓度的表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的标准溶液；(2)标准曲线的测定：将不同浓度的表面活性剂的标准液、脂肪酶酶解液或脂肪酶抑制剂酶解液分别滴加至底板上，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上液滴印记的面积；根据液滴印记的面积和对应溶液浓度的对数值，绘制标准曲线；(3)待测样品含量的测定：制备待测样品的测试溶液，滴加至底板上，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上液滴印记的面积；然后根据步骤(2)中的标准曲线计算得到待测样品中表面活性剂、脂肪酶或脂肪酶抑制剂的含量。2.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，包括以下条件中的一项或多项：i、表面活性剂为十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)、十二烷基硫酸钠(SDS)或十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；表面活性剂的标准溶液的浓度取值范围为0.01～1mmol/L；ii、脂肪酶抑制剂为奥利司他；脂肪酶抑制剂的标准溶液的浓度取值范围为0.001～100μmol/L；iii、脂肪酶的标准溶液的浓度取值范围为5～50000ng/mL；iv、PBS缓冲溶液的pH为7
‑
8，优选为7.4。3.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，不同浓度的脂肪酶酶解液的制备方法包括步骤：分别向步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶的标准溶液中加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到不同浓度的脂肪酶酶解液；优选的，三油酸甘油酯的体积为脂肪酶的标准溶液的体积的0.01～0.20％。4.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液的制备方法包括步骤：分别向步骤(1)制得的不同浓度的脂肪酶抑制剂的标准溶液中加入脂肪酶，溶解后得到混合液；混合液在20～60℃下孵育25～55min，得到孵育液；然后加入三油酸甘油酯(GT)，在20～60℃下孵育25～55min，得到不同浓度的脂肪酶抑制剂酶解液；优选的，混合液中脂肪酶的浓度为50000ng/mL；优选的，三油酸甘油酯的体积为孵育液体积的0.01～0.20％。5.根据权利要求1所述基于液滴蒸发检测表面活性剂、脂肪酶及脂肪酶抑制剂含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，包括以下条件中的一项或多项：i、每种浓度下的表面活性剂的标准液、脂肪酶酶解液或脂肪酶抑制剂酶解液多次滴加至底板上以形成多个球形液滴，当底板上的液滴完全蒸发后，测试底板上各液滴印记的面积，取平均...
【专利技术属性】
技术研发人员：于丽，牟重阳，胡琼政，程素盼，刘金鹏，王正通，董心凤，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：
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