用于制备含有脂质体的液体的方法和装置以及制备的液体制造方法及图纸

本发明专利技术涉及制备含有脂质体的液体的方法和装置。该方法的特征在于，将第一液体和第二液体引导到微混合器中并引导到微混合器的出口，其通过来自至少一个气体源的气体压力，以及任选地还通过至少一个用于输送液体的装置进行，其中调整液体的总流速，使得微混合器的出口的总流速至少为10mL/min。该方法和装置允许以简单和可重复的方式在工业规模上制备含有具有窄尺寸分布的脂质体的液体。本发明专利技术还涉及含有具有窄尺寸分布的脂质体的液体及其用途。途。途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于制备含有脂质体的液体的方法和装置以及制备的液体
[0001]提供了用于制备含有脂质体的液体的方法和装置。该方法的特征在于，将第一液体和第二液体引导到微混合器中并直至微混合器的出口，其通过来自至少一个气体源的气体压力，以及任选地通过至少一个用于输送液体的装置进行，其中调整液体的总流速使得其在微混合器的出口处至少为10mL/min。该方法和装置允许以简单和可重复的方式在工业规模上提供含有具有窄尺寸分布的脂质体的液体。此外，还提供了含有具有窄尺寸分布的脂质体的液体及其用途。
[0002]脂质体是世界上最成熟的用于制药的纳米传输体系统。已经在1995年被美国食品和药物管理局批准为第一个“纳米药物”。
[0003]目前，纳米脂质体是以多步骤批量方法进行工业化生产的。在第一步中，脂质，主要是大的多层脂质体(MLV)被水化。在第二步中，进行“缩小尺寸”以获得直径小于200nm的纳米脂质体。为此，通过具有相应纳米级孔隙的膜进行高压挤出(例如：的制备)。或者，进行高压均质处理(例如：的制备和用于化妆品的纳米脂质体)。
[0004]挤出需要在高温下进行，因为MLV脂质双层需要有足够的柔性以允许改变形状，这是实现缩小尺寸的必要条件。为实现所需的窄尺寸分布，多次通过挤出膜是必要的。该程序很耗时。此外，这种程序仅限于耐热的脂质原料和相应的结合或包封物质。此外，挤出法涉及到膜上材料的损失。此外，膜的堵塞(阻塞)需要经常更换膜和损失潜在的有价值的物质，如脂质和活性成分，这使提供带有脂质体的无菌液体的制备方法的实施成本增加。常用的聚碳酸酯膜也因孔径尺寸、孔的均匀性和表面润湿性等不同特性而有批次波动，这导致工艺的可重复性差。
[0005]另一方面，高压均质化往往导致分布的尺寸太宽，包括产生大比例的非常小的脂质体。此外，高压均质化还必须在高温下进行。
[0006]需要快速、简单、大规模制备含有纳米尺寸的脂质体的无菌液体的方法。此外，还需要不耐热的(热敏性)脂质和药物的配制方法。还需要用于下一代药物例如基于核酸的免疫治疗药物的平台技术。
[0007]WO2017/103268A1公开了制备纳米颗粒的连续方法。其中公开的方法不适合大规模生产含有脂质体的无菌液体。
[0008]EP1337322B1公开了制备脂质囊泡的方法。该方法不是严格意义上的微流控方法，并且在制备脂质体时使用如此复杂的API(如超疏水剂)方面受到限制。此外，关于所制备的脂质体的尺寸分布所达到的狭窄程度，仍有改进的余地。
[0009]WO2014/172045A1公开了大规模工业化制备无菌脂质体溶液的方法。然而，其重现性是有问题的，因为制备是通过平台进行的，其中必须确保平台的不同通道绝对均匀分布，这并不容易。
[0010]在此基础上，本专利技术的问题是提供用于制备含有脂质体的液体的方法和装置，其不具有现有技术的缺点。特别是，该方法和装置应能以简单和可重复的方式在工业规模上提供含有尺寸分布较窄的脂质体的液体，特别是无菌液体。
[0011]该问题通过具有权利要求1特征的方法、具有权利要求13特征的装置、具有权利要
求16特征的液体和具有权利要求20和21特征的用途得到了解决。从属权利要求显示了有利的发展。
[0012]根据本专利技术，提供了用于制备含有脂质体的液体的连续方法，其包括以下步骤：
[0013]a)在第一容器中提供第一液体，其中第一液体包含至少一种脂质或由至少一种脂质组成；
[0014]b)在第二容器中提供第二液体，其中第二液体包含水或由水组成；
[0015]c)将第一液体沿着第一流体管线引导到微混合器的第一入口中，并以流的形式引导到直至微混合器的出口；
[0016]d)将第二液体沿着第二流体管线引导到微混合器的第二入口中，并以与第一液体相邻的流的形式引导到直至微混合器的出口；
[0017]其中第一液体和第二液体在微混合器内混合，使得在微混合器的出口处排出含有脂质体的液体；
[0018]其特征在于，将第一液体和第二液体引导到微混合器中并直至微混合器的出口通过来自至少一个气体源的气体压力，以及任选地通过至少一个用于输送液体的装置(例如，磁力驱动的泵，优选地选自齿轮泵、齿轮环泵或离心泵)进行，其中调整液体的总流速，使其在微混合器的出口至少为10mL/min。
[0019]根据本专利技术，术语“脂质体”被定义为脂质体、脂质复合物和脂质纳米颗粒，它们可以装载物质(如活性成分)，其中“装载”被定义为脂质颗粒内的空腔和/或脂质颗粒的膜(优选两者)包含或含有物质(如活性成分)。脂质体(即脂质体、脂质复合物和/或脂质纳米颗粒)的直径特别为20nm至<200nm或>200nm至<500nm，优选40nm至150nm或250nm至400nm，特别优选60nm至120nm或300nm至350nm。直径可以通过动态光散射和/或低温透射电子显微镜确定，优选通过低温透射电子显微镜测量。
[0020]术语“微混合器”优选定义为所有混合原理是基于微混合器的混合原理的混合器，包括那些流体通道的尺寸(即横截面)大于微米范围(1μm到1000μm)的混合器。通过根据本专利技术的方法，可以在工业规模上以简单和可重复的方式提供含有具有窄尺寸分布的脂质体的液体。该方法也适用于确保可以提供含有脂质体的无菌液体，因为液体输送是通过来自至少一个气体源的气体压力进行的(任选地还通过至少一个用于液体输送的装置)。任选的用于液体输送的装置被布置在至少一个气体源的下游，这可以确保其与液体接触的表面是无菌的。通过向外密封该方法中使用的部件(例如流体管线和微混合器)，还可以确保液体不与微生物和/或病毒接触。
[0021]在微混合器中混合液体可以高度控制脂质体的结构，即可以获得良好的尺寸控制，并且可以实现非常窄的尺寸分布。另外的优点是，该方法可以扩大规模而不必重新进行调整，即在各个微混合器的“数增放大”过程中不必产生均匀的流量分布，这对微混合器来说通常是必要的(“外部数增放大”)和/或不必改变混合器类型。当扩大方法的规模时，例如可以使用同一类型的更大的混合器(“可扩展的微混合器”)(例如用Caterpillar 600代替Caterpillar 300，用StarLam 300代替StarLam 30)，即改变程序或系统配置所需的努力因此大大降低或完全消除了。对于StarLam微混合器来说，这种增加也被称为“内部数增放大”。这是一个关键的优势，特别是对于GMP方法。可扩展的微混合器，根据本专利技术可作为混合器或微混合器使用，其特点在于，在扩展的情况下，不需要任何额外的分配线和歧管。可
扩展的微混合器例如是斜升/斜降分裂和重组混合器，这里特别是上述的履带型微混合器(例如在Hermann等人，Chemical Engineering Journal,vol.334,p.1996
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2003中公开的)、StarLam型微混合器(例如在DE19927556C2中公开的)和/或气旋混合器(例如在EP1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备含有脂质体的液体的连续方法，其包括以下步骤：a)在第一容器中提供第一液体，其中第一液体包含至少一种脂质或由至少一种脂质组成；b)在第二容器中提供第二液体，其中第二液体包含水或由水组成；c)将第一液体沿着第一流体管线引导至微混合器的第一入口中，并以流的形式引导到直至微混合器的出口；d)将第二液体沿着第二流体管线引导至微混合器的第二入口中，并以与第一液体相邻的流的形式引导到直至微混合器的出口；其中，第一液体和第二液体在微混合器内混合，使得在微混合器的出口处排出含有脂质体的液体；其特征在于，将第一液体和第二液体引导至微混合器中并直至微混合器的出口是通过来自至少一个气体源的气体压力来进行的，任选地，其还通过至少一种用于输送液体的装置进行，其中调整液体的总流速使其在微混合器的出口处至少为10mL/min。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在第一液体和第二液体到达微混合器的出口的途中与其接触的所有表面i)是无菌的；和/或ii)是向外流体密封的，优选形成封闭的系统；和/或iii)不具有能够收集残留物的区域；和/或iv)不包含玻璃或不由玻璃组成。3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，至少一个气体源i)包含气体容器或由气体容器组成；和/或ii)与第一容器具有第一流体连通，并且与第二容器具有第二流体连通；和/或iii)含有不含氧的气体，其中气体优选地包含选自氮气、惰性气体、及其混合物的气体，或由选自氮气、惰性气体、及其混合物的气体组成。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，i)通过气体源的恒定气体压力调整总流速，任选地还通过增加压力的装置调整总流速，所述压力为<12巴，优选<8巴，特别优选<6巴，最优选大于1巴至6巴，特别是1.5巴至5巴；和/或ii)通过至少一个流量调节器，优选至少一个第一流量调节器和至少一个第二流量调节器使总流速保持恒定，其中特别优选地，至少一个第一流量调节器布置在第一流体连通处，并且至少一个第二流量调节器布置在第二流体连通处；和/或iii)调整微混合器的出口处的总流速，使得总流速≥80mL/min，优选≥320mL/min，特别优选≥1280mL/min，最优选≥2800mL/min，特别是≥5120mL/min；和/或iv)调整微混合器的出口处的总流速，使得总流速/微混合器的出口的横截面积≥20ml/(min
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mm2)，优选≥100ml/(min
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mm2)，特别优选≥200ml/(min
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mm2)，最优选≥400ml/(min
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mm2)，任选地≥1000ml/(min
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mm2)，特别是100ml/(min
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mm2)至400ml/(min
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mm2)；和/或v)调整总流速，使得第二液体的流速与第一液体的流速之比为<8:1，优选<7:1，特别优选<6:1，最优选<5:1，特别是≤4:1；和/或
vi)总流速的流速变化小于总流速的1％，优选小于总流速的0.1％；和/或vii)配置总流速，使得流的雷诺数为>80至<1200，优选>120至<1000。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，微混合器i)具有一个或多于一个斜向或横向延伸至流动方向的混合结构，优选地，所述结构适用于使第一液体和/或第二液体斜向或横向偏转至流动方向；和/或ii)包含不锈钢或由不锈钢组成；和/或iii)能够被高压灭菌；和/或iv)能够被分离为至少两部分，用于清洗微混合器的流体通道；和/或v)是“分裂和重组”微混合器或“StarLam”微混合器，其中微混合器优选“斜升/斜降”微混合器，特别优选“履带”型微混合器。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，第一液体i)包含总浓度>30g/L、优选>50g/L、特别优选>80g/L、最优选>150g/L、特别是160g/L至400g/L的脂质；和/或ii)包含至少一种磷脂，优选至少一种两性离子型磷脂，其中磷脂优选地选自磷脂酰胆碱、DSPC、DOPE、DOPC、DSPE、HSPC、及其混合物，其中至少一种磷脂或其混合物的浓度优选>20g/L，优选>40g/L，特别优选>80g/L，最优选>160g/L，特别是210g/L至400g/L；和/或iii)包含至少一种PEG化的脂质，优选DSPE
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PEG2000和/或DMG
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PEG2000，其中相对于第一液体中至少一种磷脂的摩尔量，PEG化的脂质的浓度优选为15摩尔％至40摩尔％，特别优选31摩尔％至35摩尔％；和/或iv)包含至少一种脂质，优选包含至少一种阳离子型脂质，优选选自DOTMA、DOTAP、DDAB、DODMA、及其混合物的至少一种脂质，其中至少一种脂质或其混合物的浓度优选>10g/L，优选>20g/L，特别优选>40g/L，最优选>80g/L，特别是90g/L至350g/L；和/或v)包含至少一种类脂质，其中相对于第一液体中至少一种磷脂的摩尔量，类脂质的浓度优选为200摩尔％至1000摩尔％，特别优选300摩尔％至800摩尔％；和/或vi)包含胆固醇；和/或vii)不含有非离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂和/或两性表面活性剂，优选不含有任何表面活性剂；和/或viii)包含至少一种有机溶剂或不包含有机溶剂，其中有机溶剂优选为有机的水溶性溶剂，特别优选选自醇类，特别优选乙醇、1
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丙醇、2
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丙醇和/或甲醇、丙酮、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、二甲亚砜的溶剂，特别是乙醇；和/或ix)是脱气的。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，第二液体i)包含缓冲物质，优选选自乙酸盐、铵盐、柠檬酸盐、及其组合的缓冲物质，特别优选乙酸钙和/或硫酸铵，其中缓冲物质的浓度优选为5mM至300mM，特别优选8mM至250mM；和/或ii)是脱气的。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，液体中的脂质体被装载至少一种活性物质，其中装载优选在第一微混合器中进行，在第一微混合器下游的另外的混合器中进行，在组装脂质体后进行和/或在纯化脂质体后进行，特别地，其中至少一种活性物质
i)包含至少一种有机活性物质或由至少一种有机活性物质组成，优选用于治疗疾病的活性成分，特别优选选自维生素、蛋白质、肽、脂质、DNA、RNA、质量≤500Da的有机分子、及其混合物的分子，特别是选自超疏水...

【专利技术属性】
技术研发人员：里贾纳，
申请(专利权)人：弗劳恩霍夫应用研究促进协会，
类型：发明
国别省市：